CCK8,，即Cell Counting Kit-8,，與MTT法的主要區(qū)別如下：一、原理不同1、Cell Counting Kit-8：CCK-8 試劑盒利用了日本同仁化學研究所（Dojindo）開發(fā)的四唑鹽WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽),。2,、MTT法：其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細胞中，而死細胞無此功能,。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲臜,，用酶聯(lián)免疫檢測儀在570nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數(shù)量,。在一定細胞數(shù)范圍內(nèi),，MTT結(jié)晶形成的量與細胞數(shù)成正比。請問合適的種板數(shù)是怎么定義的呢?上海cck8數(shù)值
,、***濃度的確定需要做一個時間梯度,，鋪板和上述相同，只需把各個實驗組改成各個作用時間就可以了,。至于說***濃度的確定,，網(wǎng)上有很多確認方法，個人建議以IC50值作為***濃度即可,。計算方法,，某園子里都有，就不在這里介紹了,。
MTT作用之后,，一定要小心吸走培養(yǎng)液，以免將孔內(nèi)的紫色結(jié)晶吸走,。有條件的實驗室,，這一步可以采用離心機將沉淀充分離心到孔底，防止被吸出,。如果沒有這種類型的離心機,，可以在測量吸光度的時候，將酶聯(lián)免疫的機器震蕩時間調(diào)制5分鐘,，**起碼可以保證沉淀充分溶解。 浙江cck8計算該方法已被***用于一些生物活性因子的活性檢測,、大規(guī)模的抗*****篩選以及藥敏試驗等,。
CCK8檢測原理圖2操作步驟1、在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）,。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)（37℃,5%CO2）,。2、細胞處理（不同實驗處理方式不同）,。3,、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）,。4,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時,。5、用酶標儀測定在450nm處的吸光度,。6,、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化,。
摸條件包括1,、種板數(shù)；2,、種板后細胞的貼壁生長時間,；3、加藥后的孵育時間,；4,、cck8試劑加入量；5,、cck8試劑加入后細胞孵育時間,。看起來很多,，其實這就是一個實驗,。而且都是種的空白板，也就是不加藥物,，只加細胞和CCK8,。我沒有做過MTT實驗，但其實原理及目的都是一樣的（反應機理不一樣）,。都說CCK8簡單點而且數(shù)據(jù)更穩(wěn)定,，所以就用了這個試劑盒。
當然仁者見仁智者見智,，我寫的只是個人實驗心得,，但供參考。歡迎大家拍磚共同進步,。實驗是簡單的,，道路是曲折的，時間就是用來浪費的,，科研就是自娛自樂使勁折騰,。
cck8試劑盒原理是什么a?
細胞增殖實驗就是對細胞生長的測定，常用的方法有MTT、CCK8以及流式檢測,。閱讀大量文獻發(fā)現(xiàn),，如果想證明一個***或者說是一個作用條件對細胞生長的影響，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標準來證明作用效果,。所以,，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實驗操作和注意事項。MTT實驗操作1,、在96孔板中培養(yǎng)細胞,，設置對照組（細胞+無血清培養(yǎng)基）、實驗組和空白組（無血清培養(yǎng)基）,，可以采用如下圖的排版方式：2,、在對照組和實驗組中，向每孔加入10 μL CCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡,，它們會影響OD值的讀數(shù)）,。上海cck8 安全性
CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8，也就是進行細胞計數(shù)的一個盒子,。上海cck8數(shù)值
CCK8的優(yōu)點：方法方便,，不用洗滌細胞，不需要放射性同位素和有機溶劑,；CCK-8快速檢測,；CCK-8檢測靈敏度高，細胞密度低也可以檢測,；CCK-8的重復性優(yōu)于MTT法,；CCK-8對細胞的毒性很小,；CCK-8細胞活性檢測試劑中是1瓶溶液,，不需要現(xiàn)用現(xiàn)配，即開即用,。CCK8的缺點：相比于與MTT法,，CCK8的價格比較昂貴生成的甲瓚物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析,。用途：***篩選,、細胞增殖測定、細胞毒性測定,、**藥敏試驗。上海cck8數(shù)值