CCK8檢測細(xì)胞增殖/毒性的方法：

1.將處于對數(shù)生長期的各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞胰酶消化后，完全培養(yǎng)基重懸成細(xì)胞懸液，并計(jì)數(shù)。

2.根據(jù)細(xì)胞生長快慢決定鋪板細(xì)胞密度（多數(shù)為1000-2000 cell/well）,，每組3-5重復(fù),，每孔100-200μl培養(yǎng)基,。根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)決定鋪板數(shù)量（如需要檢測5天，則鋪5張96孔板）,，我們以1000 cell/well,，5復(fù)孔，200μl培養(yǎng)基,，檢測5天為例,，各實(shí)驗(yàn)組需要細(xì)胞數(shù)量為1000×5×5個細(xì)胞，從計(jì)數(shù)好的細(xì)胞懸液中取出所需的細(xì)胞量和完全培養(yǎng)基混勻,，**終體積為200×5×5μl,。 CCK-8試劑中含有WST–8.湖北cck8檢測毒性統(tǒng)計(jì)學(xué)處理軟件

在做每個東西之前，都要搞清楚這個東西是什么,。CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8,，也就是進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)的一個盒子。那它的用途也就大致可以猜到,，和細(xì)胞增殖相關(guān)的實(shí)驗(yàn)都可以。CCK-8的原理在CCK-8試劑盒中,，**主要的化學(xué)藥品是WST-8,，化學(xué)名為2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽。它的**基團(tuán)和MTT是一樣的,，是MTT的升級版本,。在電子耦合試劑（也就是細(xì)胞是活的，有呼吸,，有能量代謝）存在的情況下,，可被NAD+氧化還原成為水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物(Formazan)?；罴?xì)胞越多,，產(chǎn)生的Formazan就越多，顏色也會越深（如圖1,，來自于Sigma）,。湖北cck8檢測毒性統(tǒng)計(jì)學(xué)處理軟件細(xì)胞增殖檢測——CCK8.

CCK8的優(yōu)點(diǎn)：方法方便，不用洗滌細(xì)胞,，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑,；CCK-8快速檢測；CCK-8檢測靈敏度高,，細(xì)胞密度低也可以檢測,；CCK-8的重復(fù)性優(yōu)于MTT法,；CCK-8對細(xì)胞的毒性很小,；CCK-8細(xì)胞活性檢測試劑中是1瓶溶液,，不需要現(xiàn)用現(xiàn)配，即開即用,。CCK8的缺點(diǎn)：相比于與MTT法,，CCK8的價格比較昂貴生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析,。用途：***篩選,、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定,、**藥敏試驗(yàn),。

細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對細(xì)胞生長的測定，常用的方法有MTT,、CCK8以及流式檢測,。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個***或者說是一個作用條件對細(xì)胞生長的影響,，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來證明作用效果,。所以，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項(xiàng),。MTT實(shí)驗(yàn)操作1,、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，設(shè)置對照組（細(xì)胞+無血清培養(yǎng)基）,、實(shí)驗(yàn)組和空白組（無血清培養(yǎng)基）,，可以采用如下圖的排版方式：2、在對照組和實(shí)驗(yàn)組中,，每孔加入細(xì)胞懸液100ul水溶性,，不需要換液，尤其適合于懸浮細(xì)胞.

CCK法的操作步驟（更多內(nèi)容請見說明書）：實(shí)驗(yàn)一：細(xì)胞活性檢測1,、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）,。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）。2,、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡,，它們會影響OD值的讀數(shù)）。3,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時,。4、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度,。5,、若暫時不測定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時內(nèi)測定,，吸光度不會發(fā)生變化。微生物對細(xì)胞的毒性或增殖的實(shí)驗(yàn),。天津cck8測ic50算法

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cck8試劑加入后孵育時間,，隨著時間的增加，OD值就會增大,?？傊瓌t就是把OD值控制在1.0左右。這里我考察了0.5h,、1.0h,、2.0h。再說一下關(guān)于種板設(shè)置問題,。眾所周知周圍一圈孔因?yàn)檫吘壭?yīng)都是不用來做實(shí)驗(yàn)的,。一般每組樣品我會設(shè)置6個復(fù)孔，得到的OD值去掉**大值與**小值,，其余取平均值,。我用的是排***，會省很多力氣,，但是也會增大組內(nèi)誤差,。這個只有通過校正移液***和選用**適***頭了。能力有限,，表達(dá)不清的大家湊合著看看吧。有疑問的歡迎大家留言討論,，我們的目標(biāo)是共同進(jìn)步湖北cck8檢測毒性統(tǒng)計(jì)學(xué)處理軟件