貼壁生長的時(shí)間我一般就直接讓它貼壁長24h了，這個(gè)時(shí)間細(xì)胞已經(jīng)貼壁完全,，而且這樣設(shè)置時(shí)間對(duì)自己安排實(shí)驗(yàn)時(shí)間也方便,。沒人愿意大半夜爬起來做實(shí)驗(yàn)吧。3,、加藥后的孵育時(shí)間,，我的實(shí)驗(yàn)摸了3個(gè)時(shí)間，24h,，48h,，72h。然后根據(jù)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性（RSD）,、OD值的范圍（1.0左右）這些來選擇比較好的時(shí)間,。太長了就沒有必要了，細(xì)胞呆在孔里幾天不換液結(jié)果可想而知了,。4,、CCK8試劑加入量，說明書中明確寫出建議加入量為培養(yǎng)基體積的10%,。這里有一個(gè)問題：假設(shè)我要孔內(nèi)是200微升的體系,，即細(xì)胞懸液+藥液+CCK8=200微升呢，還是細(xì)胞懸液+藥液=200微升,，cck8不算在體系內(nèi)呢,。關(guān)于這一點(diǎn)文獻(xiàn)報(bào)道不一致。本人**終采用的是后者,。5,、cck8試劑加入后孵育時(shí)間，隨著時(shí)間的增加，OD值就會(huì)增大,?？傊瓌t就是把OD值控制在1.0左右。這里我考察了0.5h,、1.0h,、2.0h。培養(yǎng)板周圍一圈孔培養(yǎng)液容易揮發(fā),，為減少誤差,，建議培養(yǎng)板周圍的四邊每孔只加培養(yǎng)基。江蘇cck8測(cè)細(xì)胞活性的方法

在做每個(gè)東西之前,，都要搞清楚這個(gè)東西是什么,。CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8，也就是進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)的一個(gè)盒子,。那它的用途也就大致可以猜到,，和細(xì)胞增殖相關(guān)的實(shí)驗(yàn)都可以。CCK-8的原理在CCK-8試劑盒中,，**主要的化學(xué)藥品是WST-8,，化學(xué)名為2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽。它的**基團(tuán)和MTT是一樣的,，是MTT的升級(jí)版本,。在電子耦合試劑（也就是細(xì)胞是活的，有呼吸,，有能量代謝）存在的情況下,，可被NAD+氧化還原成為水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物(Formazan)?；罴?xì)胞越多,，產(chǎn)生的Formazan就越多，顏色也會(huì)越深（如圖1,，來自于Sigma）,。湖北cck8 od值范圍在電子耦合試劑（也就是細(xì)胞是活的，有呼吸,，有能量代謝）.

摸條件包括1,、種板數(shù)；2,、種板后細(xì)胞的貼壁生長時(shí)間,；3、加藥后的孵育時(shí)間,；4,、cck8試劑加入量；5、cck8試劑加入后細(xì)胞孵育時(shí)間,?？雌饋砗芏啵鋵?shí)這就是一個(gè)實(shí)驗(yàn),。而且都是種的空白板,，也就是不加藥物，只加細(xì)胞和CCK8,。我沒有做過MTT實(shí)驗(yàn)，但其實(shí)原理及目的都是一樣的（反應(yīng)機(jī)理不一樣）,。都說CCK8簡(jiǎn)單點(diǎn)而且數(shù)據(jù)更穩(wěn)定,，所以就用了這個(gè)試劑盒。

當(dāng)然仁者見仁智者見智,，我寫的只是個(gè)人實(shí)驗(yàn)心得,，但供參考。歡迎大家拍磚共同進(jìn)步,。實(shí)驗(yàn)是簡(jiǎn)單的,，道路是曲折的，時(shí)間就是用來浪費(fèi)的,，科研就是自娛自樂使勁折騰,。

酚紅和血清對(duì)CCK8法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾，可以通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去,。

· CCK8可以檢測(cè)大腸桿菌,，但不能檢測(cè)酵母細(xì)胞。在細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每次測(cè)定的過程中需要避免細(xì)菌污染,，以免影響結(jié)果,。

· CCK-8在0-5℃下能夠保存至少6個(gè)月，在-20℃下避光可以保存1年,。

· 當(dāng)在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時(shí),，培養(yǎng)板**外一圈的孔**容易干燥揮發(fā)，由于體積不準(zhǔn)確而增加誤差,。一般情況下,，**外一圈的孔加培養(yǎng)基或者PBS，不作為測(cè)定孔用,。

· 在培養(yǎng)基中加入CCK8,，培養(yǎng)一定的時(shí)間，測(cè)定450 nm的吸光度即為空白對(duì)照,。在做加藥實(shí)驗(yàn)時(shí),，還應(yīng)考慮***的吸收，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時(shí)間,，測(cè)定450 nm的吸光度作為空白對(duì)照,。 胞毒性非常低，因此加入WST-8顯色后,，可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀數(shù)從而找到比較好測(cè)定時(shí)間,。

CCK-8的用途1.細(xì)胞增殖測(cè)定：細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)在很多領(lǐng)域都會(huì)用到，比如**相關(guān),、損傷后修復(fù)等,。

2.***篩選：在測(cè)定一個(gè)***的毒性和安全有效濃度時(shí)，經(jīng)常會(huì)用到CCK-8,。

3.細(xì)胞毒性測(cè)定：這個(gè)可以和各個(gè)處理因素對(duì)細(xì)胞活性和增殖的影響,，比如在UV、低氧或者什么化學(xué)物品對(duì)細(xì)胞的影響上,。

4.**藥敏試驗(yàn)：這個(gè)是用的比較廣的,，我見過做**的團(tuán)隊(duì)，買CCK-8都是一整箱,，一整箱的買,，比如果子老師所在的團(tuán)隊(duì)，哈哈哈,。

5.微生物對(duì)細(xì)胞的毒性或增殖的實(shí)驗(yàn),。 那它的用途也就大致可以猜到，和細(xì)胞增殖,、細(xì)胞毒性相關(guān)的實(shí)驗(yàn)都可以,。湖北cck8 od值范圍

接種時(shí)注意細(xì)胞懸液一定要混勻，以避免細(xì)胞沉淀下來,，導(dǎo)致每孔中的細(xì)胞數(shù)量不一致,。江蘇cck8測(cè)細(xì)胞活性的方法

細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對(duì)細(xì)胞生長的測(cè)定，常用的方法有MTT,、CCK8以及流式檢測(cè),。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個(gè)***或者說是一個(gè)作用條件對(duì)細(xì)胞生長的影響,，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來證明作用效果,。所以，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項(xiàng),。MTT實(shí)驗(yàn)操作1,、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，設(shè)置對(duì)照組（細(xì)胞+無血清培養(yǎng)基）,、實(shí)驗(yàn)組和空白組（無血清培養(yǎng)基）,，可以采用如下圖的排版方式：2,、在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中，江蘇cck8測(cè)細(xì)胞活性的方法