血清的常見問題:保存方法,血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃,。然而,,若存放于4℃時,請勿超過一個月,。若您一次無法用完一瓶,,建議將無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),,再放回冷凍。解凍方法:將血清從冷凍箱取出后,,先置于2-8℃冰箱使之溶解,然后在室溫下使之全溶,。但必須注意的是,,溶解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。避免產(chǎn)生沉淀物:解凍血清時,,請按照所建議的逐步解凍法(-2℃至4℃至室溫),,若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),,實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物,。解凍血清時,,請隨時將之搖晃均勻,,使溫度及成分均一,,減少沉淀的發(fā)生。含抗體的血清可作為預(yù)防或醫(yī)治疾病之用,?;窗布?xì)胞培養(yǎng)用胎牛血清品牌
那么如何保障胎牛血清的品質(zhì)呢:內(nèi)有毒的,,內(nèi)有毒的含量越低的血清,,胎牛血清級別就越高:內(nèi)有毒的≤10EU/ml時,此血清為特級胎牛血清;10EU/ml<內(nèi)有毒的≤ 25EU/ml時,,此血清為優(yōu)級胎牛血清,;內(nèi)有毒的≥ 25EU/ml時,,此血清為標(biāo)準(zhǔn)級胎牛血清,;應(yīng)選取內(nèi)有毒的含量低的胎牛血清,使培養(yǎng)的細(xì)胞更健康,。如果選取內(nèi)有毒的較高的血清,,細(xì)胞一直泡在“毒液”里,,短期內(nèi)細(xì)胞看不出太明顯的變化,,但長期的話細(xì)胞會衰老得較快,,從而對實驗結(jié)果造成嚴(yán)重影響。微生物:微生物包括細(xì)菌,、霉菌,、支原體,、噬菌體、各類病原毒等,。嚴(yán)格的生產(chǎn)工藝可以對細(xì)菌,、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制,。同時3次0.1um過濾可以完全祛除支原體(支原體直徑0.2~0.3um)。通過病毒的檢測,,可以嚴(yán)格控制牛腹瀉,、牛細(xì)小、藍(lán)舌病等病毒,。通過非瘋牛病疫區(qū)生產(chǎn)還可避免朊病毒,。鎮(zhèn)江優(yōu)等血清供應(yīng)商血清的保存應(yīng)該注意:熱滅活是指56℃,,30分鐘加熱已完全解凍的血清。
熱滅活:一般是以56℃,30分鐘來處理已解凍的血清,,因為此加熱步驟,,可以使補(bǔ)體去活化,,而補(bǔ)體所參與的反應(yīng)有:溶細(xì)胞活性,,平滑肌的收縮,,肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放,增強(qiáng)吞噬作用,,淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的趨化和,。有必要做熱滅活嗎?實驗顯示,,經(jīng)過正確處理的熱滅清,對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的,。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn),,或完全沒有任何作用,,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量,,而造成細(xì)胞生長速率的降低,。而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會明顯的增多,,這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀察,像是 "小黑點(diǎn)",,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增,。購買的時候注意詢問廠家是否是已滅清。
如何解凍血清,?血清解凍需采用逐步解凍法:將血清從-20℃冰箱放入4℃冰箱中溶解,,然后移入室溫,待全部溶解后再分裝,。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),,減少沉淀生成。切勿直接將血清從-20℃轉(zhuǎn)入37℃解凍,,這樣因溫差較大易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)并出現(xiàn)沉淀,。需要對新買的血清進(jìn)行過濾嗎?血清在ISO13485認(rèn)證的廠房中生產(chǎn),,經(jīng)過3次0.1μm過濾,,出廠經(jīng)過檢測并且會使用三種以上的細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng)測試及無菌檢測,污染幾率非常低,。通常細(xì)胞污染有非常多的可能性,,根據(jù)協(xié)助使用者進(jìn)行分析檢測,,結(jié)果表明絕大部分都是因人為操作失誤導(dǎo)致污染。因此買來的血清不需要再次進(jìn)行過濾,。血清提供和各種生長因子:胰島素,、腎上腺皮質(zhì)、類固醇(雌二醇,、睪酮,、孕酮)等。
小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項,?來源不同:胎牛血清 是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺獲取的胎牛的血清,,新生牛(小牛)血清采自出生10至14 天的小牛。組份與比例不同:兩者所含的促細(xì)胞生長因子,、促貼附因子,、及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同,用途與用法不同:某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長,,而有些細(xì)胞只需小牛血清即可,,使用濃度不同,一般在5%-10%,,有特殊要求的濃度在20%,。血清保存和使用須注意:血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃,若存放在4℃不可超過一個月,。解凍血清時 ,,應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱,并經(jīng)常搖勻使之溶解,,然后至室溫放置使之升溫,,一定不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中,如放在37℃解凍,,顏色加深,粘稠度也會增加,,血清在解凍和熱滅活后,應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存,,避免反復(fù)凍融,。胎牛血清的細(xì)菌內(nèi)有毒的 ≤5(EU/ml),;牛腹瀉病毒:陰性;大腸桿菌噬菌體:陰性,。廈門細(xì)胞培養(yǎng)用血清哪里有賣
胎牛血清有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,,起到醫(yī)治作用,?;窗布?xì)胞培養(yǎng)用胎牛血清品牌
國際上流行的【血清融化三步法】可較為大限度地保存血清中因子的活性,,不會產(chǎn)生沉淀,,同時能縮短血清融化時間,。關(guān)于胎牛血清的滅活:真正的胎牛血清因為胎牛沒有形成有效補(bǔ)體,,如果針對補(bǔ)體滅活的話,就不需要,。其他情況根據(jù)實驗設(shè)計來決定,。胎牛血清的濃度:胎牛血清通常是以2%~20%的比例加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,,混合后配成完全培養(yǎng)基。曾有文獻(xiàn)報道,,不同胎牛血清濃度對細(xì)胞存在一定的影響,,尤其是干細(xì)胞和原代細(xì)胞,。具體很好濃度需要用戶根據(jù)自己的實驗來確定,,以既保證培養(yǎng)的效果,又避免血清的浪費(fèi),?;窗布?xì)胞培養(yǎng)用胎牛血清品牌