通過比較進行質量評估1.室內比較是采用同一個標本在同一參數下?經CASA多次測定后?應用適當的統(tǒng)計學方法對測得數值進行比較。在男科實驗室中對CASA系統(tǒng)的質量控制通常使用影像磁帶或完全相同的凍存**標本進行日間比較,。當室內比較作為結果質量的一種評估時?計算機中數值的在線獲得是極具優(yōu)勢的,。2.室間比較要求標本向其他幾個實驗室運送文獻中的一些報道闡述了該方面的經驗但是運動精子是不能在不受限制的條件下運輸的將其置于液氮中運送需進一步考慮更多的因素(解凍技術、標本的處理等)這些因素會影響活動力參數,;到目前為止室間比較的研究還未見滿意報道,;Jorgensen等進行了研究嘗試克服實驗室間運送解凍標本的困難其研究方式是:邀請四個實驗室的實驗人員攜帶各自的儀器到同一個地點以各自通常采用的實驗方法進行精子評估但未見明確的結論。3.對于精子活力測定CASA系統(tǒng)的測定與直觀評估的比較有文獻進行了報道但結果并不相同,。認為直觀評估揭示標準數值且其差異是由CASA系統(tǒng)的錯誤引起的該觀點是不正確的,;無論從理論上還是實踐中CASA數值比直觀評估所獲得的數值更接近于真值;對直線前進的精子比例而言這一點是非常正確的,。CASA系統(tǒng)減少了人為因素對檢測結果的影響,,提高了檢測的客觀性和可重復性?。上海水生動物精子分析頻閃光源
精子分析儀工作原理以灰度識別CASA為例,,采用高分辨率的攝影技術與顯微鏡結合,,**標本液化后吸入計數,通過顯微鏡放大后,,用圖像采集系統(tǒng)獲取精子動,、靜態(tài)圖像后輸入計算機。根據設定的精子大小和灰度,、精子運動移位及運動參數,,對采集圖像進行精子密度、活動力,、活動率,、運動特征等幾十項檢驗項目動態(tài)分析,由計算機處理后,,打印出“**分析檢查報告以及精子動態(tài)特征分布圖”,。一次能對1000個精子進行動態(tài)檢測分析,,2-3分鐘即可完成檢測[1]。優(yōu)點:操作簡便,,用量少,,檢測速度快,重復性優(yōu)于人工檢測,,并且能夠快速,、準確的測定精子密度、活力,、精子分級等,,還可提供精子運動狀態(tài)的多種參數等。缺點:影響分析結果的因素較多,,除**本身性質所含的固有誤差外,,不同的精子計數池的相對準確性和精確性可產生明顯不一致的效果。上海水生動物精子分析頻閃光源HAMILTON THORNE精子分析儀可分析參數,,鞭打頻率(BCF)?:精子曲線路徑跨越其平均路徑的平均頻率,。
在精子形態(tài)學檢查中,通過CASA系統(tǒng)對精子形態(tài)學特征進行分析,,有些特征(細胞大小,、形狀、光學密度,、尾的存在以及其它)可由操作者選擇,,這樣就會引起同一標本在不同實驗室或不同分析者測得的結果一致性較差[10]。4結論和展望計算機輔助**分析具有較好的可靠性,、重復性和穩(wěn)定性,,與傳統(tǒng)的光學顯微鏡目測估計相比,更具有快速方便,、對比性強,、便于交流等明顯優(yōu)點[11],常規(guī)**檢查無法測定精子微細運動特點,,顯示CASA在男性不育癥診斷篩選中的優(yōu)越性,。王益鑫亦發(fā)現,部分手工**檢查正常的不育患者,,進行**全自動分析及生化檢測,,均發(fā)現明顯異常[12]。因此,,CASA系統(tǒng)在男性生殖能力檢驗方面具有重要的實際應用意義,。
CASA,即計算機輔助精子分析,,是一種利用技術手段對精子活力,、濃度和形態(tài)進行精確評估的方法,。WHO第五版指南強調,相比人工檢測,,CASA提供更準確的數據和精子動力學參數,,如前向運動和超活化運動,以及獲能精子特征參數,。研究顯示,,CASA檢測的精子參數與體內外受精成功率和受孕時間有***關聯(lián)。使用CASA分析儀,,通常通過相差顯微鏡識別活動精子,,適用于精子動力學分析。但要確??煽拷Y果,,操作者需注意標本制備、幀頻率,、精子濃度等因素,。每份樣本至少需要分析200個活動精子的運動軌跡,更多精子樣本有助于分類和變異性的分析,。國內已有自主研發(fā)的精子分析儀,通常進行兩次分析,,每次至少200個精子,,結果通過統(tǒng)計學分析得出。CASA在評估精子濃度時,,需精確測量精子體積,,確保**完全液化并充分混勻。計數板的精確性和計數一致性是關鍵,,每次檢測需滿足5個視野和200條以上精子的比較低要求,。對于高濃度**,可能需要稀釋以減少誤差,。形態(tài)分析方面,,CASA能夠定量評估精子頭部、中段和主段,,尾部缺陷可通過活力評估,。對于碎片過多或黏稠的**,可能需要洗滌以減少背景干擾,。CASA中涉及一系列術語,,如VCL(曲線速度)、VSL(直線速度)等,,它們反映了精子運動的不同特性,。CASA系統(tǒng)操作簡便,,檢測速度快,且重復性優(yōu)于人工檢測,。
前沿性檢查:目前不作為生育力低下男性初步評估的常規(guī)方法,。這一部分包括了非常專業(yè)化的、主要用于研究的方法和其他新興檢測技術,。有研究認為,,氧化應激可能是影響人類精子功能和妊娠結局的重要因素;新的證據也表明了精子DNA完整性和染色質組裝與生育力的關系,。前沿性檢查一節(jié)中詳細介紹了精子氧化應激和活性氧實驗,、精子染色質檢測(苯胺藍和色霉素A3染色)的具體實驗操作及討論。手冊重寫了計算機輔助精子分析(CASA)部分,,強調了CASA對于檢測精子濃度的局限性與質控要求,,增加了CASA檢測精子超活化運動的內容。對精子跨膜離子流和轉運的功能分析,,可更好地了解男性不育因素和男性生殖***疾病,。為此,手冊新增了檢測精子跨膜離子流和轉運的內容,。選擇合適的CASA檢測原理和設備,,確保幀率要求,避免因設備問題影響檢測結果?,。上海狗精子分析DSL
全自動精子分析儀極大提高臨床檢驗水平,,廣泛應用于泌尿科,男性科以及計劃生育,、優(yōu)生優(yōu)育研究等,。上海水生動物精子分析頻閃光源
CASA系統(tǒng)進行**分析應注意以下幾點:3.2**分析儀閾值的確定(1)精子灰度、對比度閾值:由于分析儀是根據灰度的高低來判斷精子的真?zhèn)?,對亮度和對比度要求特別高,,檢測時應多次試用,尋找能準確識別精子的比較好灰度閾值[8],。(2)碎片:測定精子濃度準確性受**中細胞成份和非精子的顆粒物質的干擾,,測定活動精子的百分率也受精子中非精子物質的影響[9],這些也是需要注意的,。對于系統(tǒng)誤認為精子的非精子成分,,如精原細胞、白細胞和非白細胞顆粒等,,可人為準確記數后在可刪除雜質一欄將其舍去,。3.3出現1次異常結果應間隔復查反復檢查2?3次方能得出比較正確的結果。3.4對于無精子的患者應仔細進行視野檢查注意不要將雜質誤認為精子計數在內,,應將**3000ɡ離心15分鐘后,,再涂片檢查,,確認無精后再出報告。上海水生動物精子分析頻閃光源