一代,、二代、三代測(cè)序的技術(shù)原理和技術(shù)特點(diǎn)分別是什么,？

技術(shù)原理：

一代—雙脫氧終止法

二代—橋式PCR+4色熒光可逆終止+激光掃描成像

三代—PacBio SMRT測(cè)序技術(shù)

技術(shù)特點(diǎn)：

一代—只能檢測(cè)序列一致的PCR產(chǎn)物,；讀長(zhǎng)可以較長(zhǎng)，比如Sanger可以達(dá)到幾百bp,；通量低，一次只能檢測(cè)少量的序列,；成本低,；

二代—可以并行測(cè)序；需要放大信號(hào)才能檢測(cè),；通量大,，可以產(chǎn)生上G的reads；讀長(zhǎng)較短,，一-般是固定的,，比如50、100,、150,、250等；成本較高

三代：可以并行測(cè)序,；不需要放大信號(hào),，對(duì)單個(gè)分子進(jìn)行測(cè)序；通量大，比如SequelII平臺(tái),，一張芯片可以有800萬(wàn)個(gè)ZMW,；讀長(zhǎng)較長(zhǎng)；測(cè)序精確度較差,；成本高,； 二代測(cè)序的過(guò)程有哪些？蘇州哪里有二代測(cè)序應(yīng)用

二代測(cè)序——基因組測(cè)序該測(cè)幾個(gè)G,？②

人類全外顯子組測(cè)序

人類全外顯子組*占基因組的1%-2%,，大小約為30M-60M左右，但通常需要較高的測(cè)序深度來(lái)確保外顯子區(qū)域的變異檢測(cè)準(zhǔn)確性,，一般測(cè)序深度在100X-200X之間,，數(shù)據(jù)量大約在3G-12G左右。全外顯子組測(cè)序主要關(guān)注編碼蛋白質(zhì)的外顯子區(qū)域,，能夠高效地檢測(cè)出與疾病相關(guān)的基因突變,，常用于遺傳病的診斷、**基因突變篩查等研究,。

動(dòng)植物基因組測(cè)序

常見(jiàn)動(dòng)植物：對(duì)于一些常見(jiàn)的動(dòng)植物物種,，如水稻、小鼠等,，其基因組大小與人類基因組相近或更小,。全基因組測(cè)序時(shí)，測(cè)序深度一般在10X-30X左右,，數(shù)據(jù)量在30G-90G之間,。如果是進(jìn)行重測(cè)序或特定性狀相關(guān)的研究，測(cè)序深度可根據(jù)具體情況適當(dāng)調(diào)整,。

復(fù)雜基因組的動(dòng)植物：部分動(dòng)植物的基因組較大且復(fù)雜,，例如某些魚類、植物的多倍體物種等,，其基因組大小可能達(dá)到數(shù)G甚至數(shù)十G,。對(duì)于這類物種的全基因組測(cè)序，測(cè)序深度可能在5X-10X左右,，數(shù)據(jù)量也會(huì)因基因組大小而異,，從幾十G到數(shù)百G不等。 山東哪里有二代測(cè)序公司二代測(cè)序可以邊合成邊測(cè)序嗎,？

二代測(cè)序——技術(shù)原理類問(wèn)題

二代測(cè)序與一代測(cè)序的區(qū)別是什么：一代測(cè)序技術(shù)如Sanger測(cè)序,，一次只能讀取一條DNA序列，通量低,、速度慢,、成本高,，但準(zhǔn)確性高，適用于對(duì)少量基因片段的精確測(cè)序,。而二代測(cè)序技術(shù)具有高通量,、速度快、成本低等優(yōu)點(diǎn),，可以同時(shí)對(duì)大量DNA分子進(jìn)行測(cè)序,，但在單個(gè)堿基的準(zhǔn)確性上稍低于一代測(cè)序，二者在不同的應(yīng)用場(chǎng)景中各有優(yōu)勢(shì),。二代測(cè)序有哪些主要的測(cè)序原理：主要包括邊合成邊測(cè)序和連接法測(cè)序,。邊合成邊測(cè)序是在DNA聚合酶的作用下，逐個(gè)添加帶有熒光標(biāo)記的dNTP,，通過(guò)檢測(cè)釋放的熒光信號(hào)來(lái)確定堿基序列,；連接法測(cè)序則是利用DNA連接酶將寡核苷酸探針連接到模板DNA上，根據(jù)連接的探針序列來(lái)推斷模板DNA的堿基組成,。

一代,、二代、三代測(cè)序的區(qū)別分別是什么,？

一代測(cè)序是上世紀(jì)70年代由Sanger和Coulson開(kāi)創(chuàng)的DNA雙脫氧鏈終止法測(cè)序,，也稱為Sanger測(cè)序。

二代測(cè)序技術(shù)(NGS)是為了改進(jìn)一代測(cè)序通量過(guò)低的問(wèn)題而出現(xiàn)的,，能夠同時(shí)對(duì)上百萬(wàn)甚至數(shù)十億個(gè)DNA分子進(jìn)行測(cè)序?qū)崿F(xiàn)了大規(guī)模,、高通量測(cè)序的目標(biāo)。

三代測(cè)序主要有兩種技術(shù)PacBio公司的SMRT和Oxford Nanopore 的納米孔單分子測(cè)序技術(shù),，這兩種技術(shù)的測(cè)序讀長(zhǎng)都可以達(dá)到幾-kb的級(jí)別,，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于二代測(cè)序技術(shù)。 二代測(cè)序技術(shù)不斷發(fā)展,，其不斷提高的速度,、準(zhǔn)確性和成本效益為各個(gè)領(lǐng)域開(kāi)辟了新的可能性。

二代測(cè)序——微生物基因組挑戰(zhàn)與限制

基因組組裝困難：微生物基因組中的重復(fù)序列會(huì)給組裝帶來(lái)困難,。例如，一些細(xì)菌基因組中存在核糖體RNA基因的串聯(lián)重復(fù),，這些重復(fù)序列在測(cè)序讀段較短的情況下,，很難準(zhǔn)確地拼接在一起，可能會(huì)導(dǎo)致基因組組裝的碎片化,，影響對(duì)基因組結(jié)構(gòu)的完整理解,。

數(shù)據(jù)解讀復(fù)雜：測(cè)序得到的數(shù)據(jù)量巨大，對(duì)數(shù)據(jù)的解讀和分析需要復(fù)雜的生物信息學(xué)知識(shí)和工具,。例如,，基因功能注釋雖然可以通過(guò)與公共數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)來(lái)完成,，但數(shù)據(jù)庫(kù)中可能存在錯(cuò)誤信息或者不完整的信息，導(dǎo)致基因功能注釋的不準(zhǔn)確,。而且,，對(duì)于新發(fā)現(xiàn)的基因，可能沒(méi)有合適的比對(duì)對(duì)象,，很難確定其功能,。

樣本處理和污染問(wèn)題：微生物樣本的采集和處理過(guò)程中很容易受到污染。例如,，在環(huán)境微生物樣本采集時(shí),，空氣中的微生物可能會(huì)混入樣本中，導(dǎo)致測(cè)序結(jié)果不能真實(shí)反映目標(biāo)微生物的情況,。同時(shí),，在DNA提取過(guò)程中，如果不能有效地去除雜質(zhì),，也會(huì)影響測(cè)序質(zhì)量和后續(xù)的分析,。 二代測(cè)序可以檢測(cè)基因嗎？南京嘉安健達(dá)二代測(cè)序原理

二代測(cè)序的工作原理是什么,？蘇州哪里有二代測(cè)序應(yīng)用

③二代測(cè)序一般多久出結(jié)果,？

3、測(cè)序深度和覆蓋度要求

測(cè)序深度是指每個(gè)堿基被測(cè)序的平均次數(shù),，覆蓋度是指測(cè)序獲得的堿基占整個(gè)基因組（或目標(biāo)區(qū)域）的比例,。如果要求高測(cè)序深度和高覆蓋度，比如進(jìn)行**全基因組的深度測(cè)序（測(cè)序深度可能達(dá)到100X甚至更高）,，需要更長(zhǎng)的測(cè)序時(shí)間來(lái)獲取足夠的數(shù)據(jù),，并且后續(xù)的數(shù)據(jù)處理和分析也會(huì)更復(fù)雜。而對(duì)于一些簡(jiǎn)單的基因篩查項(xiàng)目,，測(cè)序深度要求較低（如10X-20X）,，相應(yīng)的測(cè)序和分析時(shí)間會(huì)縮短。例如,，低深度全外顯子測(cè)序用于篩查常見(jiàn)突變,，測(cè)序可能在3-5天完成；而高深度的全外顯子測(cè)序用于檢測(cè)低頻體細(xì)胞突變,，可能需要7-10天甚至更久,。 蘇州哪里有二代測(cè)序應(yīng)用