聚合酶鏈式反應(yīng)的特點：靈敏度高：PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,，能將皮克(pg=10-12）量級的起始待測模板擴增到微克（μg=-6）水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞,；在病毒的檢測中,，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位）；在細菌學(xué)中很小檢出率為3個細菌,。簡便,、快速：PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),，一般在2～4 小時完成擴增反應(yīng),。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素,，無放射性污染,、易推廣。純度要求低：不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,，DNA 粗制品及RNA均可作為擴增模板,。可直接用臨床標本如血液,、體腔液,、洗嗽液、毛發(fā),、細胞,、活組織等DNA擴增檢測。聚合酶鏈式反應(yīng)的特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物,。莆田血液RT-PCR檢測技術(shù)供應(yīng)商

聚合酶鏈反應(yīng)也可以用作以下敏感試驗的一部分組織分型，對移植至關(guān)重要,。截至2008年,，甚至有人提議用聚合酶鏈反應(yīng)檢測取代傳統(tǒng)的血型抗體檢測。許多形式的病癥涉及致病基因的改變,。通過使用基于聚合酶鏈反應(yīng)的測試來研究這些突變,，醫(yī)治方案有時可以根據(jù)患者的不同而不同。聚合酶鏈反應(yīng)可以早期診斷惡性疾病,，如白血病和淋巴瘤,，這是目前病癥研究中發(fā)展很快的，并且已經(jīng)被常規(guī)使用,。PCR檢測可以直接在基因組DNA樣品上進行,，以檢測易位特異性惡性細胞，其靈敏度至少是其他方法的10,，000倍,。聚合酶鏈反應(yīng)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域非常有用，因為它允許分離和擴增病癥抑制劑,。例如,，定量PCR可以用于量化和分析單細胞，以及識別DNA,、mRNA和蛋白質(zhì)的確認和組合,。珠海細胞熒光PCR研究方案嵌套式PCR在特異性擴增長DN段方面通常比傳統(tǒng)PCR更成功，但它需要更詳細的目標序列知識。

聚合酶鏈式反應(yīng)：DNA的半保留復(fù)制是生物進化和傳代的重要途徑,。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈,，在DNA聚合酶的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成同樣的兩分子拷貝,。在實驗中發(fā)現(xiàn),，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈,。因此,，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，加入設(shè)計引物,，DNA聚合酶,、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。但是,，DNA聚合酶在高溫時會失活,，因此，每次循環(huán)都得加入新的DNA聚合酶,，不但操作煩瑣,，而且價格昂貴，制約了PCR技術(shù)的應(yīng)用和發(fā)展,。耐熱DNA聚合酶-Taq酶的發(fā)現(xiàn)對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶,，使PCR技術(shù)變得非常簡捷,、同時也降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,，并逐步應(yīng)用于臨床,。

聚合酶鏈式反應(yīng)的試驗污染：PCR反應(yīng)的很大特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性，但令人腦袋不適的問題是易污染,，極其微量的污染即可造成假陽性的產(chǎn)生,。 污染原因：標本間交叉污染：標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時,，由于密封不嚴溢于容器外,，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染；標本核酸模板在提取過程中,，由于吸樣污染導(dǎo)致標本間污染,；有些微生物標本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散，導(dǎo)致彼此間的污染,。PCR試劑的污染：主要是由于在PCR試劑配制過程中,，由于加樣,、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染,。熱啟動/冷完成聚合酶鏈反應(yīng)是通過新的雜合聚合酶實現(xiàn)的,，這些酶在環(huán)境溫度下不活躍。

聚合酶鏈式反應(yīng)：三步：變性：模板DNA加熱變性,；復(fù)性,，引物與它的靶序列發(fā)生退火，引物DNA量多,，使引物和模板在局部形成雜交鏈,；延伸，4種dNTP 與 Mg2+ 存在的條件下,，DNA合成酶催化以引物為起始點,，按5'-3'方向進行延伸。上面三步為一個循環(huán),，可使拷貝數(shù)到達2*E－6-2*E－7,。PCR產(chǎn)物一段雙鏈DNA，是由它的末端引物的5’端決定的,。首輪擴增,，其產(chǎn)物是大小不均一的DNA分子。長度應(yīng)大于兩引物之間的長度,。在第二個循環(huán)中,，由于5'固定，其產(chǎn)物長度就由等于兩引物之間的長度,。所以幾十個循環(huán)后就會產(chǎn)生大量的兩引物之間序列。聚合酶鏈式反應(yīng)PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程,。廈門實時數(shù)字PCR服務(wù)

逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)較廣用于表達譜,，以確定基因的表達或鑒定RNA轉(zhuǎn)錄物的序列。莆田血液RT-PCR檢測技術(shù)供應(yīng)商

聚合酶鏈式反應(yīng)PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程,，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物,。PCR由變性-退火-延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,，使之成為單鏈,，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準備,；模板DNA與引物的退火（復(fù)性）：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合,；引物的延伸：DNA模板-引物結(jié)合物在72℃,、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板,，按堿基互補配對與半保留復(fù)制原理,，合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復(fù)制鏈，重復(fù)循環(huán)變性-退火-延伸三過程就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”,，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板,。每完成一個循環(huán)需2～4分鐘，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍,。莆田血液RT-PCR檢測技術(shù)供應(yīng)商