這是一種小分子（19kDa）單體酶，具有獨特的底物，其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍,。這種新型的報告基因有著***的應(yīng)用前景,，為進一步的技術(shù)開發(fā)奠定了基礎(chǔ),。[1]2015NanoBRET?技術(shù)NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質(zhì)標(biāo)簽的理想特征,。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（BRET）的供體,。一項針對各種能量受體熒光基團的深入研究發(fā)現(xiàn),，紅色光譜中的可選擇性有助于消除與BRET測定相關(guān)的一些挑戰(zhàn),?？蓪⑦@些熒光基團添加到蛋白質(zhì)配基等分子中以測量靶蛋白的結(jié)合，或與HaloTag?配基耦聯(lián)以進行活細胞中蛋白質(zhì)：蛋白質(zhì)相互作用的檢測,。[1]2016NanoBiT?技術(shù)隨著NanoLuc?的誕生,，Promega的科學(xué)家努力將該報告基因改造為多亞基系統(tǒng)，即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?,。該系統(tǒng)由兩部分組成：11個氨基酸的小標(biāo)簽和一個更大,，更精細的NanoLuc?亞基，LgBiT,。這兩部分結(jié)構(gòu)互補結(jié)合,，重組為一個明亮的螢光素酶。這些亞基的親和力可以和SmBiT肽一樣低,，從而可以進行蛋白質(zhì)相互作用的測定,；也可以和HiBiT一樣高，從而允許自我組裝,。[1]2017HiBiT?技術(shù)基于NanoBiT?系統(tǒng)的研究,。D-熒光素鉀鹽檢測是個人合作嗎？宿遷體外研究D-熒光素鉀鹽保質(zhì)期

    GT-NHSCy3-NHS酯Cy7-NHS酯5-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素-NHS酯5(6)-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素D熒光素鈉鹽D-Luciferin,SodiumSaltD-熒光素鉀鹽D-Luciferin,PotassiumSaltD-熒光素螢火蟲,，游離酸D-LuciferinFirefly,freeacid螢火蟲熒光素酶fireflyluciferase海腎熒光素酶Renillaluciferase天然腔腸熒光素Coelenterazineh腔腸素hCoelenterazinef腔腸素fCoelenterazineh/腔腸素h腔腸熒光素活題成像用D-luciferin,potassiumsalt熒光素鉀鹽介紹一,、活題成像技術(shù)簡介活題生物發(fā)光成像技術(shù)能夠讓研究人員直接快速的測量各種哎癥模型中腫大的瘤的生長、轉(zhuǎn)移以及對藥物的反應(yīng),。在藥效學(xué)評價方面,，熒光素酶哎癥模型可用于哎癥體內(nèi)用藥在整體動物水平上進行長期療效跟蹤觀察。利用無創(chuàng)傷活題成像對哎細胞生長的檢測,，可對哎癥治的好之前和過程中的哎細胞的變化進行實時觀測和評估,。熒光素酶的發(fā)光是生物發(fā)光，不需要激發(fā)光,，但需要底物熒光素(D-Luciferin),。熒光素酶的底物熒光素，約280道爾頓,。熒光素的水溶性和脂溶性都非常好,，很容易穿透細胞膜和血腦屏障。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進入小鼠體內(nèi)的,，約一分鐘就可以擴散到小鼠全身,。熒光素。gfp熒光質(zhì)粒D-熒光素鉀鹽運輸條件是4℃冰袋運輸。

    我們將與LgBiT具有極強親和作用的,。HiBiT作為一種易于檢測且具有高靈敏度的蛋白質(zhì)標(biāo)簽,，具有多種功能,，例如當(dāng)與基于CRIPSR的標(biāo)簽一起使用時,，可以創(chuàng)建內(nèi)源性報告基因模型。[1]2020Lumit?技術(shù)隨著NanoBiT?技術(shù)的發(fā)展,，人們認(rèn)識到可以利用該系統(tǒng)通過結(jié)合免疫測定的組分檢測多種分析物,。由此產(chǎn)生的平臺（現(xiàn)稱為“Lumit”）提供了具有高靈敏度的簡化免疫檢測法。螢光素酶（英語：Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱,，其中**有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲體內(nèi)的螢光素酶,。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中，熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化,，有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷（ATP）,。沒有螢光素酶的情況下，螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,，而鈣離子的存在常?？梢赃M一步加速反應(yīng)（與肌肉收縮的情況相似）。螢光生成反應(yīng)通常分為以下兩步：螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸（luciferyladenylate）+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧螢光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,，幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光,。與之形成鮮明對比的是人類使用的白熾燈，只有約10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,，剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M,。螢光素或螢光素酶不是特定的分子。

    Q：熒光素酶作為報告基因相比于熒光蛋白有哪些優(yōu)勢,？Luciferase的靈敏度相比于GFP提高10-100倍以上,，同時具有更寬的動態(tài)范圍，便于數(shù)值分析比較,，不需要熒光顯微鏡,，而且在***實驗中其熒光穿透性高于EGFP等熒光蛋白，同時由于沒有內(nèi)源活性,、其本底信號很低,。而GFP等熒光蛋白相比于熒光素酶的優(yōu)勢在于可以進行失蹤定位，并且其觀測不需裂解細胞,，方便進行適時觀察,。Q：海腎熒光素酶和螢火蟲熒光素酶相比，相對活性如何,？在氧,、鎂和ATP的存在下，螢火蟲熒光素酶作用于甲蟲熒光素，而來源于海洋腔腸（Renillareniformis)的熒光素酶在氧的存在下作用于海腎熒光素,。雙報告基因技術(shù)（Dual-reporterassays）,結(jié)合了螢火蟲熒光素酶測試和海腎熒光素酶測試,。Q：雙熒光素酶報告基因?qū)嶒炥D(zhuǎn)染效率很低而且復(fù)孔重復(fù)不出來是什么原因？轉(zhuǎn)染效率低的話可以從三個方面改善,，首先要確保細胞狀態(tài)是好的,，通常我們選出處于分裂期的細胞，另外陽性對照您可以選擇過表達的熒光蛋白質(zhì)粒,，還有就是DNA的質(zhì)量尤為重要,，更好是先酶切驗證。這個實驗檢測結(jié)果很靈敏,，有一定差異是正常的,，通常只要確保它在一個數(shù)量級之內(nèi)即可。如果差異超出這個范圍可以從兩方面改善,，一是記住保持樣本的均一性,。做D-熒光素鉀鹽的哪家便宜。

    熒光素鈉[1],，橙紅色粉末,，無氣味，有吸濕性,；易溶于水,，溶液呈黃紅色，并帶極強的黃綠色熒光,，酸化后消失,，中和或堿化后又出現(xiàn)，微溶于乙醇,；比較大吸收波長(水),。基本信息藥品名稱熒光素鈉拼音名Yingguangsuna英文名FLUORESCEINSODIUM來源(分子式)與標(biāo)準(zhǔn)本品為9-(鄰羧基苯基)-6-羥基-3H-噸-3-酮二鈉鹽,。按干燥品計算,，含C20H10Na2O5不得少于。類別診斷用藥,。劑量滴眼2%溶液貯藏密封保存,。制劑熒光素鈉注射液2化學(xué)性質(zhì)編輯中文名稱：熒光素鈉中文別名：熒光黃鈉;熒光橙紅鈉;熒光素二鈉英文名稱：FluoresceindisodiumsaltCAS號：518-47-8[2]熒光素鈉分子式：C20H10Na2O5分子量：等級：BSMDL號：MFCD00167039Beilstein號：3833041EC號：208-253-0熒光素鈉[1]3性狀描述編輯本品為橙紅色粉末；無臭,，幾乎無味,；有引濕性。本品在水中易溶,，在乙醇中略溶,。橙紅色粉末,，無氣味，有吸濕性,；易溶于水,，溶液呈黃紅色，并帶極強的黃綠色熒光,，酸化后消失,，中和或堿化后又出現(xiàn)，微溶于乙醇,；比較大吸收波長(水),。4檢查資料編輯氯化物取本品,，分取溶液10ml,，依法檢查（附錄ⅧA），與標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液制成的對照液比較,，不得更濃（）,。硫酸鹽取上述氯化物項下剩余的溶液25ml，依法檢查,。D-熒光素鉀鹽短期保存條件是4℃干燥避光,。宿遷ATPD-熒光素鉀鹽試劑

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    按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進行注射,，以小鼠為例,，每只小鼠體重假定20g，每只小鼠用量3mg,；4）注射入體內(nèi)10-15min（待光信號達到更強穩(wěn)定平臺期）后進行成像分析,。注：建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學(xué)曲線，從而確定更高信號檢測時間和信號平臺期,。注意事項1）本品（fireflyluciferin）和甲蟲熒光素（beetleluciferin）,、螢光素鉀鹽只是不同別名，以CAS號115144-35-9為準(zhǔn),。2）注射方式,、動物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射，因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學(xué)曲線,，確定更佳信號平臺期和更佳的檢測時間,。3）如果要進行ATP的檢測，盡量避免外源ATP的污染,，如操作時戴手套并使用ATP-free的實驗耗材,，在進行熒光素的溶解時應(yīng)使用ATP-free無菌水。4）為避免反復(fù)凍融,，本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當(dāng)分裝后-20℃或-80℃保存,。為防止氧化,，如有條件，可以對儲存液充氮氣或氬氣后保存,。5）對于檢測靈敏度要求特別高的實驗,，建議使用新鮮配制的本產(chǎn)品。6）在進行D-熒光素鉀鹽的溶解時,，應(yīng)使用無鈣鎂離子的DPBS,，因鈣鎂離子可能會抑制熒光素酶的活性，此外鎂離子可能會對熒光素的氧化造成影響,，從而影響檢測,。7）為了您的安全和健康。宿遷體外研究D-熒光素鉀鹽保質(zhì)期

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