細胞免疫熒光步驟對大家來說一定是很陌生的,，他是一種抗原抗體反應,，好像對我們來說他顯得很遙遠的樣子,，因為我們并不了解他能做什么,，通過這種技術(shù)可以讓我們對抗原或抗體的性質(zhì)、定位一次來分析出更多的數(shù)據(jù),。細胞免疫熒光,，這對很多人來說都是一次聽說這個東西，也不知道他對我們會有什么好處與壞處,，科學研究就是這樣子的,，普通老百姓是不會明白其中的道理的,，但是這些研究也是確實的在我們的生活中取得了成果，能夠讓大家過的更加舒適,。免疫熒光技術(shù)可以用于研究免疫相關(guān)疾病和自身免疫病,。CD163免疫熒光試驗

免疫熒光應用范圍：其應用范圍極其普遍，可以測定內(nèi)分泌,、蛋白質(zhì),、細胞因子、細胞表面抗原,、多肽,、核酸、受體,、神經(jīng)遞質(zhì),、肉瘤標志物、血藥濃度等各種生物活性物質(zhì),。根據(jù)診斷類別,，又可分為傳染性疾病、內(nèi)分泌,、藥物檢測、免疫學,、血型鑒定等,。免疫熒光實驗步驟：洗滌：PBS洗滌5min*3次。封閉：使用封閉液對樣本進行封閉,，一般1h,。加一抗：使用合適濃度的一抗與樣本4℃過夜。洗滌：PBS或PBST洗滌5min*3次,。加二抗：使用間接法時需要加二抗處理,，根據(jù)說明書使用合適的濃度，避光處理1h（后面步驟均需避光）,。洗滌：PBS或PBST洗滌5min*3次,。封片：滴一滴防淬滅劑，封片,?？闪⒓从^察后暫存4℃盡快觀察。VEGFR2免疫抗體熒光抗原法是利用已知的熒光標記物來追蹤或檢查相應抗體的方法,。

免疫熒光技術(shù)又稱熒光抗體技術(shù),，是標記免疫技術(shù)中發(fā)展較早的一種。它是在免疫學,、生物化學和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項技術(shù),。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合，利用抗原抗體反應進行組織或細胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。免疫熒光技術(shù)是標記免疫技術(shù)中發(fā)展較早的一種．它是在免疫學,、生物化學和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項技術(shù),。Coons等于1941年初次采用熒光素進行標記抗體獲得成功。經(jīng)過幾十年的發(fā)展,，該技術(shù)已相當成熟,。用熒光抗體示蹤或檢查相應抗原的方法稱熒光抗體法；用已知的熒光抗原標記物示蹤或檢查相應抗體的方法稱熒光抗原法,。這兩種方法總稱免疫熒光技術(shù),。在實際工作中熒光抗原技術(shù)很少應用，所以人們習慣將熒光抗體技術(shù)稱為免疫熒光技術(shù)

熒光標記二抗的選擇普遍,；與使用熒光素結(jié)合一抗的檢測相比,，成本較低。間接免疫熒光的缺點：由于需要具有兩種不同物種反應性的兩種抗體,，因此物種交叉反應性問題增加,；與直接免疫熒光相比，時間更長（操作步驟更多）,。間接免疫熒光的優(yōu)點：通過增加能夠與一抗結(jié)合的二抗數(shù)量進行信號放大,；與直接免疫熒光相比，通過信號放大提高檢測靈敏度,；熒光標記二抗的選擇普遍,；與使用熒光素結(jié)合一抗的檢測相比，成本較低,。間接免疫熒光的缺點：由于需要具有兩種不同物種反應性的兩種抗體,，因此物種交叉反應性問題增加；與直接免疫熒光相比,，時間更長（操作步驟更多）,。熒光抗體技術(shù)具有高靈敏度和高特異性，可以實現(xiàn)精確的免疫檢測,。

細胞的固定及免疫熒光：1)吸除培養(yǎng)基,，一般先加入PBS浸洗細胞 3 次，每次 5 min,。2)向孔內(nèi)加入4%多聚甲醛1ml,，進行細胞固定，室溫固定20分鐘,。3)吸去多聚甲醛,，使用PBS浸洗 3 次，每次 5 min,。4)向孔內(nèi)加入0.5%Triton X-100(PBS配制)室溫通透20min,，目的是使細胞通透,。5) 除去Triton X-100，使用PBS浸洗 3 次,，每次 5 min,。6)用10%的與二抗同源的山羊血清(PBS配制)或者5%BSA封閉2小時（選擇的封閉液與后面操作過程中抗體稀釋液一致）。封閉后不需要用PBS清洗,。7)吸去封閉液,，向每孔滴加足夠量適宜濃度的一抗（一次使用抗體可以根據(jù)抗體說明書推薦濃度，后續(xù)實驗可以摸索抗體的適宜濃度）,，4℃濕盒內(nèi)孵育過夜,。熒光抗體技術(shù)可以用于檢測和定位細胞或組織中的特定抗原物質(zhì)。VEGFR2免疫抗體

免疫熒光技術(shù)可以用于研究神經(jīng)系統(tǒng)的功能和疾病,。CD163免疫熒光試驗

細胞免疫熒光簡單實驗步驟如下：1. 漂洗血清蛋白H7,、2-7、4 37度 PBS 2小時,。2. -20度甲醇固定20分鐘后,自然,、干燥 10分鐘。3. PBS洗凈：3min×3,。4. 1%Triton：25 min~30 min,、配成50 ultriton+5 mlpBS。5. PBS洗凈：2×5 min,。6. 羊血清封閉：37度,，20分鐘。7. 一抗,，4度過夜，一般要大于18小時或者37度,，1-2小時,。8. 4度PBS洗凈，3 min×5次,。9. 二抗37度小于一小時,。10. 37度 PBS洗凈，3×5 min,。11. 涼干封片（封閉液PH8.5）,；不管采用何種方法，在使用PBS緩沖液漂洗時,，都要漂洗干凈并且要測下pH值,，可以使用PBS多清洗幾次，也可以延長PBS清洗時間,，如果結(jié)果背景較高可以延長漂洗的次數(shù)和時,。CD163免疫熒光試驗

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