CCK8檢測細(xì)胞增殖/毒性的注意事項：1.加入CCK8溶液時不要在孔中生成氣泡,，它們會影響OD值的讀數(shù),；2.要設(shè)計空白對照組；3.對于大多數(shù)情況,，加入CCK8溶液后,，孵育2h左右就可以了；4.使用酶標(biāo)儀之前要提前開啟10min預(yù)熱；5.若連續(xù)多天檢測，必須保持所有條件一致,。相關(guān)鏈接：CCK8的特性、保存方法以及與BrdU的區(qū)別CCK8空白對照,，測定參比波長的設(shè)定以及OD值的合適范圍CCK8標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢測時間,、終止反應(yīng)以及減少加樣誤差的方法外界因素(金屬/***/細(xì)菌/培養(yǎng)基/培養(yǎng)板)對CCK8測定的影響細(xì)胞因素(預(yù)培養(yǎng)/生長方式/狀態(tài)/細(xì)胞數(shù)/死細(xì)胞)對CCK8測定的影響細(xì)胞增殖到底用MTT還是CCK8呢?cck8結(jié)果處理**終結(jié)果.上海cck8吸光度

二,、優(yōu)點(diǎn)：·使用方便，省去了洗滌細(xì)胞,，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑,；·CCK-8法能快速檢測；·CCK-8法的檢測靈敏度很高,，甚至可以測定較低細(xì)胞密度,；·CCK-8法的重復(fù)性優(yōu)于MTT法，MTT實(shí)驗(yàn)生成的formazan不是水溶性的,，需要使用DMSO等有機(jī)溶劑溶解,；而本方法產(chǎn)生的formazan是水溶性的，不但省去了溶解步驟,，更因此而減少了該操作步驟帶來的誤差,；·CCK-8法對細(xì)胞毒性小，可以多次測定選取比較好測定時間,，與MTT方法相比線性范圍更寬,，靈敏度更高；·CCK-8細(xì)胞活性檢測試劑中為1瓶溶液,，毋需預(yù)制,，即開即用。江蘇cck8結(jié)果用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度,。

,。一般情況下，**外一圈的孔只加培養(yǎng)基,，不作為測定孔用,。在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間,，測定450 nm的吸光度即為空白對照,。在做加藥實(shí)驗(yàn)時，還應(yīng)考慮***的吸收,，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8,，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度作為空白對照。金屬對CCK-8顯色有影響：當(dāng)終濃度為1mM的氯化亞鉛,、氯化鐵,、硫酸銅會***5%、15%,、90%的顯色反應(yīng),，使靈敏度降級。如果終濃度是10 mM的話,，將會*****,。懸浮細(xì)胞由于染色比較困難，一般需要增加細(xì)胞數(shù)量和延長培養(yǎng)時間,。

細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對細(xì)胞生長的測定,，常用的方法有MTT、CCK8以及流式檢測,。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn),，如果想證明一個***或者說是一個作用條件對細(xì)胞生長的影響，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來證明作用效果,。所以,，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項。MTT實(shí)驗(yàn)操作1,、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,，設(shè)置對照組（細(xì)胞+無血清培養(yǎng)基）、實(shí)驗(yàn)組和空白組（無血清培養(yǎng)基）,，可以采用如下圖的排版方式：2,、在對照組和實(shí)驗(yàn)組中，每孔加入細(xì)胞懸液100ul在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）,。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5% CO2）.

CCK-8的原理

所以粗略的可以認(rèn)為生成的甲瓚物的顏色的深淺與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,。為什么是粗略的呢，因?yàn)檫@里沒有考慮到細(xì)胞代謝水平的高低,，有些細(xì)胞在***處理后,，可能活細(xì)胞數(shù)不變，但是代謝率低了以后,，細(xì)胞呼吸減弱,，NAD+產(chǎn)生減少，測出的Formazan也會減少,，所以此時怎么算呢（此時我就比較懷戀中性紅了）,？當(dāng)然也有解決的辦法，下期給大家介紹,。因此可利用這個原理進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析,，在吸光度為450時檢測讀數(shù),。顏色也會越深 用酶聯(lián)免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值.上海cck8 顏色深淺

CCK8試驗(yàn)的總體實(shí)驗(yàn)心得.上海cck8吸光度

實(shí)驗(yàn)材料及試劑

96 孔板、CO2培養(yǎng)箱,、酒精燈,、移液***、酶標(biāo)儀等,；細(xì)胞,、CCK8等。

實(shí)驗(yàn)內(nèi)容取生長狀態(tài)良好的對數(shù)生長期細(xì)胞,，每孔按 4×103個接種至 96 孔板中,，每組設(shè)置8個復(fù)孔，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，待細(xì)胞貼壁后轉(zhuǎn)染相應(yīng)質(zhì)粒后,。繼續(xù)培養(yǎng) 48h 后,，棄含藥培養(yǎng)基,，每孔加入新鮮配制的含 10ｕL的毒性檢測液CCK8，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng) 4h 后,，用酶標(biāo)儀測波長為450 nm的OD值,。實(shí)驗(yàn)重復(fù) 3 次， 取實(shí)驗(yàn)結(jié)果的平均值作為**終實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。按公式計算生長***率＝[(對照組 OD－實(shí)驗(yàn)組 OD)/對照組 OD]  ×**,，以分組為橫坐標(biāo)，生長***率為縱坐標(biāo),，繪制細(xì)胞生長***率柱狀圖,。 上海cck8吸光度