免疫熒光技術(shù)的主要特點是：特異性強、敏感性高,、速度快。主要缺點是：非特異性染色問題尚未完全解決,，結(jié)果判定的客觀性不足,，技術(shù)程序也還比較復(fù)雜。熒光免疫法按反應(yīng)體系及定量方法不同,，還可進(jìn)一步分做若干種,。與放射免疫法相比，熒光免疫法無放射性污染,，并且大多操作簡便,，便于推廣。國外生產(chǎn)的TDM用試劑盒,，有相當(dāng)一部分即屬于此類,，并且還有TDM熒光偏振免疫分析用的自動分析儀生產(chǎn)。由于一般熒光測定中的本底較高等問題,，熒光免疫技術(shù)用于定量測定有一定困難,。新發(fā)展了幾種特殊的熒光免疫測定，與酶免疫測定和放射免疫分析一樣,，在臨床檢驗中應(yīng)用,。免疫熒光在醫(yī)學(xué)診斷中起著重要作用,，可以用于檢測病原體,、肉瘤標(biāo)志物等。IL-6免疫熒光染色

免疫熒光實驗的注意事項：為了保證熒光染色的正確性,，初次試驗時需設(shè)置下述對照,，以排除某些非特異性熒光染色的干擾。①標(biāo)本自發(fā)熒光對照：標(biāo)本加1-2滴0.01mol/L,，pH7.4的PBS,。②特異性對照（抑制試驗）：標(biāo)本加未標(biāo)記的特異性抗體，再加熒光標(biāo)記的特異性抗體,。③陽性對照：已知的陽性標(biāo)本加熒光標(biāo)記的特異性抗體,。如果標(biāo)本自發(fā)熒光對照和特異性對照呈無熒光或弱熒光，陽性對照和待檢標(biāo)本呈強熒光,，則為特異性陽性染色,。一般標(biāo)本在高壓汞燈下照射超過3min，就有熒光減弱現(xiàn)象,，經(jīng)熒光染色的標(biāo)本較好在當(dāng)天觀察,，隨著時間的延長，熒光強度會逐漸下降,。collagen3免疫組化IHC免疫熒光技術(shù)在生物學(xué)研究,、醫(yī)學(xué)診斷和藥物開發(fā)等領(lǐng)域具有普遍應(yīng)用。

免疫熒光注意事項：對照實驗的設(shè)置：1,、內(nèi)源性組織背景對照：某些細(xì)胞和組織可能有固有的生物學(xué)性質(zhì),，會產(chǎn)生背景熒光,，對結(jié)果產(chǎn)生影響，例如色素脂褐質(zhì),。因此在孵育一抗前,，應(yīng)對樣品進(jìn)行觀察，確?？乖旧頉]有信號,。2、陽性對照：用確認(rèn)含有待測抗原的組織或細(xì)胞,，與待測標(biāo)本進(jìn)行統(tǒng)一處理,，結(jié)果應(yīng)為陽性，可證明待測抗原有一定活性并且實驗過程中用的試劑及方法均可靠,。3,、陰性對照：與陽性對照相反，用明確不含有待測抗原的細(xì)胞或組織切片染色,，結(jié)果若為陰性,，可排除染色過程中由于非特異性染色造成的假陽性結(jié)果。

熒光標(biāo)記二抗的選擇普遍,；與使用熒光素結(jié)合一抗的檢測相比,，成本較低。間接免疫熒光的缺點：由于需要具有兩種不同物種反應(yīng)性的兩種抗體,，因此物種交叉反應(yīng)性問題增加,；與直接免疫熒光相比，時間更長（操作步驟更多）,。間接免疫熒光的優(yōu)點：通過增加能夠與一抗結(jié)合的二抗數(shù)量進(jìn)行信號放大,；與直接免疫熒光相比，通過信號放大提高檢測靈敏度,；熒光標(biāo)記二抗的選擇普遍,；與使用熒光素結(jié)合一抗的檢測相比，成本較低,。間接免疫熒光的缺點：由于需要具有兩種不同物種反應(yīng)性的兩種抗體,，因此物種交叉反應(yīng)性問題增加；與直接免疫熒光相比,，時間更長（操作步驟更多）,。免疫熒光技術(shù)可以用于研究細(xì)胞遷移和細(xì)胞黏附。

免疫熒光Coons等于1941年初次采用熒光素進(jìn)行標(biāo)記而獲得成功,。這種以熒光物質(zhì)標(biāo)記抗體而進(jìn)行抗原定位的技術(shù)稱為熒光抗體技術(shù),。用熒光抗體示蹤或檢查相應(yīng)抗原的方法稱熒光抗體法；用已知的熒光抗原標(biāo)記物示蹤或檢查相應(yīng)抗體的方法稱熒光抗原法,。這兩種方法總稱免疫熒光技術(shù),，因為熒光色素不但能與抗體球蛋白結(jié)合,，用于檢測或定位各種抗原，也可以與其他蛋白質(zhì)結(jié)合,，用于檢測或定位抗體,，但是在實際工作中熒光抗原技術(shù)很少應(yīng)用，所以人們習(xí)慣稱為熒光抗體技術(shù),，或稱為免疫熒光技術(shù),。以熒光抗體方法較常用。用免疫熒光技術(shù)顯示和檢查細(xì)胞或組織內(nèi)抗原或半抗原物質(zhì)等方法稱為免疫熒光細(xì)胞（或組織）化學(xué)技術(shù),。免疫熒光技術(shù)可以用于研究疾病的發(fā)生機制和醫(yī)治效果評估,。IL-6免疫熒光染色

免疫熒光技術(shù)可以用于研究細(xì)胞凋亡和細(xì)胞存活。IL-6免疫熒光染色

檢測復(fù)雜的生物學(xué)結(jié)構(gòu)需要較高清晰度的熒光信號,，并將熒光信號從背景噪聲中分離開來,。標(biāo)準(zhǔn)的免疫熒光標(biāo)記很少能夠獲得較佳信噪比的成像效果。獲得良好圖片和較佳的可供發(fā)表的高質(zhì)量圖像之間的差異就在于：需要精細(xì)調(diào)整樣品信號達(dá)到峰值特異性,、高清晰度和較佳放大倍數(shù),。雖然熒光基團是進(jìn)行高質(zhì)量細(xì)胞成像的較佳選擇，但不可避免地也極易發(fā)生光漂白,，即熒光信號的光化學(xué)降解或衰退,。任何光敏感度的下降都可能導(dǎo)致數(shù)據(jù)出現(xiàn)偏差，產(chǎn)生假性結(jié)果,?？勾銣绶馄瑒┛梢员Ｗo(hù)熒光標(biāo)記蛋白的穩(wěn)定性，維持?jǐn)?shù)周乃至數(shù)月的圖像信號完整度,。IL-6免疫熒光染色