摸條件包括1,、種板數(shù),；2、種板后細胞的貼壁生長時間；3,、加藥后的孵育時間,；4,、cck8試劑加入量,；5、cck8試劑加入后細胞孵育時間,?？雌饋砗芏啵鋵嵾@就是一個實驗,。而且都是種的空白板,，也就是不加藥物，只加細胞和CCK8,。我沒有做過MTT實驗,，但其實原理及目的都是一樣的（反應機理不一樣）,。都說CCK8簡單點而且數(shù)據(jù)更穩(wěn)定,，所以就用了這個試劑盒。

當然仁者見仁智者見智,，我寫的只是個人實驗心得,，但供參考,。歡迎大家拍磚共同進步。實驗是簡單的,，道路是曲折的,，時間就是用來浪費的，科研就是自娛自樂使勁折騰,。

培養(yǎng)板周圍一圈孔培養(yǎng)液容易揮發(fā),，為減少誤差，建議培養(yǎng)板周圍的四邊每孔只加培養(yǎng)基,。浙江cck8 碧云天說明書

在做一些***毒性試驗時,，比如做鐵死亡途徑時，我們加入一個***叫C1,，這個時候就需要提前換液,，其實我們試過，還是會有一些影響,。所以這時我們用中性紅檢測,。我們實驗室，通常會用20%的硫酸銅溶液放到細胞孵箱下層,，預防******,。理應說，硫酸銅分子在水溶液中是硫酸根離子和銅離子,，是不會揮發(fā)的,。但是每次只要是新?lián)Q的硫酸銅溶液再做CCK-8，結果總是不好,，我也不知道是什么原因,。之前在我們實驗室有發(fā)生過這樣的事情，這種有深有淺的才是該有的結果,。我想說的是在有能力選擇范圍內,，盡量選擇好一點的試劑，免得浪費時間,。浙江cck8要無血清CCK8細胞增殖實驗檢測原理.

培養(yǎng)基對CCK8測定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質不同,，（主要是氨基酸的成分及糖含量），會與CCK8發(fā)生反應,，產(chǎn)生實驗誤差,，因此所用培養(yǎng)基要一致，不要更換其他培養(yǎng)基,。比如DMEM空白吸收為0.93,；1640培養(yǎng)基在0.5左右。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下，會增加空白吸收,，但不影響測定,，扣除空白吸收即可，可見空白孔非常重要,，所以每次實驗均要設定空白對照,。另外，血清不影響測定,。有師妹在做一個HIF1a***劑實驗時,，多加了這個***劑的濃度，

CellCountingKit-8（簡稱CCK-8）試劑可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析,。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】,。它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比,。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析,。用酶標儀測定在450nm處的吸光度。

貼壁生長的時間我一般就直接讓它貼壁長24h了,，這個時間細胞已經(jīng)貼壁完全,，而且這樣設置時間對自己安排實驗時間也方便。沒人愿意大半夜爬起來做實驗吧,。3,、加藥后的孵育時間，我的實驗摸了3個時間,，24h,，48h，72h,。然后根據(jù)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性（RSD）,、OD值的范圍（1.0左右）這些來選擇比較好的時間。太長了就沒有必要了,，細胞呆在孔里幾天不換液結果可想而知了,。4、CCK8試劑加入量,，說明書中明確寫出建議加入量為培養(yǎng)基體積的10%,。這里有一個問題：假設我要孔內是200微升的體系，即細胞懸液+藥液+CCK8=200微升呢,，還是細胞懸液+藥液=200微升,，cck8不算在體系內呢。關于這一點文獻報道不一致,。本人**終采用的是后者,。5,、cck8試劑加入后孵育時間，隨著時間的增加,，OD值就會增大?？傊瓌t就是把OD值控制在1.0左右,。這里我考察了0.5h、1.0h,、2.0h,。靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠,，重現(xiàn)性好.北京cck8常溫

這個CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8.浙江cck8 碧云天說明書

氧化還原試劑對CCK8測定的影響：CCK8是一個氧化還原反應實驗,，在整個操作當中，如果有氧化還原試劑都會影響**終的結果,。當有還原性物質存在時會影響CCK8的測定,，增加OD值。在有氧化性物質存在時會***測定反應的發(fā)生,，減少OD值,。在高中化學我們就知道金屬是氧化還原反應中的重要參與者。各個公司都會告訴你：“終濃度為1mM的氯化亞鉛,、氯化鐵,、硫酸銅會***5%、15%,、90%的顯色反應,，使靈敏度降低。如果終濃度是10mM的話,，將會*****,。”我**開始看到這句話時很懵,，因為不知道在操作中怎樣會遇到這種情況,。下面就分享我能想到或者在操作中真實遇到的。浙江cck8 碧云天說明書