當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的**小接種量至少為1000 個(gè)/孔(100μl培養(yǎng)基),。檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低，因此推薦接種量不低于2500 個(gè)/孔(100μl培養(yǎng)基)。酚紅和血清對(duì)CCK8法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾,，可以通過(guò)扣除空白孔中本底的吸光度而消去。

注意事項(xiàng)CCK8可以檢測(cè)大腸桿菌,，但不能檢測(cè)酵母細(xì)胞,。在細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每次測(cè)定的過(guò)程中需要避免細(xì)菌污染，以免影響結(jié)果,。CCK-8在0-5℃下能夠保存至少6個(gè)月,，在-20℃下避光可以保存1年。當(dāng)在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時(shí),，培養(yǎng)板**外一圈的孔**容易干燥揮發(fā),，由于體積不準(zhǔn)確而增加誤差,。一般情況下，**外一圈的孔只加培養(yǎng)基,，不作為測(cè)定孔用,。在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時(shí)間,，測(cè)定450 nm的吸光度即為空白對(duì)照,。 細(xì)胞毒性測(cè)定：這個(gè)可以和各個(gè)處理因素對(duì)細(xì)胞活性和增殖的影響，比如低氧或者什么化學(xué)物品對(duì)細(xì)胞的影響上,。天津做cck8

CCK法與其他細(xì)胞增殖/毒性檢測(cè)方法的優(yōu)勢(shì)比較檢測(cè)方法MTT法XTT法WST-1法CCK法甲臜產(chǎn)物的水溶性差（需加有機(jī)溶劑溶解再檢測(cè)）好好好產(chǎn)品性狀粉末2瓶溶液溶液1瓶溶液使用方法配成溶液后使用現(xiàn)配現(xiàn)用即開(kāi)即用即開(kāi)即用檢測(cè)靈敏度高很高很高高檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)較短較短**短檢測(cè)波長(zhǎng)560-600nm420-480nm420-480nm430-490nm細(xì)胞毒性高,，細(xì)胞形態(tài)完全消失很低，細(xì)胞形態(tài)不變很低,，細(xì)胞形態(tài)不變很低,，細(xì)胞形態(tài)不變?cè)噭┓€(wěn)定性一般較差一般很好批量樣品檢測(cè)可以非常適合非常適合非常適合便捷程度一般便捷便捷非常便捷湖北同仁化學(xué)研究所 cck8換液的意思是將cck8加在培養(yǎng)基中以換液的形式加在孔板中避免氣泡產(chǎn)生。

CCK-8盒子的選購(gòu)還記得***次做CCK-8的實(shí)驗(yàn)時(shí)研究生二年級(jí)的時(shí)候,，當(dāng)時(shí)用的***個(gè)盒子是Sigma的,，當(dāng)時(shí)的Sigma-Aldrich就是Sigma-Aldrich，還不是現(xiàn)在的Millipore-Sigma,。那個(gè)盒子給了我莫大的鼓勵(lì),，因?yàn)樵谀侵白龇肿涌寺∫恢倍疾皇呛茼樌?。這個(gè)盒子是我的碩士老板從美國(guó)帶回來(lái)的,，品質(zhì)有保證，***的結(jié)果也是很好的,。后面在做CCK-8的實(shí)驗(yàn)時(shí),，我們?cè)谟羞x擇的情況下都會(huì)買(mǎi)sigma，下圖2是sigma官網(wǎng)的截圖,。其實(shí)也不貴,，只是到貨時(shí)間太慢。

四,、方法及步驟：實(shí)驗(yàn)一：細(xì)胞增殖分析1,、制備細(xì)胞懸液：細(xì)胞計(jì)數(shù)。2,、接種到96孔板中：根據(jù)合適的鋪板細(xì)胞數(shù)（約1-2×104）,，每孔約100ul細(xì)胞懸液，同樣的樣本可做4-6個(gè)重復(fù),。3,、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)：細(xì)胞接種后貼壁大約需要培養(yǎng)4小時(shí)，如果不需要貼壁,，這步可以省去,。4,、加入10ulCCK8：由于每孔加入CCK8量比較少，有可能因試劑沾在孔壁上而帶來(lái)誤差,，建議將***頭浸入培養(yǎng)液中加入且在加完試劑后輕輕敲擊培養(yǎng)板以幫助混勻,。或者直接配置含10%CCK8的培養(yǎng)基（現(xiàn)用現(xiàn)配）,，以換液的形式加入,。向每孔加入10 μL CCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）,。

在培養(yǎng)基中加入CCK8,，培養(yǎng)一定的時(shí)間，測(cè)定450nm的吸光度即為空白對(duì)照,。在做加藥實(shí)驗(yàn)時(shí),，還應(yīng)考慮***的吸收，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8,，培養(yǎng)一定的時(shí)間,，測(cè)定450nm的吸光度作為空白對(duì)照。·金屬對(duì)CCK-8顯色有影響：當(dāng)終濃度為1mM的氯化亞鉛,、氯化鐵,、硫酸銅會(huì)***5%、15%,、90%的顯色反應(yīng),，使靈敏度降級(jí)。如果終濃度是10mM的話(huà),，將會(huì)*****,。·懸浮細(xì)胞由于染色比較困難，一般需要增加細(xì)胞數(shù)量和延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間,。·加入CCK-8時(shí),，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，培養(yǎng)基顏色或pH值已變化,，建議換用新鮮的培養(yǎng)基,。·用酶標(biāo)儀檢測(cè)前需確保每個(gè)孔內(nèi)沒(méi)有氣泡，否則會(huì)干擾測(cè)定,，且要擦拭干凈樣品板了,。化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基).湖北同仁化學(xué)研究所 cck8

代謝率低了以后,，細(xì)胞呼吸減弱,，NAD+產(chǎn)生減少，測(cè)出的Formazan也會(huì)減少。天津做cck8

特點(diǎn)不同1,、CellCountingKit-8：靈敏度高,，數(shù)據(jù)可靠，重現(xiàn)性好,；操作簡(jiǎn)便,，省時(shí)省力；水溶性,，不需要換液,，尤其適合于懸浮細(xì)胞；無(wú)需放射性同位素和有機(jī)溶劑,，對(duì)細(xì)胞毒性低,；適合于高通量***篩選。2,、MTT法：特點(diǎn)是靈敏度高,、經(jīng)濟(jì)。三,、應(yīng)用不同1,、CellCountingKit-8：主要用途為***篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定,、細(xì)胞毒性測(cè)定,、**藥敏試驗(yàn)。2,、MTT法：***用于一些生物活性因子的活性檢測(cè),、大規(guī)模的抗*****篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及**放射敏感性測(cè)定等,。天津做cck8