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南通熒光素酶D-熒光素鉀鹽使用說(shuō)明

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-08-10

    可用于需要低檢測(cè)限的測(cè)定具有用于研究基因調(diào)控和功能的快速,簡(jiǎn)單且均一的生物發(fā)光測(cè)定法與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基的使用兼容高斯熒光素酶近年來(lái),,其他熒光素酶(例如高斯熒光素酶)的使用有所增加,,因?yàn)檫@些報(bào)告基因較小,,并且不需要ATP的存在。高斯熒光素酶是一種20kD的蛋白質(zhì),,可通過(guò)氧氣催化腔腸素氧化,,產(chǎn)生光。來(lái)自于海洋足類(lèi)高斯氏菌的生物發(fā)光酶在表達(dá)后可有效地從哺乳動(dòng)物細(xì)胞中分泌出來(lái),。Amplite?高斯熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒使用專(zhuān)有的發(fā)光配方來(lái)定量細(xì)胞培養(yǎng)基中的熒光素酶活性,。當(dāng)該試劑與高斯熒光素酶相互作用時(shí),產(chǎn)***光產(chǎn)物,,該發(fā)光產(chǎn)物提供強(qiáng)發(fā)光,。Amplite高斯熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定試劑盒特點(diǎn):提供了與HTS液體處理儀器兼容的所有基本組件它們具有高靈敏度,可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式進(jìn)行半衰期為一小時(shí)的“輝光型”信號(hào)在大量檢測(cè)板之間提供一致的信號(hào)與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基兼容海腎熒光素酶海腎螢光素酶是一種從海桑(Renillareniformis)分離的36kDa蛋白,。與螢火蟲(chóng)熒光素酶相比,,海腎熒光素酶的底物和輔因子要求不同。海腎熒光素酶在氧氣存在下使用腔腸素,,產(chǎn)生480nm的藍(lán)光,。與螢火蟲(chóng)螢光素酶類(lèi)似。D-熒光素鉀鹽測(cè)試需要哪些必備條件,?南通熒光素酶D-熒光素鉀鹽使用說(shuō)明

    后者能夠易溶于水或緩沖液中,,使用方便,溶劑無(wú)毒性,,特別適合體內(nèi)實(shí)驗(yàn),。配成溶液后的這三種產(chǎn)品,在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒(méi)有實(shí)質(zhì)性的差別,。產(chǎn)品性質(zhì)運(yùn)輸和保存運(yùn)輸條件:4℃冰袋運(yùn)輸,;短期保存:4℃干燥避光長(zhǎng)期保存:-20℃干燥避光母液保存:-20℃避光有效期長(zhǎng)期保存:有效期一年工作液:先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測(cè)1)用無(wú)菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,配制成30mg/mL的儲(chǔ)存液(100-200×),,混勻,。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融,。2)用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3)去除細(xì)胞培養(yǎng)基,。4)待圖像分析前,,向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,37℃孵育5-10min,,然后進(jìn)行圖像分析,。2.***成像分析1)用無(wú)菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲(chǔ)存液,,混勻,。2)用μm濾膜過(guò)濾除菌,。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融,。3)腹腔注射(.),按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射,,以小鼠為例,,每只小鼠體重假定20g,每只小鼠用量3mg,;4)注射入體內(nèi)10-15min(待光信號(hào)達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期)后進(jìn)行成像分析,。注:建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線(xiàn),從而確定更高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期,。 南通D-熒光素鉀鹽應(yīng)用D-熒光素鉀鹽的發(fā)射波長(zhǎng)是多少,?

    2)按10μL/g體重的濃度向每支小鼠注射相應(yīng)量的15mg/mL熒光素溶液;3)腹腔注射10-15min后進(jìn)行成像分析,。(對(duì)每只動(dòng)物模型做熒光素動(dòng)力學(xué)研究以確定峰值信號(hào)獲取時(shí)間)Firefly,freeacid/D-螢火蟲(chóng)熒光素分子式:C11H8N2O3S2分子量:g/mol外觀(guān):白色至淺黃色粉末溶解:,,形成近乎無(wú)色至淺黃色的清夜保存:-15°C避光應(yīng)用:1)活細(xì)胞、組織或生物體內(nèi)luc標(biāo)記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達(dá)的成像分析,;2)***用于報(bào)告基因分析,,免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測(cè)分析D-熒光素也常用于體外研究,包括熒光素酶和ATP水平分析,;報(bào)告基因分析;高通量測(cè)序和各種污染檢測(cè),。目前有三種產(chǎn)品形式:D-熒光素(游離酸),,D-熒光素鹽(鈉鹽和鉀鹽)。主要差別在于溶解特性:前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,,除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液,,可溶于甲醇和DMSO;后者易溶于水或緩沖液中,,使用方便,,溶劑d0926aa8-0148-40da-80fa-f65性,特別適合體內(nèi)實(shí)驗(yàn),。配成溶液后的這三種產(chǎn)品,,在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒(méi)有實(shí)質(zhì)性的差別。相關(guān)列表魯米諾/3-氨基苯二甲酰肼/發(fā)光氨異魯米諾/4-氨基鄰苯二甲酰肼吖啶酯DMAE-NHS吖啶酰肼NSP-SA-ADH吖啶酯ME-DMAE-NHS哌嗪-N,N'-二,。

    附錄ⅧB(niǎo)),,與標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液制成的對(duì)照液比較,不得更濃(),。干燥失重取本品,,在105℃干燥至恒重,,減失重量不得過(guò)%(附錄ⅧL)。鋅鹽取本品,,加氯化鈉的飽和水溶液10ml溶解后,,加稀鹽酸2ml,搖勻,,濾過(guò),,濾液中加亞鐵**鉀試液1ml,不得發(fā)生渾濁,。5鑒別方法編輯(1)取本品的水溶液(1→2000)1滴,,點(diǎn)于濾紙上,即生成黃色斑點(diǎn),,趁濕置溴蒸氣中,,1分鐘后再使與氨蒸氣接觸,斑點(diǎn)即變?yōu)樯罘奂t色,。(2)本品的水溶液顯強(qiáng)烈的熒光,,用大量的水稀釋后仍極明顯;但加酸使成酸性后,,熒光即消失,;再加堿使成堿性,熒光又顯出,。(3)本品熾灼灰化后顯鈉鹽的鑒別反應(yīng)(附錄Ⅲ),。6含量測(cè)定編輯取本品約,精密稱(chēng)定,,加水20ml溶解后,,加稀鹽酸5ml使熒光素析出,用丁醇-氯仿(1:1)提取4次,,每次20ml,,合并提取液,用水10ml洗滌,,洗液再用異丁醇-氯仿(1:1)5ml振搖提取,,合并提取液,置105℃恒重的容器中,,在水浴上通風(fēng)蒸發(fā)至干,,殘?jiān)靡掖?0ml溶解后,再置水浴上蒸干,,并在105℃干燥至恒重,,精密稱(chēng)定,殘?jiān)亓颗c相乘,即得供試量中含有C20H10Na2O5的重量,。熒光素鈉是一種有機(jī)化合物,,分子式為C20H10Na2O5,橙紅色粉末,,無(wú)氣味,,有吸濕性;易溶于水,,溶液呈黃紅色,,并帶極強(qiáng)的黃綠色熒光。南京翌科生物科技有限公司D-熒光素鉀鹽比較靠譜,。

    并實(shí)現(xiàn)了在非常高通量的應(yīng)用中使用報(bào)告基因檢測(cè),。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展,現(xiàn)在已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測(cè)方法,。ATP是細(xì)胞健康的重要指標(biāo),,這使得CellTiter-Glo?能有效測(cè)定細(xì)胞活力,尤其是在高通量應(yīng)用中,。該檢測(cè)原理還促進(jìn)了其它ATP檢測(cè)平臺(tái)的誕生,,尤其是用于研究ATP酶(如激酶)的Kinase-Glo?(2004年)和ADP-Glo?(2009年)酶檢測(cè)系統(tǒng)。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測(cè)除了可以利用螢火蟲(chóng)螢光素酶反應(yīng)測(cè)定樣品中螢光素酶或ATP的含量外,,還可以檢測(cè)底物(luciferin)濃度的變化,。通過(guò)將luciferin與可被不同酶類(lèi)識(shí)別并產(chǎn)生反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)偶聯(lián),能對(duì)這些酶進(jìn)行靈敏的“加樣-讀數(shù)”檢測(cè),,如半胱天冬酶(caspase)和其它蛋白酶,。[1]2007One-Glo?螢光素酶檢測(cè)系統(tǒng)隨著對(duì)螢火蟲(chóng)螢光素酶化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)一步了解以及Promega生物學(xué)家和化學(xué)家團(tuán)隊(duì)的建立,一種改進(jìn)的luciferin面世,,能更好地用于典型的報(bào)告基因檢測(cè)應(yīng)用,。這種新的底物——fluoroluciferin,是新型底物開(kāi)發(fā)的一個(gè)早期實(shí)例,。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進(jìn)化和新型底物開(kāi)發(fā)方面的經(jīng)驗(yàn),研究人員從蝦的螢光素酶改造設(shè)計(jì)出一種新型螢光素酶報(bào)告基因,,即NanoLuc?螢光素酶,。D-熒光素鉀鹽短期保存條件是4℃干燥避光。南通熒光素酶D-熒光素鉀鹽使用說(shuō)明

南京翌科生物科技有限公司D-熒光素鉀鹽測(cè)試價(jià)格,。南通熒光素酶D-熒光素鉀鹽使用說(shuō)明

    請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。8)本產(chǎn)品只作科研用途!D-熒光素鉀鹽是熒光素酶的水溶性底物,,存在于多種發(fā)光生物體中,。在ATP和熒光素酶的催化作用下,D-熒光素鉀被氧化,產(chǎn)生藍(lán)綠色的光(560nm),,當(dāng)?shù)孜镞^(guò)量時(shí),,產(chǎn)生的Chemicalbook光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)。編碼熒光素酶的Luc基因是植物,、哺乳動(dòng)物細(xì)胞的常用報(bào)告基因,。由于沒(méi)有背景干擾,因此可以很容易地檢測(cè)出低至,。用途D-熒光素鉀鹽是一類(lèi)在生物體中發(fā)現(xiàn)的能引起生物發(fā)光的雜環(huán)化合物,,如螢火蟲(chóng)。在ATP存在下,,螢光素酶將其氧化脫羧后會(huì)發(fā)光,。化學(xué)研究中可用于熒光素酶的基板,。生物活性D-Luciferin是螢火蟲(chóng)熒光素酶的底物,。體外研究D-luciferinisthenaturalsubstrateoftheenzymeluciferase(Luc),μM.體內(nèi)研究Bioluminescenceimaging(BLI)usingthefireflyluciferase(Fluc)(5,10,15,and20min)μLofD-luciferin(intraperitoneallyorintravenously)stocksolutionpergramofbodyweight:normally~200μLfora20gmouseforastandard150mg/(eitherPotassiumorSodiumSalt)atroomtemperatureanddissolveindPBS。南通熒光素酶D-熒光素鉀鹽使用說(shuō)明