免疫組化實驗注意事項總結(jié)：

?本實驗室所用切片一般是石蠟切片,。

?烘片：使蠟片水分蒸發(fā),，石蠟軟化，組織切片牢固貼在玻片上,；烘片至跟烘片前透明度有差異,。

?抗原修復(fù)時，使片子始終浸沒在修復(fù)液中,，液體不能干,。

?一抗孵育在37度培養(yǎng)箱，濕盒放置1h,，省時間和結(jié)合效果好,，不要超過1h，容易過染,。

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?二抗使用：兩個二抗放大信號或一個二抗,；若抗體信號強,，可不用放大信號，盡量增大信噪比,。

?10XDAB在常溫溶解,，盡可能現(xiàn)用現(xiàn)配，放于4度儲存時間久了效果不佳,。

?復(fù)水和脫水時所用的梯度酒精不可混用,，要區(qū)分開。

?加抗體和顯色液時,，都要將片子甩干,，在半干半濕的狀態(tài)下再加，不然容易造成溶液的二次稀釋,。

?整個操作過程中在顯色之前,，一定不能干片。 有沒有能做免疫組化的實驗外包公司,？效果好一點的,。黑龍江做得好的免疫組化實驗

免疫組化技術(shù)有哪些應(yīng)用,？

定位和定性是免疫組化比較大的優(yōu)勢。相比于其他蛋白檢測方法,，免疫組化具有定位較直接準(zhǔn)確,、定性靈敏度高，是定位檢測分析優(yōu)先方法,，尤其對于有些因子的轉(zhuǎn)位研究十分有用,。免疫組織化學(xué)的臨床應(yīng)用主要包括以下幾方面：惡性**的診斷與鑒別定性；確定轉(zhuǎn)移性惡性**的原發(fā)部位,；對某類**進行進一步的病理分型,；軟組織**診斷；為臨床提供治療方案的選擇,；近年來,，隨著免疫組織化學(xué)技術(shù)的發(fā)展和各種特異性抗體的出現(xiàn)，使許多疑難**得到了明確診斷,。免疫組化在**診斷和鑒別診斷中的實用價值受到了普遍的認(rèn)可,，其在低分化或未分化**的鑒別診斷時，準(zhǔn)確率可達50%-75%,。

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英瀚斯生物為您整理免疫組化實驗步驟

1,、石蠟切片置于65℃烘箱中烘片2h,，脫蠟至水，用PBS沖洗三次,，每次5min。

2,、切片置于EDTA緩沖液中微波修復(fù),，中火至沸后斷電，間隔10min低火至沸,。

3,、自然冷卻后PBS洗3次，每次5min,。4,、切片放入3%過氧化氫溶液，室溫下孵育10min,，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,。

5、PBS洗3次,，每次5min,，甩干后5%BSA封閉20min（封閉電荷）,。

6、去除BSA液,，每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織,，4℃過夜。

7,、PBS洗3次,，每次5min。

8,、去除PBS液,，每張切片加50μl-100μl相應(yīng)種屬的二抗，4℃孵育50min,。

9,、PBS洗3次，每次5min,。

10,、去除PBS液，每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液,，顯微鏡控制顯色,。

11、顯色完全后,，蒸餾水或自來水沖洗,，蘇木素復(fù)染，1%鹽酸酒精分化（1s）,，自來水沖洗,，氨水返藍(lán)，流水沖洗,。

12,、切片經(jīng)過梯度酒精（70-100%）10min一個梯度，脫水干燥,，二甲苯透明,，中性樹膠封固。

臨床應(yīng)用中,，藥物靶點免疫組化,，英瀚斯生物專業(yè)做實驗外包服務(wù)，一站式醫(yī)學(xué)科研平臺,。免疫組化及分子病理學(xué)方法在疾病診斷中只只起輔助醫(yī)療的作用,，而藥物病理學(xué)是用病理學(xué)的方法確定藥物醫(yī)療的靶點、評價藥物醫(yī)療的療效,、預(yù)測藥物醫(yī)療的反應(yīng),，因此藥物靶點免疫組化屬“單獨的診斷”,。因此對于對照的設(shè)置、質(zhì)量的控制均需要更高的要求,，如對試劑的要求,，不同于一般的診斷試劑，應(yīng)按對藥物管理的要求操作,。HER2蛋白著色3+者可作為臨床醫(yī)生建議患者接受曲妥珠單抗等藥物醫(yī)療的依據(jù),。英瀚斯生物做免疫組化怎么樣？

細(xì)胞屬性的判定,，免疫組化也可以進行這方面的臨床應(yīng)用,。通過特定抗體標(biāo)記出細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的抗原成分，來判定細(xì)胞的屬性,，確定cancer的來源,。如細(xì)胞角蛋白(CK)是上皮性標(biāo)記，CK陽性提示cancer為上皮源性cancer;降鈣素抗體是甲狀腺髓樣cancer特有的標(biāo)記;甲狀腺球蛋白(Tg)陽性提示是甲狀腺濾泡性cancer;前列腺特異性抗原(PSA)只見于前列腺上皮;膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)陽性則提示膠質(zhì)cancer;CD20和CD79a陽性則提示B細(xì)胞淋巴瘤;平滑肌肌動蛋白(Actin)陽性提示cancer為平滑肌源性;胃腸道間質(zhì)瘤中原cancer基因蛋白產(chǎn)物CD117陽性;血管源性cancer中內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物CD34陽性等等,。如果您需要做實驗外包,，可以與我們英瀚斯生物進行聯(lián)系。英瀚斯生物為您詳解免疫組化實驗指南,！云南細(xì)胞免疫組化哪家好

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實驗失敗常見問題分析有哪些：

為什么在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)所有的切片都成陰性？

答：這種現(xiàn)象主要是由操作不當(dāng)導(dǎo)致,，可能的原因有：1.染色操作不當(dāng),，致使染色失敗,；2.漏加一種抗體或者制備出的抗體沒有活性,；3.緩沖液中有疊氮化鈉，抑制了酶的活性,；4.復(fù)染或脫水劑使用不當(dāng)?shù)?。建議逐一排查，找到原因后重新進行實驗,。

在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)所有的切片都成陽性，這是為什么,？答：與上一個問題類似,，出現(xiàn)的原因也是試驗操作存在問題，可能的原因有：1.切片在染色過程中抗體過濃,，或者干片了,；使用的呈色底物溶液已變色或呈色反應(yīng)時間過長；3.抗體溫育的時間過長等,。

在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)切片的背景很深,，這是為什么,？答：以下幾方面會導(dǎo)致切片的背景過深：1.蛋白質(zhì)封閉不夠或所用血清溶血，造成抗體的非特異性反應(yīng),；2.內(nèi)源性過氧化酶沒有完全阻斷,，顯色過程中過氧化酶與酶底物反應(yīng)，造成背景,；3.底物呈色反應(yīng)時間過長或呈色反應(yīng)后漂洗不徹底,。 黑龍江做得好的免疫組化實驗

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