CCK8原理,、優(yōu)勢(shì)和步驟 檢測(cè)原理：

◆ Cell Counting Kit簡(jiǎn)稱CCK試劑盒，是一種基于WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒,。

◆ WST-8屬于MTT的升級(jí)產(chǎn)品，工作原理為：在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan）,。顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比,，與細(xì)胞毒性成反比,。使用酶標(biāo)儀在450mM波長(zhǎng)處測(cè)定OD值,，間接反映活細(xì)胞數(shù)量,。 CCK-8試劑中含有WST–8.江蘇cck8增殖數(shù)據(jù)分析

培養(yǎng)板對(duì)CCK8測(cè)定的影響：不同公司的培養(yǎng)板，以及培養(yǎng)板是否經(jīng)過處理對(duì)讀數(shù)都有一定的影響,。所以前后實(shí)驗(yàn)要一致,。另外在培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)板**外一圈的孔容易干燥揮發(fā),，從而能導(dǎo)致培養(yǎng)基的體積不一樣，增加誤差,。如果有可能,，**外一圈的孔只加高壓滅菌的PBS或ddH2O,。另外，注意CCK-8不要貼在板壁上,。一定要注意是否是***有問題,。解決的方案就是可以在測(cè)定CCK-8的讀數(shù)前，換個(gè)細(xì)胞液,，再測(cè)定,。這樣會(huì)有一定的影響，但是影響的是所有的,，所以均一性還算比較好,。上海cck8軟件CCK8試驗(yàn)的總體實(shí)驗(yàn)心得.

經(jīng)驗(yàn)總結(jié)及分享： 

CCK8的說明書大家一定要認(rèn)真閱讀，里面很多細(xì)節(jié)的問題都有提到,。而且說明書里提供的一些關(guān)于各種細(xì)胞的種板數(shù)都很有參考價(jià)值,，因?yàn)槟鞘欠磸?fù)驗(yàn)證過的比較好數(shù)值。但無論如何,，做這個(gè)試驗(yàn)一定要摸條件,。你就算再懶，這個(gè)懶不得,，否則你都只是在做無用功,。以下言論全部以細(xì)胞毒性試驗(yàn)為前提， 如果你做的是促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的***的藥效實(shí)驗(yàn)?zāi)蔷土懋?dāng)別論了,。

摸條件包括1,、種板數(shù)；2,、種板后細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng)時(shí)間,；3、加藥后的孵育時(shí)間,；4,、cck8試劑加入量；5,、cck8試劑加入后細(xì)胞孵育時(shí)間,。看起來很多,，其實(shí)這就是一個(gè)實(shí)驗(yàn),。而且都是種的空白板，也就是不加***,，只加細(xì)胞和CCK8,。

貼壁生長(zhǎng)的時(shí)間我一般就直接讓它貼壁長(zhǎng)24h了，這個(gè)時(shí)間細(xì)胞已經(jīng)貼壁完全,，而且這樣設(shè)置時(shí)間對(duì)自己安排實(shí)驗(yàn)時(shí)間也方便,。沒人愿意大半夜爬起來做實(shí)驗(yàn)吧,。3、加藥后的孵育時(shí)間,，我的實(shí)驗(yàn)摸了3個(gè)時(shí)間,，24h，48h,，72h,。然后根據(jù)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性（RSD）、OD值的范圍（1.0左右）這些來選擇比較好的時(shí)間,。太長(zhǎng)了就沒有必要了,，細(xì)胞呆在孔里幾天不換液結(jié)果可想而知了。4,、CCK8試劑加入量,，說明書中明確寫出建議加入量為培養(yǎng)基體積的10%。這里有一個(gè)問題：假設(shè)我要孔內(nèi)是200微升的體系,，即細(xì)胞懸液+藥液+CCK8=200微升呢,，還是細(xì)胞懸液+藥液=200微升，cck8不算在體系內(nèi)呢,。關(guān)于這一點(diǎn)文獻(xiàn)報(bào)道不一致,。本人**終采用的是后者。5,、cck8試劑加入后孵育時(shí)間,，隨著時(shí)間的增加，OD值就會(huì)增大,?？傊瓌t就是把OD值控制在1.0左右。這里我考察了0.5h,、1.0h,、2.0h。若細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng),，培養(yǎng)基顏色或 pH 發(fā)生變化,，建議更換培養(yǎng)基后再加 CCK-8.

cck8試劑加入后孵育時(shí)間，隨著時(shí)間的增加,，OD值就會(huì)增大,。總之原則就是把OD值控制在1.0左右,。這里我考察了0.5h,、1.0h、2.0h。再說一下關(guān)于種板設(shè)置問題,。眾所周知周圍一圈孔因?yàn)檫吘壭?yīng)都是不用來做實(shí)驗(yàn)的,。一般每組樣品我會(huì)設(shè)置6個(gè)復(fù)孔，得到的OD值去掉**大值與**小值,，其余取平均值。我用的是排***,，會(huì)省很多力氣,，但是也會(huì)增大組內(nèi)誤差。這個(gè)只有通過校正移液***和選用**適***頭了,。能力有限,，表達(dá)不清的大家湊合著看看吧。有疑問的歡迎大家留言討論,，我們的目標(biāo)是共同進(jìn)步酚紅和血清對(duì)CCK法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾,；北京cck8中國(guó)

MTT與CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)和注意事項(xiàng).江蘇cck8增殖數(shù)據(jù)分析

特點(diǎn)不同1、CellCountingKit-8：靈敏度高,，數(shù)據(jù)可靠,，重現(xiàn)性好；操作簡(jiǎn)便,，省時(shí)省力,；水溶性，不需要換液,，尤其適合于懸浮細(xì)胞,；無需放射性同位素和有機(jī)溶劑，對(duì)細(xì)胞毒性低,；適合于高通量***篩選,。2、MTT法：特點(diǎn)是靈敏度高,、經(jīng)濟(jì),。三、應(yīng)用不同1,、CellCountingKit-8：主要用途為***篩選,、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定,、**藥敏試驗(yàn),。2、MTT法：***用于一些生物活性因子的活性檢測(cè),、大規(guī)模的抗*****篩選,、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及**放射敏感性測(cè)定等。江蘇cck8增殖數(shù)據(jù)分析