cck8試劑加入后孵育時(shí)間,，隨著時(shí)間的增加,，OD值就會(huì)增大?？傊瓌t就是把OD值控制在1.0左右,。這里我考察了0.5h,、1.0h、2.0h,。

再說(shuō)一下關(guān)于種板設(shè)置問(wèn)題,。眾所周知周圍一圈孔因?yàn)檫吘壭?yīng)都是不用來(lái)做實(shí)驗(yàn)的。一般每組樣品我會(huì)設(shè)置6個(gè)復(fù)孔,，得到的OD值去掉**大值與**小值,，其余取平均值。我用的是排***,，會(huì)省很多力氣,，但是也會(huì)增大組內(nèi)誤差。這個(gè)只有通過(guò)校正移液***和選用**適***頭了,。

能力有限,，表達(dá)不清的大家湊合著看看吧。有疑問(wèn)的歡迎大家留言討論,，我們的目標(biāo)是共同進(jìn)步,，哈哈。 主要是重復(fù)性優(yōu)于MTT,；江蘇cck8統(tǒng)計(jì)分析

沒(méi)有做過(guò)MTT實(shí)驗(yàn),，但其實(shí)原理及目的都是一樣的（反應(yīng)機(jī)理不一樣）。都說(shuō)CCK8簡(jiǎn)單點(diǎn)而且數(shù)據(jù)更穩(wěn)定,，所以就用了這個(gè)試劑盒,。CCK8的說(shuō)明書(shū)大家一定要認(rèn)真閱讀，里面很多細(xì)節(jié)的問(wèn)題都有提到,。而且說(shuō)明書(shū)里提供的一些關(guān)于各種細(xì)胞的種板數(shù)都很有參考價(jià)值,，因?yàn)槟鞘欠磸?fù)驗(yàn)證過(guò)的比較好數(shù)值。但無(wú)論如何,，做這個(gè)試驗(yàn)一定要摸條件,。你就算再懶，這個(gè)懶不得,，否則你都只是在做無(wú)用功,。以下言論全部以細(xì)胞毒性試驗(yàn)為前提，如果你做的是促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的***的藥效實(shí)驗(yàn)?zāi)蔷土懋?dāng)別論了,。天津cck8增殖曲線接種時(shí)注意細(xì)胞懸液一定要混勻,，以避免細(xì)胞沉淀下來(lái)，導(dǎo)致每孔中的細(xì)胞數(shù)量不一致,。

制作標(biāo)準(zhǔn)曲線1.先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量,，然后接種細(xì)胞。2.按比例(例如：1/2比例)依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度,，一般要做3-5個(gè)細(xì)胞濃度梯度,，每組3-6個(gè)復(fù)孔。3.接種后培養(yǎng)2-4小時(shí)使細(xì)胞貼壁,，然后加CCK-8試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測(cè)定O.D值,，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)(X軸),，O.D值為縱坐標(biāo)(Y軸)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測(cè)定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量(使用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提條件是實(shí)驗(yàn)的條件要一致,，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時(shí)間),。

四、方法及步驟：實(shí)驗(yàn)一：細(xì)胞增殖分析1,、制備細(xì)胞懸液：細(xì)胞計(jì)數(shù),。2、接種到96孔板中：根據(jù)合適的鋪板細(xì)胞數(shù)（約1-2×104）,，每孔約100ul細(xì)胞懸液,，同樣的樣本可做4-6個(gè)重復(fù)。3,、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)：細(xì)胞接種后貼壁大約需要培養(yǎng)4小時(shí),，如果不需要貼壁，這步可以省去,。4,、加入10ulCCK8：由于每孔加入CCK8量比較少，有可能因試劑沾在孔壁上而帶來(lái)誤差,，建議將***頭浸入培養(yǎng)液中加入且在加完試劑后輕輕敲擊培養(yǎng)板以幫助混勻,。或者直接配置含10%CCK8的培養(yǎng)基（現(xiàn)用現(xiàn)配）,，以換液的形式加入,。培養(yǎng)板周圍一圈孔培養(yǎng)液容易揮發(fā)，為減少誤差,，建議培養(yǎng)板周圍的四邊每孔只加培養(yǎng)基,。

CCK8，即Cell Counting Kit-8,，與MTT法的主要區(qū)別如下：一,、原理不同1、Cell Counting Kit-8：CCK-8 試劑盒利用了日本同仁化學(xué)研究所（Dojindo）開(kāi)發(fā)的四唑鹽WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽),。2,、MTT法：其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能,。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲臜,，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在570nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量,。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。酚紅和血清對(duì)CCK法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾,；北京cck8檢測(cè)計(jì)算

CCK8雖好,這些情況下不建議用!江蘇cck8統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)驗(yàn)原理：CellCountingKit-8（簡(jiǎn)稱CCK-8）試劑可用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析,。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】,，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析,。江蘇cck8統(tǒng)計(jì)分析