基于磷酸鈣成分的轉(zhuǎn)染試劑,,其主要作用原理是與DNA通過沉淀反應(yīng)形成磷酸鈣-DNA復(fù)合物,粘附到細胞膜表面,,借助內(nèi)吞作用進入細胞質(zhì),。pH值,鈣離子濃度,,DNA濃度,,沉淀時間,細胞孵育時間乃至各組分加入順序都可能對結(jié)果產(chǎn)生影響,,因此實驗條件摸索和優(yōu)化時間較長,,且重復(fù)性不佳?;谥|(zhì)體的轉(zhuǎn)染試劑包括中性脂質(zhì)體和陽離子脂質(zhì)體兩種,。中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA,借助脂質(zhì)膜將DNA導(dǎo)入細胞膜內(nèi),。目前應(yīng)用比較***的是帶正電的陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑,,DNA并沒有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中,而是帶負電的DNA自動結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上,,形成DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物,,從而吸附到帶負電的細胞膜表面,經(jīng)過內(nèi)吞被導(dǎo)入細胞,。此方法操作簡單,,重復(fù)性好,在體外轉(zhuǎn)染中有很高的效率,,但具有一定的細胞毒性,,可能會干擾細胞的代謝。且活性受血清影響,,需要去除血清,。各種轉(zhuǎn)染試劑成分分析.轉(zhuǎn)染試劑配方
轉(zhuǎn)染是將外源核酸導(dǎo)入真核細胞的過程,是細胞和分子生物學(xué)研究的重要工具,,也是大部分的生物和分子生物領(lǐng)域的科研黨們繞不開的話題,。然而常常聽到的抱怨是"轉(zhuǎn)染效率太低""轉(zhuǎn)染完細胞全漂了""轉(zhuǎn)染后忘記給細胞換液了",,真所謂辛辛苦苦實驗N多回,一夜回到解放前……眾所周知,,影響轉(zhuǎn)染成功的因素非常多,,包括細胞質(zhì)量、核酸質(zhì)量,、微生物污染,、轉(zhuǎn)染試劑等。各種細胞使用的轉(zhuǎn)染條件都可能不同,,現(xiàn)實中也并沒有一種放之四海而皆準的方案,。上海動物轉(zhuǎn)染試劑供應(yīng)商.0試劑及RNAi復(fù)合物非常容易獲得:只需簡單地混合,并進行孵育(30min),、稀釋,、及注射即可。
圖2.采用LipofectamineRNAiMAX轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染A549細胞時,,實現(xiàn)了比較好的基因***效果和比較低的細胞毒性,。試驗采用的LipofectamineRNAiMAX試劑劑量范圍為0.1μL-1.0μL之間,在維持優(yōu)良的細胞活力的同時,,實現(xiàn)了p53基因表達水平的有效敲低.功能多樣簡便的實驗方案,,易于針對***的細胞系進行優(yōu)化Invivofectamine?3.0Reagent突破性的體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑Invivofectamine3.0試劑是一種突破性的體內(nèi)RNAi輸送試劑,可大幅改善實驗性能,,使用微克級的siRNA即可達到高達85%的敲低效果,。
用LipoFectMax?轉(zhuǎn)染Hela細胞,左圖轉(zhuǎn)染GFP cDNA,,右圖共轉(zhuǎn)染GFP CDNA和GFP靶向siRNA,。轉(zhuǎn)染siRNA后可以從右圖明顯看到基因沉默。
4適用于神經(jīng)細胞的轉(zhuǎn)染圖4. 用LipoFectMax? 和LipoFectamine®2000分別對小鼠神經(jīng)元細胞進行轉(zhuǎn)染綠色熒光白蛋白(GFP),,轉(zhuǎn)染24小時后觀察轉(zhuǎn)染效果,,LipoFectMax? 轉(zhuǎn)染效率(左圖)比LipoFectamine®2000(右圖)高5倍。
LipoFectMax? 轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染試劑操作流程
細胞毒性低圖2.LipoFectMax? ,,LipoFectamine®2000及LipoFectamine®3000分別對A549細胞進行轉(zhuǎn)染操作,,通過計算轉(zhuǎn)染后的細胞存活率比較細胞毒性。 mRNA細胞&***轉(zhuǎn)染試劑來助力.
用 LipoD293? 體外 DNA 轉(zhuǎn)染試劑(Ver. II)(上圖)和受歡迎的品牌產(chǎn)品 Invitrogen 公司的 293fectin?(下圖)轉(zhuǎn)染 pEGFP-C1 質(zhì)粒到 HEK293 細胞中,。轉(zhuǎn)染 24 小時后,,細胞的尼康 Eclipse 熒光顯微鏡 DIC 成像圖(左側(cè))和熒光成像圖(右側(cè))。
對懸浮 HEK293F 產(chǎn)生蛋白質(zhì)效率的比較/
30 毫升的 293F 細胞分別使用 LipoD293?試劑,、293fectin,、Xfect 和 Fugene 6 等轉(zhuǎn)染試劑按照生產(chǎn)商的標準轉(zhuǎn)染步驟將 pEGFP-6xHis 質(zhì)粒導(dǎo)入細胞表達,用量為 LipoD293? 試劑,,20 微克,,所有其他三種轉(zhuǎn)染試劑均使用 30 微克質(zhì)粒 DNA,。 連續(xù)細胞系具有無限增殖的潛能,通常要比原代或有限細胞更易處理.上海懸浮細胞轉(zhuǎn)染試劑
將20μL轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入孔中的細胞懸液中,,前后移動培養(yǎng)皿,混合均勻,;轉(zhuǎn)染試劑配方
原代細胞直接分離自組織并在適當條件下增殖,。因此,它們的形態(tài)學(xué)和生理特征和體內(nèi)狀態(tài)更為相似,。但相對于連續(xù)細胞系,,它們通常更難培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染。在經(jīng)過***次傳代培養(yǎng)之后,,原代培養(yǎng)物變成了一種細胞系,。源自于原代培養(yǎng)物的細胞系具有有限的壽命(即它們是有限細胞系),且隨著傳代的進行,,具有比較高的生長能力的細胞逐漸占據(jù)支配地位,,從而造成了細胞群內(nèi)的基因型和表型接近一致的情形。相對來說,,這一類細胞要比原代細胞使用起來更為方便,,尤其是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的克隆傳代。 轉(zhuǎn)染試劑配方
上海儒安生物科技有限公司是一家生產(chǎn)型類企業(yè),,積極探索行業(yè)發(fā)展,,努力實現(xiàn)產(chǎn)品創(chuàng)新。公司是一家有限責任公司企業(yè),,以誠信務(wù)實的創(chuàng)業(yè)精神,、專業(yè)的管理團隊、踏實的職工隊伍,,努力為廣大用戶提供***的產(chǎn)品,。以滿足顧客要求為己任;以顧客永遠滿意為標準,;以保持行業(yè)優(yōu)先為目標,,提供***的細胞轉(zhuǎn)染試劑,ecl發(fā)光液,,cck8細胞增殖,,內(nèi)參抗體。上海儒安生物科技自成立以來,,一直堅持走正規(guī)化,、專業(yè)化路線,得到了廣大客戶及社會各界的普遍認可與大力支持,。