細(xì)胞免疫熒光步驟是什么呢？步驟：1. 細(xì)胞一定要貼在玻片上（較好可以放入24孔板）,，為后面照像打基礎(chǔ),。細(xì)胞密度適中,，大約60-75%滿(mǎn)片即可,，否則容易脫片。2. 取出細(xì)胞后用4%多聚甲醛固定15分鐘,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。（以下各步驟切毋使玻片干燥）3. PBS沖洗；4. 0.1%Triton作用20分鐘,；5. PBS沖洗,；6. 10%正常血清封閉10分鐘；7. 加入一抗,，4度孵育過(guò)夜（找個(gè)小瓶蓋將小玻片支起來(lái),，抗體就不容易溢出），還要記住“砸片”,，就是抗體從較高處落到片子上,，以分布均勻?？贵w稀釋度1：60,，較常用！8. PBS沖洗4次,，各5分鐘,；9加入熒光二抗，室溫30分鐘,?？贵w稀釋度1：400，較常用,！10. 90%甘油封片,。也很關(guān)鍵阿，多封幾次才有體會(huì),。12. 避光保存,，或到顯微鏡下觀察。免疫熒光技術(shù)具有高靈敏度和高特異性,，可以檢測(cè)非常低濃度的目標(biāo)分子,。OPG免疫組化

熒光素標(biāo)記抗體的方法：方法及步驟：①抗體的準(zhǔn)備：取適量已知球蛋白濃度之溶液，置入三角燒瓶中,，加入生理鹽水及碳酸鹽緩沖液,，使然后蛋白濃度為20mg/ml，緩沖液容量為總量的1/10,，混勻,，將三角燒瓶置冰槽中,，電磁攪拌（速度適當(dāng)以不起泡沫為宜）5～10min。②熒光素的準(zhǔn)備：根據(jù)欲標(biāo)記的蛋白質(zhì)總量,，按每毫克蛋白加0.01mg熒光素,，用分析天平準(zhǔn)確稱(chēng)所取所需的異硫氰酸熒光素粉末。③結(jié)合（或稱(chēng)標(biāo)記）：邊攪拌邊將稱(chēng)取的熒光色素漸漸加入球蛋白溶液中,，避免將熒光素粘于三角燒瓶壁或攪拌玻棒上（大約5～10min內(nèi)加完）,，加畢后，繼續(xù)攪拌12～18h,。結(jié)合期間應(yīng)保持蛋白溶液于4℃左右,，故須及時(shí)添冰去水；亦可將結(jié)合裝置安放在4℃冰箱或冰庫(kù)中,。OPG免疫組化免疫熒光技術(shù)中,，以熒光物質(zhì)標(biāo)記抗體來(lái)定位抗原物質(zhì)的方法被稱(chēng)為熒光抗體技術(shù)。

免疫熒光技術(shù)的主要特點(diǎn)是：特異性強(qiáng),、敏感性高,、速度快。主要缺點(diǎn)是：非特異性染色問(wèn)題尚未完全解決,，結(jié)果判定的客觀性不足,，技術(shù)程序也還比較復(fù)雜。熒光免疫法按反應(yīng)體系及定量方法不同,，還可進(jìn)一步分做若干種,。與放射免疫法相比，熒光免疫法無(wú)放射性污染,，并且大多操作簡(jiǎn)便,，便于推廣。國(guó)外生產(chǎn)的TDM用試劑盒,，有相當(dāng)一部分即屬于此類(lèi),，并且還有TDM熒光偏振免疫分析用的自動(dòng)分析儀生產(chǎn)。由于一般熒光測(cè)定中的本底較高等問(wèn)題,，熒光免疫技術(shù)用于定量測(cè)定有一定困難,。新發(fā)展了幾種特殊的熒光免疫測(cè)定，與酶免疫測(cè)定和放射免疫分析一樣,，在臨床檢驗(yàn)中應(yīng)用,。

細(xì)胞的固定及免疫熒光：注意事項(xiàng)：（1）取細(xì)胞爬片時(shí)，動(dòng)作應(yīng)輕柔,，防止將細(xì)胞爬片夾碎,，影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。（2）種細(xì)胞過(guò)程中,，要注意將細(xì)胞輕柔混勻,，“八”字或者“十”字形搖晃,，防止細(xì)胞局部生長(zhǎng)過(guò)密。（3）稀釋,、加二抗（熒光抗體）及此后的洗滌過(guò)程中注意避光。（4）細(xì)胞爬片進(jìn)行免疫熒光之后,，需要盡快拍照,，防止免疫熒光淬滅?；蛘叻庞诎岛袃?nèi),，暫時(shí)保存于4度冰箱，盡快拍照,。（5）在進(jìn)行熒光顯微鏡拍照時(shí),，要根據(jù)熒光抗體選擇合適的激發(fā)光源。PI/DAPI能將凋亡和未凋亡的細(xì)胞都染成紅色/藍(lán)色,，只在凋亡的細(xì)胞核中才有FITC-12-dUTP摻入而定位的綠色熒光,。免疫熒光技術(shù)可以用于研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位。

其他熒光物質(zhì)：酶作用后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)某些化合物本身無(wú)熒光效應(yīng),，一旦經(jīng)酶作用便形成具有強(qiáng)熒光的物質(zhì),。例如4-甲基傘酮-β-D半乳糖苷受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基傘酮，后者可發(fā)出熒光,，激發(fā)光波長(zhǎng)為360nm,，發(fā)射光波長(zhǎng)為450nm。其他如堿性酸酶的底物4-甲基傘酮磷酸鹽和辣根過(guò)氧化物酶的底物對(duì)羥基乙酸等,。鑭系螯合物某些3價(jià)稀土鑭系元素如銪（Eu3）,、鋱（Tb3）、鈰（Ce3）等的螯合物經(jīng)激發(fā)后也可發(fā)射特征性的熒光,，其中以Eu3應(yīng)用較廣,。Eu3螯合物的激發(fā)光波長(zhǎng)范圍寬，發(fā)射光波長(zhǎng)范圍窄,，熒光衰變時(shí)間長(zhǎng),，較適合用于分辨熒光免疫測(cè)定。使用已知熒光抗原標(biāo)記物質(zhì)來(lái)檢查相應(yīng)抗體的方法被稱(chēng)為熒光抗原技術(shù),。ERK免疫熒光試驗(yàn)

免疫熒光技術(shù)可以用于研究免疫相關(guān)疾病和自身免疫病,。OPG免疫組化

細(xì)胞免疫熒光步驟對(duì)大家來(lái)說(shuō)一定是很陌生的，他是一種抗原抗體反應(yīng),，好像對(duì)我們來(lái)說(shuō)他顯得很遙遠(yuǎn)的樣子,，因?yàn)槲覀儾⒉涣私馑茏鍪裁矗ㄟ^(guò)這種技術(shù)可以讓我們對(duì)抗原或抗體的性質(zhì),、定位一次來(lái)分析出更多的數(shù)據(jù),。細(xì)胞免疫熒光,，這對(duì)很多人來(lái)說(shuō)都是一次聽(tīng)說(shuō)這個(gè)東西，也不知道他對(duì)我們會(huì)有什么好處與壞處,，科學(xué)研究就是這樣子的,，普通老百姓是不會(huì)明白其中的道理的，但是這些研究也是確實(shí)的在我們的生活中取得了成果,，能夠讓大家過(guò)的更加舒適,。OPG免疫組化

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