定量蛋白質(zhì)組學(xué)的方法學(xué)背景和意義:從生命活動的直接執(zhí)行者——蛋白質(zhì)的角度研究生命現(xiàn)象和規(guī)律(特別是疾病防治和病理研究)已成為研究生命科學(xué)的主要手段。而這些研究往往離不開對細胞,、組織中含有蛋白質(zhì)種類和表達量的研究,。對處不同時期、不同條件下蛋白質(zhì)表達水平變化的研究,識別功能模塊和路徑,,監(jiān)控疾病的生物標志物,,這些研究都需要對蛋白質(zhì)進行鑒定和定量。生物質(zhì)譜技術(shù)的出現(xiàn)和不斷成熟為蛋白質(zhì)差異表達分析提供了更可靠,、動態(tài)范圍更廣的研究手段,。基于質(zhì)譜技術(shù),,科學(xué)家們不斷開發(fā)出新的定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法,,來了解細胞、組織或生物體的整體蛋白質(zhì)動力學(xué),。蛋白質(zhì)組研究技術(shù)涉及到各種重要的生物學(xué)現(xiàn)象,,如信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細胞分化,、蛋白質(zhì)折疊等,。南京定量N糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域
蛋白質(zhì)組學(xué)有什么用,能給我實驗帶來什么,?可以大規(guī)模鑒定特定組織,、細胞等各種樣本的蛋白質(zhì)種類、修飾狀態(tài)以及蛋白質(zhì)之間的相互作用,,以及對這些蛋白質(zhì)功能分析,、分類;可以對不同條件下某一特定樣本進行大規(guī)模的蛋白質(zhì)(包括翻譯后修飾蛋白)表達量變化分析,,篩選潛在biomarker,,篩選重要信號通路;依托大樣本量,,可以實現(xiàn)疾病的分子分型分析,、重要潛在靶標鑒定。質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)和芯片哪個更好出結(jié)果,?若有對應(yīng)物種的全基因組并有預(yù)測的全蛋白序列庫,,可優(yōu)先選擇全蛋白序列庫;若無全蛋白序列庫,,有對應(yīng)物種對應(yīng)組織的轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果并,,可以使用轉(zhuǎn)錄組的測序結(jié)果(mRNA三框翻譯或者預(yù)測CDS,并翻譯成氨基酸序列),;若基因組,、轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫都沒有,優(yōu)先選擇同源性比較接近的物種的全蛋白數(shù)據(jù)庫,,若近源物種沒有合適的全蛋白庫,,則選擇更大的蛋白全庫(如動物全庫,、綠色植物全庫、微生物庫等),。貴州蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的本質(zhì)(從分析化學(xué)角度來看),,就是對蛋白質(zhì)的定性定量分析。
蛋白組學(xué)常見研究模式主要有兩種:1.通過蛋白質(zhì)組學(xué)尋找疾病發(fā)生的發(fā)展的新型標志物,;2.結(jié)合其它組學(xué)建立疾病或者研究主題的表達譜和分子機制,。蛋白質(zhì)組學(xué)( proteomics) 是指系統(tǒng)研究某一基因組所表達的所有蛋白質(zhì),包括組成蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的氨基酸序列,,蛋白質(zhì)的豐度,,蛋白質(zhì)的修飾以及蛋白質(zhì)之間的相互作用,。蛋白質(zhì)組和基因組( genome)在概念上有相關(guān)性,,表示某一個蛋白質(zhì)組的蛋白質(zhì)是由基因組所編碼的,然而蛋白質(zhì)組學(xué)和基因組學(xué)在研究對象和研究方法上有很大的區(qū)別,。
蛋白質(zhì)組學(xué)常用技術(shù):非靶向蛋白組學(xué):蛋白質(zhì)定性(膠條鑒定和溶液鑒定),,高通量定量蛋白組(Labelfree、iTRAQ/TMT和DIA定量),,多肽組學(xué),。蛋白質(zhì)組研究技術(shù)在研究對象上,覆蓋了原核微生物,、真核微生物,、植物和動物等范圍。蛋白質(zhì)組學(xué)主要以全蛋白組(組織,、細胞),、線粒體蛋白組、葉綠體蛋白組和外泌體蛋白組為研究對象,,通過對蛋白組進行定性,、定量、分子功能分析,、通路互作分析和蛋白互作分析,,揭示生物學(xué)功能、作用機制,、疾病診斷的標志物以及預(yù)測蛋白的上,、下游變化關(guān)系。蛋白質(zhì)組學(xué)可以克服核酸水平預(yù)測的不確定性,、反映核酸翻譯后修飾情況,。蛋白質(zhì)組可以隨著組織、甚至環(huán)境狀態(tài)的不同而改變,。
PRM靶向蛋白質(zhì)組學(xué):產(chǎn)品分類:a.相對定量(目的同WB),。b.一定定量(目的同Elisa),。技術(shù)優(yōu)勢:(1)無需抗體,可直接對樣本中目標蛋白質(zhì)進行定量分析,。(2)高特異性,、準確度和靈敏度,靶向檢測目標蛋白對應(yīng)的多個unique肽段,。(3)通量高,,可以同時實現(xiàn)幾十個蛋白的定量檢測。樣本要求:動物及臨床組織標本100mg/sample,,血清,、血漿200μL/sample,細胞,、微生物1×107cells/sample,。應(yīng)用方向:驗證修飾和非修飾定量蛋白組學(xué)結(jié)果;目標蛋白相對定量和一定定量分析,。蛋白質(zhì)組學(xué)屬于后基因組時代的科學(xué)研究,,針對基因表達產(chǎn)物進行檢測與定量。蛋白質(zhì)組學(xué)在生物學(xué)領(lǐng)域的研究中的應(yīng)用是怎樣的,?南京定量N糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域
蛋白質(zhì)組學(xué)研究策略有什么,?南京定量N糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域
蛋白質(zhì)組學(xué):蛋白質(zhì)組一詞,源于蛋白質(zhì)與基因組兩個詞的組合,,意指“一種基因組所表達的全套蛋白質(zhì)”,,即包括一種細胞乃至一種生物所表達的全部蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)組學(xué)本質(zhì)上指的是在大規(guī)模水平上研究蛋白質(zhì)的特征,,包括蛋白質(zhì)的表達水平,,翻譯后的修飾,蛋白與蛋白相互作用等,,由此獲得蛋白質(zhì)水平上的關(guān)于疾病發(fā)生,,細胞代謝等過程的整體而全方面的認識。蛋白質(zhì)組的研究不只能為生命活動規(guī)律提供物質(zhì)基礎(chǔ),,也能為眾多種疾病機理的闡明及攻克提供理論根據(jù)和解決途徑,。通過對正常個體及病理個體間的蛋白質(zhì)組比較分析,我們可以找到某些“疾病特異性的蛋白質(zhì)分子”,,它們可成為新藥物設(shè)計的分子靶點,,或者也會為疾病的早期診斷提供分子標志。確實,,那些世界范圍內(nèi)銷路*的藥物本身是蛋白質(zhì)或其作用靶點為某種蛋白質(zhì)分子,。因此,蛋白質(zhì)組學(xué)研究不只是探索生命奧秘的必須工作,,也能為人類健康事業(yè)帶來巨大的利益,。南京定量N糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域