經(jīng)驗總結(jié)及分享： 

CCK8的說明書大家一定要認真閱讀,，里面很多細節(jié)的問題都有提到。而且說明書里提供的一些關(guān)于各種細胞的種板數(shù)都很有參考價值,，因為那是反復驗證過的比較好數(shù)值,。但無論如何,，做這個試驗一定要摸條件。你就算再懶,，這個懶不得,，否則你都只是在做無用功。以下言論全部以細胞毒性試驗為前提,， 如果你做的是促進細胞生長的***的藥效實驗那就另當別論了,。

摸條件包括1、種板數(shù),；2,、種板后細胞的貼壁生長時間,；3、加藥后的孵育時間,；4,、cck8試劑加入量；5,、cck8試劑加入后細胞孵育時間,。看起來很多,，其實這就是一個實驗,。而且都是種的空白板，也就是不加***,，只加細胞和CCK8,。 在電子耦合試劑（也就是細胞是活的，有呼吸,，有能量代謝）.浙江cck8測細胞生長曲線

酚紅和血清對CCK8法的檢測不會造成干擾,，可以通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去。

· CCK8可以檢測大腸桿菌,，但不能檢測酵母細胞,。在細胞增殖實驗每次測定的過程中需要避免細菌污染，以免影響結(jié)果,。

· CCK-8在0-5℃下能夠保存至少6個月,，在-20℃下避光可以保存1年。

· 當在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時,，培養(yǎng)板**外一圈的孔**容易干燥揮發(fā),，由于體積不準確而增加誤差。一般情況下,，**外一圈的孔加培養(yǎng)基或者PBS,，不作為測定孔用。

· 在培養(yǎng)基中加入CCK8,，培養(yǎng)一定的時間,，測定450 nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗時,，還應考慮***的吸收,，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間,，測定450 nm的吸光度作為空白對照,。 江蘇cck8細胞增殖實驗原理無需放射性同位素和有機溶劑，對細胞毒性低.

細胞增殖實驗就是對細胞生長的測定,，常用的方法有MTT,、CCK8以及流式檢測。閱讀大量文獻發(fā)現(xiàn),，如果想證明一個***或者說是一個作用條件對細胞生長的影響,，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標準來證明作用效果。所以,，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實驗操作和注意事項,。MTT實驗操作1、在96孔板中培養(yǎng)細胞,，設(shè)置對照組（細胞+無血清培養(yǎng)基）,、實驗組和空白組（無血清培養(yǎng)基），可以采用如下圖的排版方式：2,、在對照組和實驗組中,，

CCK-8沒有具體規(guī)定反應時間的長短，以具體反映比較好顯色的時間為主,。因為不同的細胞反應時間,、顯色標準都不一樣，所以一定要設(shè)置預實驗,。預實驗中,，可以先做幾個孔摸索一下接種數(shù)量和培養(yǎng)時間。3,、懸浮細胞比貼壁細胞難顯色,。在加入CCK-8培養(yǎng)后，可每隔一小時觀測一下顏色的變化情況,，或者之間用酶標儀檢測更為準確,。4、CCK8作用時間越長,，OD值就越大,，所以對于作用時間也不是越長久越好，要把OD值控制在1左右,。5,、CCK8要求檢測孔內(nèi)不能有氣泡。與MTT相比,，CCK-8和XTT的價格比較貴,。

CCK-8的原理

所以粗略的可以認為生成的甲瓚物的顏色的深淺與活細胞的數(shù)量成正比。為什么是粗略的呢,，因為這里沒有考慮到細胞代謝水平的高低,，有些細胞在***處理后，可能活細胞數(shù)不變,，但是代謝率低了以后,，細胞呼吸減弱,，NAD+產(chǎn)生減少，測出的Formazan也會減少,，所以此時怎么算呢（此時我就比較懷戀中性紅了）,？當然也有解決的辦法，下期給大家介紹,。因此可利用這個原理進行細胞增殖和毒性分析,，在吸光度為450時檢測讀數(shù)。用途及常用的公 cck8試劑盒原理是什么a?江蘇cck8細胞增殖實驗原理

細胞毒性測定：這個可以和各個處理因素對細胞活性和增殖的影響,，比如低氧或者什么化學物品對細胞的影響上,。浙江cck8測細胞生長曲線

細胞增殖-毒性檢測1.在96孔板中配制100ml的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預培養(yǎng)24小時(在37℃,，5%CO2的條件下),。2.向培養(yǎng)板加入10ml不同濃度的待測物質(zhì)。3.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當?shù)臅r間(例如:6,12,24或48小時),。4.向每孔加入10mlCCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,，它們會影響O.D值的讀數(shù))。5.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時,。6.用酶標儀測定在450nm處的吸光度,。7.如果暫時不測定O.D值，打算以后測定的話,，可以向每孔中加入10ml0.1MHCl溶液或者1%w/vSDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化,。注意：如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話,，可在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基，去掉***的影響,。當然***影響比較小的情況可以不更換培養(yǎng)基,，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可。浙江cck8測細胞生長曲線