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螢光素酶(英文名稱:Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱,,其中**有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyrali'的螢火蟲體內(nèi)的螢光素酶,螢火蟲發(fā)光的腹部或海洋的藍(lán)色發(fā)光波浪將大自然中生物發(fā)光奇跡呈現(xiàn)于世,。在生物化學(xué)和分子生物學(xué)的早期,,這一現(xiàn)象被認(rèn)為是發(fā)展生物分析的有力平臺。1991年,,Promega發(fā)布了***代螢光素酶分析產(chǎn)品,,并啟動了基于螢光素酶的進(jìn)一步創(chuàng)新計(jì)劃,通過持續(xù)致力于研究和創(chuàng)新生物發(fā)光系統(tǒng)建立了各種不同的分析技術(shù),。Promega螢光素酶技術(shù)發(fā)光史里程碑AGlo-ingHistoryofInnovationandDiscovery1990年12月,,Promega***提出螢火蟲螢光素酶(Luc)作為一種新興報(bào)告基因技術(shù)的應(yīng)用可能性。當(dāng)時的人們認(rèn)為,,螢火蟲螢光素酶具備的生物發(fā)光特性,、極高的靈敏度和快速簡單的檢測流程等特點(diǎn),可能會對分子生物學(xué)家的研究產(chǎn)生重要的影響,。幾個月后,,***代螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因載體和檢測試劑在Promega誕生,使這項(xiàng)新技術(shù)正式并更***地為全球研究人員服務(wù),。隨后30年里,,Promega不斷在螢光素酶實(shí)驗(yàn)工具領(lǐng)域推陳出新,保持技術(shù)***的地位,。這里提到的螢光素酶即熒光素酶,。[1]1991螢光素酶檢測系統(tǒng)。D-熒光素鉀鹽使用濃度怎么樣?d熒光素鉀鹽
tetrametrylrhodarnineisothiocyante,,TRITC)是一種紫紅色粉末,,較穩(wěn)定,是羅達(dá)明(rhodamine)的衍生物,。更大吸收光譜550urn,,更大發(fā)射光譜620urn呈橙紅色熒光,與FITC發(fā)射的黃綠色熒光對比鮮明,,常用于雙標(biāo)記染色。按照抗原抗體反應(yīng)的結(jié)合步聚,,免疫熒光法可分為以下三種,。1.直接法用熒光素標(biāo)記的特異性抗體直接與相應(yīng)的抗原結(jié)合,以檢查出相應(yīng)的抗原成分,。2.間接法先用特異性抗體與相應(yīng)的抗原結(jié)合,,洗去未結(jié)合的抗體,再用熒光素標(biāo)記的抗特異性抗體(間接熒光抗體)與特異性抗體相結(jié)合,,形成抗原一特異性抗體一間接熒光抗體的復(fù)合物,。在此復(fù)合物上帶有比直接法更多的熒光抗體,所以,,此法較直接法靈敏,。3.補(bǔ)體法用特異性的抗體和補(bǔ)體的混合液與標(biāo)本上的抗原反應(yīng),補(bǔ)體就結(jié)合在抗原抗體復(fù)合物上,,再用抗補(bǔ)體的熒光抗體與之相結(jié)合,,就形成了抗原一抗體一補(bǔ)體一抗補(bǔ)體熒光抗體的復(fù)合物。熒光顯微鏡下所見到的發(fā)出熒光的部分即是抗原所在的部位,。補(bǔ)體法具有敏感性強(qiáng)的優(yōu)勢,,同時適用于各種不同種屬來源的特異性抗體的標(biāo)記顯示,在各種不同種屬動物抗體的檢測上為更常用的技術(shù)方法熒光素酶(英文名稱:Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱,。d熒光素鉀鹽D-熒光素鉀鹽測試適用范圍包括哪些,?
LAR)Promega公司推出的第一種螢光素酶檢測試劑LuciferaseAssaySystem(LAR),為靈敏,、非放射性的報(bào)告基因檢測拉開了序幕,。LAR與螢火蟲螢光素酶(luc)報(bào)告基因一起,為研究人員開始了解基因表達(dá)調(diào)控因子提供了首要的工具,。[1]1995Dual-Luciferase?報(bào)告基因檢測系統(tǒng)(DLR)DLR是第一種允許在單個樣本中依次檢測兩個報(bào)告基因的試劑,。通過允許螢光素酶活性的內(nèi)部歸一化,在提高報(bào)告基因檢測的可靠性方面取得了關(guān)鍵進(jìn)展,。此外,,pGL3報(bào)告基因載體系列具有改良后的螢火蟲螢光素酶基因,luc+。這個改造一種報(bào)告基因以實(shí)現(xiàn)性能改進(jìn)的例子后來被進(jìn)一步應(yīng)用到pGL4和luc2報(bào)告基因上,,通過生物信息學(xué)和合成方法,,實(shí)現(xiàn)了更大的改進(jìn)。[1]1999ENLITEN?/UltraGlo?重組螢光素酶Promega公司在早期推出的一種重組螢火蟲螢光素酶(Enliten)基礎(chǔ)上,,改造出了一種稱為UltraGlo?的熱穩(wěn)定性螢光素酶,。UltraGlo?的開發(fā)是在各種檢測和儲藏條件下進(jìn)行一步法“加樣-讀數(shù)”檢測的關(guān)鍵。此后,,通過開發(fā)新的方法來改變螢火蟲螢光素酶檢測的信號動力學(xué),,例如Bright-Glo?、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進(jìn)行檢測,。而“加樣-讀數(shù)”的形式簡化了樣品處理,。
附錄ⅧB),與標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液制成的對照液比較,,不得更濃(),。干燥失重取本品,在105℃干燥至恒重,,減失重量不得過%(附錄ⅧL),。鋅鹽取本品,加氯化鈉的飽和水溶液10ml溶解后,,加稀鹽酸2ml,,搖勻,濾過,,濾液中加亞鐵**鉀試液1ml,,不得發(fā)生渾濁。5鑒別方法編輯(1)取本品的水溶液(1→2000)1滴,,點(diǎn)于濾紙上,,即生成黃色斑點(diǎn),趁濕置溴蒸氣中,,1分鐘后再使與氨蒸氣接觸,,斑點(diǎn)即變?yōu)樯罘奂t色。(2)本品的水溶液顯強(qiáng)烈的熒光,,用大量的水稀釋后仍極明顯,;但加酸使成酸性后,熒光即消失,;再加堿使成堿性,,熒光又顯出。(3)本品熾灼灰化后顯鈉鹽的鑒別反應(yīng)(附錄Ⅲ),。6含量測定編輯取本品約,,精密稱定,加水20ml溶解后,加稀鹽酸5ml使熒光素析出,,用丁醇-氯仿(1:1)提取4次,,每次20ml,合并提取液,,用水10ml洗滌,,洗液再用異丁醇-氯仿(1:1)5ml振搖提取,合并提取液,,置105℃恒重的容器中,,在水浴上通風(fēng)蒸發(fā)至干,殘?jiān)靡掖?0ml溶解后,,再置水浴上蒸干,,并在105℃干燥至恒重,精密稱定,,殘?jiān)亓颗c相乘,,即得供試量中含有C20H10Na2O5的重量,。熒光素鈉是一種有機(jī)化合物,,分子式為C20H10Na2O5,橙紅色粉末,,無氣味,,有吸濕性;易溶于水,,溶液呈黃紅色,,并帶極強(qiáng)的黃綠色熒光。D-熒光素鉀鹽一般都是使用什么技術(shù),。
產(chǎn)品描述D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物,,普遍應(yīng)用于整個生物技術(shù)領(lǐng)域,特別是體內(nèi)***成像技術(shù),。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下,,熒光素底物能夠被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過量時,,產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性(見下圖),。將攜帶熒光素酶編碼基因(Luc)的慢病毒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株,構(gòu)建原位**模型,,之后注入熒光素底物,,通過IVIS系統(tǒng)來檢測光強(qiáng)度變化,從而實(shí)時監(jiān)測疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或進(jìn)行藥物藥效評價等,。也可以利用ATP對此反應(yīng)體系的影響,,根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來指示能量或生命體征。注:在抗**藥物藥效評價試驗(yàn)中,由于生物自發(fā)光檢測需要根據(jù)熒光素表達(dá)標(biāo)定**大小,,受**生長所發(fā)生的**內(nèi)部壞死影響,,生物自發(fā)光并不能很***的評價**生長,在抗**藥效評價有較高要求的實(shí)驗(yàn)中,,建議使用小動物核磁成像系統(tǒng)檢測**生長,。D-熒光素也常用于體外研究,包括熒光素酶和ATP水平分析,;報(bào)告基因分析,;高通量測序和各種污染檢測。目前有三種產(chǎn)品形式:D-熒光素(游離酸),,D-熒光素鹽(鈉鹽和鉀鹽),。主要差別在于溶解特性:前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液,??扇苡诩状己虳MSO。 D-熒光素鉀鹽如何選擇合作公司,?鎮(zhèn)江體外研究D-熒光素鉀鹽應(yīng)用
做D-熒光素鉀鹽測試哪個公司好,?d熒光素鉀鹽
2-乙磺酸)PIPES磷酸烯醇**酸三(環(huán)已胺)鹽PEP病毒保存液肝素鋰乙二胺四乙酸二鉀/EDTA二鉀血清分離膠/血液分離膠肝素抗凝劑乙二胺四乙酸三鉀/EDTA三鉀血液促凝劑高效促凝粉高效硅化劑水溶性硅化劑草酸鉀鈣離子螫合抗凝劑弱效抗凝劑吖啶酯己二酰阱NSP-DMAE-ADH吖啶酯-T4結(jié)合物吖啶酯-T3結(jié)合物吖啶磺酰胺鹽-N-乙胺基馬來酰亞胺吖啶磺酰胺鹽-T4結(jié)合物吖啶磺酰胺鹽-T3結(jié)合物生物素-T4結(jié)合物化學(xué)發(fā)光分析試劑及標(biāo)記物生物素-T3結(jié)合物生物素-NHS活性酯吖啶磺酰胺NSP-SA-ADH吖啶酯NSP-DMOAE-NHS吖啶酯NSP-DMOAE-PEG-GT-NHSCy3-NHS酯Cy7-NHS酯5-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素-NHS酯5(6)-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素D熒光素鈉鹽D-Luciferin,SodiumSaltD-熒光素鉀鹽D-Luciferin,PotassiumSaltD-熒光素螢火蟲,游離酸D-LuciferinFirefly,freeacid螢火蟲熒光素酶fireflyluciferase海腎熒光素酶Renillaluciferase天然腔腸熒光素Coelenterazineh腔腸素hCoelenterazinef腔腸素fCoelenterazineh/腔腸素h腔腸熒光素運(yùn)輸和保存冰袋運(yùn)輸,;-20℃干燥避光保存,;有效期一年。使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1)用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鈉鹽,,配制成30mg/mL的儲存液(100-200×),,混勻。立即使用,。d熒光素鉀鹽
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