細(xì)胞的固定及免疫熒光：吸去一抗,，使用PBS浸洗 3 次,，每次 5 min。向孔內(nèi)滴加足夠量適宜濃度的二抗,，37℃,，室溫避光孵育1小時(shí)。注意二抗帶有熒光素標(biāo)記,，因此操作過程盡量在暗處進(jìn)行,。吸去二抗，使用PBS浸洗 3 次,，每次 5 min,。向玻片上滴加DAPI，或者Hoechst復(fù)染細(xì)胞核,，一般為藍(lán)色熒光,；避光孵育5-10min。使用PBS輕洗細(xì)胞3 次,，每次 5 min,，洗去多余的DAPI。取爬片時(shí)由于爬片與培養(yǎng)皿底結(jié)合較緊,，張力較大,，可將注射器針頭針尖向背面做個(gè)小鉤，這樣將爬片輕輕勾起,，用小鑷子取出即可,。用吸水紙吸干爬片上的液體，用含抗熒光淬滅劑的封片液封片,，注意將爬片反過來貼于多聚賴氨酸載玻片上,，然后在熒光顯微鏡下觀察并采集圖像，注意選擇抗體對(duì)應(yīng)的激發(fā)光源。免疫熒光技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究中具有普遍的應(yīng)用前景,。CD14免疫熒光檢查

細(xì)胞免疫熒光步驟對(duì)大家來說一定是很陌生的,，他是一種抗原抗體反應(yīng)，好像對(duì)我們來說他顯得很遙遠(yuǎn)的樣子,，因?yàn)槲覀儾⒉涣私馑茏鍪裁?，通過這種技術(shù)可以讓我們對(duì)抗原或抗體的性質(zhì)、定位一次來分析出更多的數(shù)據(jù),。細(xì)胞免疫熒光,，這對(duì)很多人來說都是一次聽說這個(gè)東西，也不知道他對(duì)我們會(huì)有什么好處與壞處,，科學(xué)研究就是這樣子的,，普通老百姓是不會(huì)明白其中的道理的，但是這些研究也是確實(shí)的在我們的生活中取得了成果,，能夠讓大家過的更加舒適,。Brdu免疫熒光分析熒光抗體技術(shù)可用于檢測(cè)和定位各種抗原，也可以用于檢測(cè)和定位抗體,。

其他熒光物質(zhì)：1．酶作用后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)某些化合物本身無熒光效應(yīng),，一旦經(jīng)酶作用便形成具有強(qiáng)熒光的物質(zhì)。例如4-甲基傘酮-β-D半乳糖苷受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基傘酮,，后者可發(fā)出熒光,，激發(fā)光波長為360nm，發(fā)射光波長為450nm,。其他如堿性酸酶的底物4-甲基傘酮磷酸鹽和辣根過氧化物酶的底物對(duì)羥基乙酸等,。2．鑭系螯合物某些3價(jià)稀土鑭系元素如銪（Eu3+）、鋱（Tb3+）,、鈰（Ce3+）等的螯合物經(jīng)激發(fā)后也可發(fā)射特征性的熒光,，其中以Eu3+應(yīng)用較廣。Eu3+螯合物的激發(fā)光波長范圍寬,，發(fā)射光波長范圍窄,，熒光衰變時(shí)間長，較適合用于分辨熒光免疫測(cè)定,。所需要的儀器：熒光顯微鏡,、顯微熒光分光光度計(jì)、流式細(xì)胞儀和時(shí)間分辨熒光計(jì)等儀器激光共聚焦顯微鏡,。

細(xì)胞免疫熒光：細(xì)胞種板與細(xì)胞爬片制備：1) 細(xì)胞密度在90%-95%左右,，用預(yù)熱胰酶消化細(xì)胞后重懸細(xì)胞于完全培養(yǎng)基中，充分吹打,，使之成單細(xì)胞懸液,，計(jì)數(shù),。2)取細(xì)胞培養(yǎng)12孔板，在每個(gè)孔放爬片的位置根據(jù)爬片的大小,，先在每個(gè)孔里準(zhǔn)備放爬片的位置滴幾滴培養(yǎng)基,，然后將爬片置于液滴上，壓緊,，使爬片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起,，防止加細(xì)胞懸液時(shí)爬片漂起，造成雙層細(xì)胞貼片,。根據(jù)自己的需要選擇合適的細(xì)胞密度種入12孔板培養(yǎng)板內(nèi),。3)24h或者48h后，根據(jù)細(xì)胞生長速度快慢,，觀察判斷細(xì)胞密度,，約90%時(shí)進(jìn)行細(xì)胞免疫熒光。免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)用于顯示和檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的抗原或半抗原物質(zhì),。

通過不同顏色熒光標(biāo)記不同的靶標(biāo),，可以直觀的觀察同一樣品細(xì)胞內(nèi)不同結(jié)構(gòu)和蛋白。熒光標(biāo)記靶標(biāo)的方法主要包括熒光染料,、免疫標(biāo)記、熒光融合蛋白等——這幾種方法均可選擇性標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)的結(jié)構(gòu)和蛋白,，讓您在成像時(shí)更輕松地進(jìn)行觀察,。細(xì)胞生物學(xué)采用的很多熒光工具基本上都是熒光基團(tuán)。這些熒光基團(tuán)經(jīng)過不同的方法修飾或結(jié)合到不同的分子上,，從而具備了某些的功能與特定的細(xì)胞器或蛋白結(jié)合,。通過化學(xué)修飾，單個(gè)熒光基團(tuán)可以產(chǎn)生許多變體形式,，且每種變體都有不同的特異性,。免疫熒光技術(shù)可以用于研究內(nèi)臟移植和免疫抑制。P-AKT 1/2/3免疫熒光

免疫熒光技術(shù)可以用于研究疾病的發(fā)生機(jī)制和醫(yī)治效果評(píng)估,。CD14免疫熒光檢查

細(xì)胞的固定及免疫熒光：注意事項(xiàng)：（1）取細(xì)胞爬片時(shí),，動(dòng)作應(yīng)輕柔，防止將細(xì)胞爬片夾碎,，影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)程,。（2）種細(xì)胞過程中，要注意將細(xì)胞輕柔混勻,，“八”字或者“十”字形搖晃,，防止細(xì)胞局部生長過密。（3）稀釋,、加二抗（熒光抗體）及此后的洗滌過程中注意避光,。（4）細(xì)胞爬片進(jìn)行免疫熒光之后，需要盡快拍照，防止免疫熒光淬滅,?；蛘叻庞诎岛袃?nèi)，暫時(shí)保存于4度冰箱,，盡快拍照,。（5）在進(jìn)行熒光顯微鏡拍照時(shí)，要根據(jù)熒光抗體選擇合適的激發(fā)光源,。PI/DAPI能將凋亡和未凋亡的細(xì)胞都染成紅色/藍(lán)色,，只在凋亡的細(xì)胞核中才有FITC-12-dUTP摻入而定位的綠色熒光。CD14免疫熒光檢查