細(xì)胞增殖-毒性檢測1.在96孔板中配制100ml的細(xì)胞懸液,。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(在37℃,，5%CO2的條件下)。2.向培養(yǎng)板加入10ml不同濃度的待測物質(zhì),。3.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間(例如:6,12,24或48小時),。4.向每孔加入10mlCCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響O.D值的讀數(shù)),。5.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時,。6.用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。7.如果暫時不測定O.D值,，打算以后測定的話,，可以向每孔中加入10ml0.1MHCl溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。在24小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化,。注意：如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基,，去掉***的影響,。當(dāng)然***影響比較小的情況可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可,。CCK8試驗的總體實驗心得.北京cck8試驗

CKK-8原理

CellCountingKit，CCK-8試劑含有WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）,，是近年新開發(fā)的一種更新的水溶性四唑鹽檢測,，原理與WST-1類似：在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原成具有高度水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan）。生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,，用酶聯(lián)免疫分析儀測定其光吸收值可間接反映活細(xì)胞數(shù)量,，在一定細(xì)胞數(shù)量范圍內(nèi)甲臜形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。

上海cck8實驗?zāi)康拇x率低了以后,，細(xì)胞呼吸減弱,，NAD+產(chǎn)生減少，測出的Formazan也會減少,。

酚紅和血清對CCK法的檢測不會造成干擾,；◆細(xì)胞毒性非常低，因此加入WST-8顯色后,，可以在不同時間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀數(shù)從而找到比較好測定時間,。實驗二：細(xì)胞增殖-毒性檢測1、在96孔板中配置100μL的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時（37℃,，5%CO2）,。2、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測物質(zhì),。3,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間（例如：6、12,、24或48小時）,。4、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要再孔中生成氣泡,，它們會影響OD值的讀數(shù)）,。5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時,。6,、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。

7,、若暫時不測定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時內(nèi)測定,，吸光度不會發(fā)生變化。注意：如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話,，可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基,，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基）,，去掉***影響,。當(dāng)然***影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基,，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可,。活力計算：保存條件：4℃避光保存一年有效,，-20℃避光保存兩年有效,。科研狗**值錢的就是時間,不能再被CCK8“拖累”了.

讀數(shù)前可在搖床上溫柔混勻,，酶標(biāo)儀在 450nm 波長處檢測每孔的吸光度,。

***率（％）= [（對照孔吸光度-實驗孔吸光度）/（對照孔吸光度-空白孔吸光度）]×100=IC50

注意事項

CCK8法檢測細(xì)胞生長情況基于的原理是脫氫酶催化的反應(yīng)，如果實驗處理條件中存在還原劑的影響,，應(yīng)事先去除,。如果實驗條件中存在還原物質(zhì),，需單獨測定還原物質(zhì)的空白吸光度。如果還原物質(zhì)的吸光度很小,，可以忽略不計,；但如果吸光度很大，則需要去除培養(yǎng)基,，再用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞3次,，然后再加入新的 100ul培養(yǎng)基和10ul CCK-8 溶液進行檢測。 cck8試劑盒價格是多少?北京cck8試驗

CCK8的實驗步驟,、實驗分組及檢測方法.北京cck8試驗

實驗材料及試劑

96 孔板,、CO2培養(yǎng)箱、酒精燈,、移液***,、酶標(biāo)儀等；細(xì)胞,、CCK8等,。

實驗內(nèi)容取生長狀態(tài)良好的對數(shù)生長期細(xì)胞，每孔按 4×103個接種至 96 孔板中,，每組設(shè)置8個復(fù)孔,，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁后轉(zhuǎn)染相應(yīng)質(zhì)粒后,。繼續(xù)培養(yǎng) 48h 后,，棄含藥培養(yǎng)基，每孔加入新鮮配制的含 10ｕL的毒性檢測液CCK8,，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng) 4h 后,，用酶標(biāo)儀測波長為450 nm的OD值。實驗重復(fù) 3 次,， 取實驗結(jié)果的平均值作為**終實驗結(jié)果,。按公式計算生長***率＝[(對照組 OD－實驗組 OD)/對照組 OD]  ×**，以分組為橫坐標(biāo),，生長***率為縱坐標(biāo)，繪制細(xì)胞生長***率柱狀圖,。 北京cck8試驗