CCK8實驗操作CCK8的優(yōu)勢在于對細胞沒有毒性，可以直接加入細胞中長時間孵育,，而不用考慮試劑本身對細胞帶來的影響,。1、向96孔板中每孔加入細胞100ul,，置于培養(yǎng)箱中孵育24小時,，96孔板的排版情況和上述MTT相同，在這里不重復介紹了,。2,、向各孔中加入10ul的CCK-8檢測溶液。如若檢測的細胞增殖或毒性試驗,，需在此之前加入作用***培養(yǎng)適當時間,，例如6h/12h/24h等，然后再加入CCK8檢測液,。3,、培養(yǎng)箱中孵育1～4小時，比較好反應時間以細胞具體顯色程度為準,。對細胞毒性?。?,、為1瓶溶液,，毋需預制，即開即用,。 缺點.浙江cck8英文說明書

統(tǒng)一鋪好后,，待細胞完全沉淀下來后，在顯微鏡下觀察各實驗組的細胞密度,，如果密度不均勻,，則固定一組，微調(diào)其他組細胞的量再次鋪板（如：發(fā)現(xiàn)NC組細胞較多,，降低細胞量再次鋪板）,，放入細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。4.從鋪板后第二天開始，每孔加入10-20μlCCK-8溶液,，如果每孔的培養(yǎng)基為100μl,，則加入10μlCCK-8溶液，如果每孔的培養(yǎng)基為200μl,，則加入20μlCCK-8溶液（注意不要在孔中生成氣泡,，它們會影響OD值的讀數(shù)）。用加了相應量細胞培養(yǎng)液和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照,。浙江dojindo cck8CCK-8 反復凍融會增加背景值,，干擾實驗測定。

CCK法的操作步驟（更多內(nèi)容請見說明書）：實驗一：細胞活性檢測1,、在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）,。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)（37℃,5%CO2）。2,、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡,，它們會影響OD值的讀數(shù)）。3,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時,。4、用酶標儀測定在450nm處的吸光度,。5,、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化,。

制作標準曲線1.先用細胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量,，然后接種細胞。2.按比例(例如：1/2比例)依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,，一般要做3-5個細胞濃度梯度,，每組3-6個復孔。3.接種后培養(yǎng)2-4小時使細胞貼壁,，然后加CCK-8試劑培養(yǎng)一定時間后測定O.D值,，制作出一條以細胞數(shù)量為橫坐標(X軸)，O.D值為縱坐標(Y軸)的標準曲線,。根據(jù)此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數(shù)量(使用此標準曲線的前提條件是實驗的條件要一致,，便于確定細胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時間)。cck8試劑盒價格是多少?

CellCountingKit-8（簡稱CCK-8）試劑可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】,。它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）,。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析,。代謝率低了以后,，細胞呼吸減弱，NAD+產(chǎn)生減少,，測出的Formazan也會減少,。湖北cck8換液

MTT與CCK8比色法的實驗細節(jié)和注意事項.浙江cck8英文說明書

CCK8檢測原理圖2操作步驟1,、在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）,。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)（37℃,5%CO2）。2,、細胞處理（不同實驗處理方式不同）,。3、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡,，它們會影響OD值的讀數(shù)）,。4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時,。5,、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。6,、若暫時不測定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時內(nèi)測定,，吸光度不會發(fā)生變化。浙江cck8英文說明書