具體實(shí)驗(yàn)流程：注：該操作流程通常用來檢測轉(zhuǎn)染了螢火蟲熒光素酶基因的真核細(xì)胞中熒光素酶表達(dá)的活性,，不適用于對(duì)細(xì)菌熒光素酶進(jìn)行檢測。1．實(shí)驗(yàn)***天,，消化并接種細(xì)胞（根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)選擇合適的細(xì)胞）于35mm細(xì)胞培養(yǎng)皿,，置于5％CO2、飽和濕度的37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過夜,。2．等細(xì)胞密度達(dá)到70％時(shí)用Luciferase報(bào)告基因質(zhì)粒,、LacZ的表達(dá)質(zhì)粒及其它質(zhì)粒（根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)確定）共轉(zhuǎn)染細(xì)胞（根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)選擇轉(zhuǎn)染方法，如磷酸鈣沉淀法,、PEI,、lipofectamine2000等均可）。3．轉(zhuǎn)染24－36h后,，吸取培養(yǎng)液,，用預(yù)冷的PBS（無鈣和鎂離子）洗滌細(xì)胞。注：熒光酶的酶促反應(yīng)會(huì)被痕量的鈣所抑制,，故用磷酸鈣轉(zhuǎn)染的細(xì)胞在收集細(xì)胞前應(yīng)充分洗滌除去含鈣介質(zhì),。4．在每個(gè)培養(yǎng)皿中加入350μl預(yù)冷的harvestbuffer,于4℃或冰上放置10min裂解細(xì)胞。5．在細(xì)胞裂解期間,，準(zhǔn)備足量的ml微量離心管,，將ATPbuffer與luciferinbuffer以1：，每管100μl。6．依次取等體積的細(xì)胞裂解液（100μl）至步驟5中的離心管中,，迅速混勻，在發(fā)光儀（Luminometer）上讀取吸光值,。注：發(fā)光反應(yīng)會(huì)迅速衰減,，將細(xì)胞裂解液加入反應(yīng)液后5s內(nèi)必須讀取吸光值。7．確保以相同操作手法讀取全部樣品吸光值后,。D-熒光素鉀鹽長期保存是有效期一年,。徐州熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽試劑

    luciferin)的分子結(jié)構(gòu)如右圖所示：，在氧氣,、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng),，生成氧化熒光素(oxyluciferin)，分子結(jié)構(gòu)如右圖所示,，并產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象,。但是該底物熒光素以前大多依賴進(jìn)口，產(chǎn)品價(jià)格昂貴,。而且由于該產(chǎn)品容易降解,、受潮影響使用效果。所以,，需要國產(chǎn)化的方式生產(chǎn),，一方面可以降低成本，一方面可以增強(qiáng)使用效果,。作者：科遠(yuǎn)迪鏈接：zhuanlan./p/來源：知乎著作權(quán)歸作者所有,。商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)聯(lián)系作者獲得授權(quán)，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處,。D-luciferin,，potassiumsalt熒光素產(chǎn)品說明書發(fā)光原理哺乳動(dòng)物生物發(fā)光，一般是將Fireflyluciferase基因（由554個(gè)氨基酸構(gòu)成,，約50KD）即熒光素酶基因整合到預(yù)期觀察的細(xì)胞染色體DNA上以表達(dá)熒光素酶,，培養(yǎng)出能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株，當(dāng)細(xì)胞分裂,、轉(zhuǎn)移,、分化時(shí),熒光素酶也會(huì)得到持續(xù)穩(wěn)定的表達(dá)?；?、細(xì)胞和活題動(dòng)物都可被熒光素酶基因標(biāo)記。將標(biāo)記好的細(xì)胞接種到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)后,，當(dāng)外源（腹腔或靜脈注射）給予其底物熒光素(D-luciferin,，potassiumsalt，以下均簡稱熒光素)，即可在幾分鐘內(nèi)產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象,。所發(fā)的光波長在540-600nm,。這種酶在ATP，氧存在的條件下,，催化熒光素的氧化反應(yīng)才可以發(fā)光,。鎮(zhèn)江ATPD-熒光素鉀鹽使用說明D-熒光素鉀鹽使用的是什么技術(shù)？

    請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。8）本產(chǎn)品只作科研用途,！D-熒光素鉀鹽是熒光素酶的水溶性底物，存在于多種發(fā)光生物體中,。在ATP和熒光素酶的催化作用下,，D-熒光素鉀被氧化，產(chǎn)生藍(lán)綠色的光(560nm),，當(dāng)?shù)孜镞^量時(shí),，產(chǎn)生的Chemicalbook光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)。編碼熒光素酶的Luc基因是植物,、哺乳動(dòng)物細(xì)胞的常用報(bào)告基因,。由于沒有背景干擾，因此可以很容易地檢測出低至,。用途D-熒光素鉀鹽是一類在生物體中發(fā)現(xiàn)的能引起生物發(fā)光的雜環(huán)化合物,，如螢火蟲。在ATP存在下,，螢光素酶將其氧化脫羧后會(huì)發(fā)光,。化學(xué)研究中可用于熒光素酶的基板,。生物活性D-Luciferin是螢火蟲熒光素酶的底物,。體外研究D-luciferinisthenaturalsubstrateoftheenzymeluciferase(Luc),μM.體內(nèi)研究Bioluminescenceimaging(BLI)usingthefireflyluciferase(Fluc)(5,10,15,and20min)μLofD-luciferin(intraperitoneallyorintravenously)stocksolutionpergramofbodyweight:normally~200μLfora20gmouseforastandard150mg/(eitherPotassiumorSodiumSalt)atroomtemperatureanddissolveindPBS。

    螢火蟲熒光素酶（Luciferase）是一種常用的信號(hào)分子,，可以用來標(biāo)記腫瘤細(xì)胞.一．細(xì)胞方法將帶有熒光素luc轉(zhuǎn)酶報(bào)告基因的真核表達(dá)重組質(zhì)粒pRc/CMV2-7,，利用G418篩選，獲得穩(wěn)染人乳腺哎細(xì)胞株MCF-7-luc,，并在穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶基因的細(xì)胞克隆MCF-7體外評(píng)價(jià)其發(fā)光能力,。通過建立裸鼠移植瘤模型，利用活題生物發(fā)光成像系統(tǒng)檢測腫大的瘤生長及轉(zhuǎn)移情況,，為下一步監(jiān)測裸鼠移植瘤對(duì)藥物作用的變化情從而為分析藥物對(duì)腫大的瘤的治的好效果提供理想的狀況.G418篩選濃度的確定：37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中常培養(yǎng),G418按0,、200、400,、600,、800,、1000μg/ml設(shè)置6個(gè)濃度梯度。在細(xì)胞接種24h后,，加入6孔板中,，每個(gè)濃度設(shè)2個(gè)孔在10～14d內(nèi)全部死亡。每天觀察細(xì)胞生長情況,，死亡更低的G418濃度,，即為篩選質(zhì)粒轉(zhuǎn)染克隆MCF－7細(xì)胞的濃度。1)細(xì)胞轉(zhuǎn)染取對(duì)數(shù)生長期的MCF－7細(xì)胞,，將細(xì)胞接種于6孔板內(nèi)待細(xì)胞融合度達(dá)到80%～90%孔培養(yǎng)板中，TM即可轉(zhuǎn)染,。按照Lipofectamine2000試劑盒操作指南進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。在250μl無血清、無雙抗的DMEM培培養(yǎng)基中加入luc質(zhì)粒8μg/ml的pRc/CMV2-在250μl無血清,、無雙抗的DMEM培養(yǎng)基中加入10μlLipofectamineTM2000,，室溫培育5min。將上述2種稀釋液混勻,。D-熒光素鉀鹽使用濃度怎么樣,？

    而是對(duì)于所有能夠產(chǎn)生螢光的底物和其對(duì)應(yīng)的酶的統(tǒng)稱，雖然它們各不相同,。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的螢光素酶來催化不同的發(fā)光反應(yīng),。**為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲，而其所采用不同的螢光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇（發(fā)光類臍菇,，Omphalotusolearius）或許多海洋生物都不相同,。在螢火蟲中，發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱為腹部氣管（abdominaltrachea）的管道中輸入,。一些生物,，如叩頭蟲，含有多種不同的螢光素酶,，能夠催化同一螢光素底物,，而發(fā)出不同顏色的螢光。螢火蟲有2000多種,，而叩甲總科（包括螢火蟲,、叩頭蟲和相關(guān)昆蟲）則有更多，因此它們的螢光素酶對(duì)于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用,。如今研究得**透徹的螢光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲（Photinuspyralis）,。[1]螢光素酶可以在實(shí)驗(yàn)室中用基因工程的方法生成，并被用于多種不同的實(shí)驗(yàn),。螢光素酶的基因可以被合成并插入到生物體中或轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,。研究者利用基因工程已經(jīng)使得小鼠,、家蠶、馬鈴薯等一些生物可以合成螢光素酶,。間接體外成像是一種強(qiáng)大的研究手段,，可以對(duì)整個(gè)動(dòng)物體中的細(xì)胞群落進(jìn)行分析：將不同類型的細(xì)胞（骨髓干細(xì)胞、T細(xì)胞等）標(biāo)記上（即表達(dá)）螢光素酶,。D-熒光素鉀鹽長期保存條件是-20℃干燥避光,。徐州ATPD-熒光素鉀鹽

做D-熒光素鉀鹽的哪家便宜。徐州熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽試劑

    是新型底物開發(fā)的一個(gè)早期實(shí)例,。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進(jìn)化和新型底物開發(fā)方面的經(jīng)驗(yàn),，研究人員從蝦的螢光素酶改造設(shè)計(jì)出一種新型螢光素酶報(bào)告基因，即NanoLuc?螢光素酶,。這是一種小分子（19kDa）單體酶,，具有獨(dú)特的底物，其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍,。這種新型的報(bào)告基因有著范圍廣的應(yīng)用前景,，為進(jìn)一步的技術(shù)開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。[1]2015NanoBRET?技術(shù)NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質(zhì)標(biāo)簽的理想特征,。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（BRET）的供體,。一項(xiàng)針對(duì)各種能量受體熒光基團(tuán)的深入研究發(fā)現(xiàn)，紅色光譜中的可選擇性有助于消除與BRET測定相關(guān)的一些挑戰(zhàn),?？蓪⑦@些熒光基團(tuán)添加到蛋白質(zhì)配基等分子中以測量靶蛋白的結(jié)合，或與HaloTag?配基耦聯(lián)以進(jìn)行活細(xì)胞中蛋白質(zhì)：蛋白質(zhì)相互作用的檢測,。[1]2016NanoBiT?技術(shù)隨著NanoLuc?的誕生,，Promega的科學(xué)家努力將該報(bào)告基因改造為多亞基系統(tǒng)，即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?,。該系統(tǒng)由兩部分組成：11個(gè)氨基酸的小標(biāo)簽和一個(gè)更大,，更精細(xì)的NanoLuc?亞基，LgBiT,。這兩部分結(jié)構(gòu)互補(bǔ)結(jié)合,。徐州熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽試劑

南京翌科生物科技有限公司在同行業(yè)領(lǐng)域中，一直處在一個(gè)不斷銳意進(jìn)取,，不斷制造創(chuàng)新的市場高度,，多年以來致力于發(fā)展富有創(chuàng)新價(jià)值理念的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)，在江蘇省等地區(qū)的商務(wù)服務(wù)中始終保持良好的商業(yè)口碑,，成績讓我們喜悅,，但不會(huì)讓我們止步，殘酷的市場磨煉了我們堅(jiān)強(qiáng)不屈的意志,，和諧溫馨的工作環(huán)境,，富有營養(yǎng)的公司土壤滋養(yǎng)著我們不斷開拓創(chuàng)新,，勇于進(jìn)取的無限潛力，南京翌科生物科技供應(yīng)攜手大家一起走向共同輝煌的未來,，回首過去,，我們不會(huì)因?yàn)槿〉昧艘稽c(diǎn)點(diǎn)成績而沾沾自喜，相反的是面對(duì)競爭越來越激烈的市場氛圍,，我們更要明確自己的不足,，做好迎接新挑戰(zhàn)的準(zhǔn)備，要不畏困難,，激流勇進(jìn),，以一個(gè)更嶄新的精神面貌迎接大家，共同走向輝煌回來,！