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抗體鉸鏈區(qū):鉸鏈區(qū)(hinge region)位于CH1與CH2之間,富含脯氨酸,,易伸展彎曲,,從而改變抗原結(jié)合部位之間的距離,有利于抗體結(jié)合位于不同位置的抗原表位,。鉸鏈區(qū)易被木瓜蛋白酶,、胃蛋白酶等水解,,產(chǎn)生不同的水解片段。不同類Ig的鉸鏈區(qū)不盡相同,,例如人IgGl,、IgG2、IgG4和IgA的鉸鏈區(qū)較短,,IgG3和IgD的鉸鏈區(qū)較長(zhǎng),,而IgM和IgE無鉸鏈區(qū)。J鏈和分泌片:Ig輕鏈和重鏈除上述基本結(jié)構(gòu)外,,某些類別的Ig還含有其他輔助成分,,如J鏈和分泌片 ??贵w的產(chǎn)生主要由B細(xì)胞負(fù)責(zé),,它們可以識(shí)別并生成特異性的抗體以應(yīng)對(duì)傳染。武漢IgE抗體
多克隆抗體免疫動(dòng)物:免疫用的動(dòng)物建議選擇適齡的健康雄性動(dòng)物,,雌性動(dòng)物特別是妊娠動(dòng)物用于制備免疫抗體則非常不合適,,有時(shí)甚至不產(chǎn)生抗體。由于對(duì)免疫應(yīng)答的個(gè)別差異,,免疫時(shí)應(yīng)同時(shí)選用數(shù)只動(dòng)物進(jìn)行免疫,。 抗原是多種多樣的,而且千差萬別,。就其化學(xué)成分而言,,有蛋白質(zhì)抗原、類脂抗原,、多糖類抗原和核酸抗原等,。就抗原性而言,有完全抗原和不完全抗原,。為了獲得較好的抗血清,,建議是選用蛋白質(zhì)抗原,,如要制備用于篩選細(xì)菌表達(dá)的 cDNA 文庫或免疫印跡的抗血清,建議選用可降解的蛋白質(zhì)抗原,。不同的抗原,,其免疫原性的強(qiáng)弱均不相同,這種免疫原性的強(qiáng)弱取決于抗原的分子量,、化學(xué)活性基團(tuán),、立體結(jié)構(gòu)、物理形狀和彌散速度等,。武漢IgE抗體抗體的結(jié)構(gòu)多樣性使得它們能夠識(shí)別和結(jié)合各種形狀和性質(zhì)的分子。
多克隆抗體可以采用以下各種方法之一進(jìn)行免疫,。淋巴結(jié)注射法:①在兔的兩后足跖部皮下(或皮內(nèi))注射活卡介苗 50mg(每側(cè)約0.30ml) ,。7~10 天后,兔跖及腘肌淋巴結(jié)腫大,;②于腫大的兩側(cè)淋巴結(jié)內(nèi)各注射加有完全佐劑的IgG 乳化抗原 0.50ml(含 IgG 5mg/ml,、青霉素 1 000U/ml、鏈霉素 1 000μg/ml),;③必要時(shí),,14 天后,重復(fù)步驟②一次,;④再過 7 天后,,于兩側(cè)淋巴結(jié)內(nèi)各注射加有完全佐劑的 IgG 乳化抗原0.50ml(含IgG5mg/ml、青霉素 1 000U/ml,、鏈霉素 1 000μg/ml) ,;⑤5~7天后,耳靜脈采集血,。測(cè)定血清效價(jià),。
凡能產(chǎn)生抗體的高等動(dòng)物(包括人類),當(dāng)注入胸腺依賴性抗原(TD抗原)進(jìn)行免疫時(shí)都有著相同產(chǎn)生抗體的規(guī)律,,即存在初次免疫應(yīng)答(primary immune response)和再次免疫應(yīng)答(secondary immune response),。初次免疫應(yīng)答是指機(jī)體初次接觸某種抗原物質(zhì)引起特異性抗體產(chǎn)生的過程。其特點(diǎn)是潛伏期長(zhǎng)(一周以上),,產(chǎn)生的抗體滴度(效價(jià))低,、維持的時(shí)間短,產(chǎn)生的抗體以IgM為主,;再次免疫應(yīng)答是指機(jī)體以后再次接觸同樣的抗原后所產(chǎn)生的抗體應(yīng)答過程,。其特點(diǎn)是產(chǎn)生抗體的潛伏期短、抗體滴度高,,維持的時(shí)問長(zhǎng),,產(chǎn)生的抗體以IgG為主,。抗體(免疫球蛋白不只是抗體)是一種由漿細(xì)胞(效應(yīng)B細(xì)胞)分泌,。
多克隆抗體佐劑應(yīng)用:1.佐劑的類型 實(shí)踐中常應(yīng)用的佐劑有氫氧化鋁膠,、明礬、弗氏佐劑,、脂質(zhì)體和石蠟油等,。也有采用結(jié)合桿菌等分枝桿菌、白喉?xiàng)U菌以及細(xì)小棒狀桿菌等,。⑴ 弗氏不完全佐劑(incomplete Freund's adjuvant,IFA)羊毛脂 1 份,;石蠟油 5 份;混合,,高壓滅菌后保存,。用時(shí)加熱融化,冷卻至 50℃左右,,加抗原進(jìn)行乳化處理,。⑵ 弗氏完全佐劑(complete Freund's adjuvant,CFA);弗氏不完全佐劑 10ml,;卡介苗 10mg~200mg 卡介苗可 100℃10min 滅活處理,。初次免疫時(shí),建議用弗氏完全佐劑,,以刺激機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫反應(yīng),。再次免疫時(shí),一般不用完全佐劑,,而采用弗氏不完全佐劑,。但在研究分枝桿菌及相關(guān)抗原時(shí),一般不用弗氏完全佐劑,,以免卡介苗的干擾,。抗體檢測(cè)可以用于檢測(cè)病原體傳染,、免疫狀態(tài)和疫苗效果等,。江蘇異嗜性抗體研發(fā)團(tuán)隊(duì)
抗體在免疫系統(tǒng)中起到了關(guān)鍵作用,保護(hù)我們免受各種疾病的侵害,。武漢IgE抗體
多克隆抗體是由異源抗原(大分子抗原,、半抗原偶聯(lián)物)刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng),有機(jī)體漿細(xì)胞分泌的一組免疫球蛋白,。多克隆抗體由于其可識(shí)別多個(gè)抗原表位,、可引起沉淀反應(yīng),制備時(shí)間短,,成本低的原因廣泛應(yīng)用于研究和診斷方面,??梢宰鳛榭乖奈镔|(zhì)有很多種,一般的科研實(shí)驗(yàn)中,,經(jīng)常使用的抗原有:偶聯(lián)多肽,、偶聯(lián)的小分子或化合物、天然或重組蛋白等等,。對(duì)可溶性抗原而言,,為了增強(qiáng)其免疫原性或改變免疫反應(yīng)的類型、節(jié)約抗原等目的,,常采用加佐劑的方法以刺激機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫應(yīng)答,。武漢IgE抗體