L15細(xì)胞培養(yǎng)基L-15培養(yǎng)液適用于快速增殖瘤細(xì)胞的培養(yǎng),,用于在CO2缺乏的情況下培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞株,。此培養(yǎng)液采用磷酸鹽緩沖體系,,氨基酸組成進(jìn)一步改良,,并由半乳糖替代了葡萄糖,。至于選擇何種培養(yǎng)基并沒有一定的標(biāo)準(zhǔn),,有幾點(diǎn)建議可供參考:(1)建立某種細(xì)胞株所用的培養(yǎng)基應(yīng)該是培養(yǎng)這種細(xì)胞優(yōu)先的培養(yǎng)基,??梢圆殚唴⒖嘉墨I(xiàn),,或在購買細(xì)胞株時(shí)咨詢,。也可以在一些生物公司的網(wǎng)站上搜索,如Invitrogen網(wǎng)站上有一個(gè)CellLineDatabase的工具,,選擇你感興趣的細(xì)胞類型,,它就會彈出推薦的培養(yǎng)基,、血清和轉(zhuǎn)染試劑等,有時(shí)還有優(yōu)化好的轉(zhuǎn)染步驟,,很方便,。(2)其它實(shí)驗(yàn)室慣用的培養(yǎng)基不妨一試,許多培養(yǎng)基...
細(xì)胞培養(yǎng)基的種類按照細(xì)胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史,,細(xì)胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液,、天然細(xì)胞培養(yǎng)基、合成細(xì)胞培養(yǎng)基,、無血清細(xì)胞培養(yǎng)基,、限定化學(xué)成分細(xì)胞培養(yǎng)基等幾大種類。BSS主要是由無機(jī)鹽,、葡萄糖組成,,它的作用是維持細(xì)胞滲透壓平衡,保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng),。其主要用于細(xì)胞的漂洗,、配制其他試劑等。幾種常用的BSS配方如下(表1-1),。D-Hank's與Hank's的一個(gè)主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+,,因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因?yàn)镃a2+,、Mg2+是細(xì)胞膜的重要組成成份,,參與細(xì)胞粘附等功能,使用不含Ca2+,、Mg2+的BSS可避免細(xì)胞結(jié)團(tuán),。此外,Hanks液和Earl...
體外培養(yǎng)的上皮細(xì)胞直接生活在培養(yǎng)基中,,因此培養(yǎng)基應(yīng)能滿足細(xì)胞對營養(yǎng)成分,、促生長因子、,、滲透壓,、pH等諸多方面的要求。一,、營養(yǎng)成分維持細(xì)胞生長的營養(yǎng)條件一般包括以下幾個(gè)方面:1,、氨基酸:是細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的原料。所有細(xì)胞都需要12種必須氨基酸:纈氨酸,、亮、異亮,、蘇,、賴,、色、苯丙,、蛋,、組、酪,、精氨酸,、胱氨酸。此外還需要谷氨酰胺,,它在細(xì)胞代謝過程中有重要作用,,所含的氮是核酸中嘌令和嘧啶合成的來源,同樣也是合成三,、二,、一磷酸酰苷所需要的基本物質(zhì)。體外培養(yǎng)的各種培養(yǎng)基內(nèi)都含有必需氨基酸,。2,、單糖:培養(yǎng)中的細(xì)胞可以進(jìn)行有氧與無氧酵解,六碳糖是主要能源,。此外六碳糖也是合成某些氨基酸,、脂肪、核酸的原...
獲取細(xì)胞系可以通過原代細(xì)胞建立自己的培養(yǎng)系,,或者也可選擇從商業(yè)供應(yīng)商或者非盈利性供應(yīng)單位(即細(xì)胞庫)處購買已經(jīng)建立的細(xì)胞系,。聲譽(yù)良好的供應(yīng)單位可提供質(zhì)量的細(xì)胞系,而且會認(rèn)真地對細(xì)胞系進(jìn)行檢測,,以確保其完好性,,并且未被污染。我們不建議從其他實(shí)驗(yàn)室借用細(xì)胞,,因?yàn)檫@會帶來很高的污染風(fēng)險(xiǎn),。無論來源如何,使用細(xì)胞之前都應(yīng)確保所有新到細(xì)胞系已經(jīng)過支原體污染檢測,。培養(yǎng)環(huán)境細(xì)胞培養(yǎng)的一大優(yōu)勢在于能夠控制細(xì)胞生長的物理化學(xué)環(huán)境(即:溫度,、pH值、滲透壓,、O2和CO2濃度)和生理環(huán)境(即:和營養(yǎng)素濃度),。除溫度外,培養(yǎng)環(huán)境均由生長培養(yǎng)基控制,。上海中喬新舟簡述 上皮細(xì)胞培養(yǎng)基規(guī)范標(biāo)準(zhǔn),。歡迎來電咨詢上海中喬新舟!浙江...
DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基DMEM是由Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基,,起初是為小鼠成纖維細(xì)胞設(shè)計(jì)的,。DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍,,維生素濃度是MEM的4倍,采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用,。初的配方中葡萄糖含量為1000mg/L,,后來為了某些細(xì)胞的生長需要,將葡萄糖含量又調(diào)整為4500mg/L,,這就是大家常說的低糖和高糖了,。低糖適于依賴性貼壁細(xì)胞培養(yǎng),特別適用于生長速度快,、附著性較差的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng),。高糖更適合高密度懸浮細(xì)胞培養(yǎng),也適用于附著性較差,,但又不希望它脫離原來生長點(diǎn)的克隆培養(yǎng),,也可用于雜交瘤中骨髓瘤細(xì)胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞的培養(yǎng)。例如CHO細(xì)胞表達(dá)...
細(xì)胞培養(yǎng)基的類型動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)可以使用的培養(yǎng)基或人工/合成的培養(yǎng)基混合一些天然產(chǎn)物,。天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基只由天然生成的生物液體組成,。天然培養(yǎng)基非常有用和方便,適用于多種不同的動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng),。但是,,由于缺乏對這些天然培養(yǎng)基確切成分的認(rèn)識,使用天然培養(yǎng)基的主要缺點(diǎn)是可重復(fù)性差,。人工培養(yǎng)基通過人為地加入一些營養(yǎng)物質(zhì)(有機(jī)的和無機(jī)的),、維生素、鹽,、O2和CO2氣體,、血清蛋白、碳水化合物,、輔因子,,制備成人工或合成的培養(yǎng)基[1]。不同的人工培養(yǎng)基被分別設(shè)計(jì)用于下面的某個(gè)用途:1)及時(shí)生存(平衡的鹽溶液,,有特定的pH和滲透壓)2)長時(shí)間生存(平衡鹽溶液輔以各種配方的有機(jī)化合物和/或血清)3)不確定...
胸腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)基:胸腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)基是專門為正常人類胸腺上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)設(shè)計(jì)的適于其生長的培養(yǎng)基,。培養(yǎng)基是無菌的、液體培養(yǎng)基,,包含必需和非必需氨基,、維生素、有機(jī)和無機(jī)化合物,、,、生長因子、微量礦物質(zhì)。該培養(yǎng)基不含血清,。該培養(yǎng)基含HEPES和碳酸氫鹽緩沖體系,,在5%二氧化碳/95%空氣培養(yǎng)箱中平衡時(shí)PH值為7.4。該培養(yǎng)基在數(shù)量上和質(zhì)量上都保證理想的營養(yǎng)平衡狀態(tài),,選擇性促進(jìn)體外正常人類氣道上皮細(xì)胞的生長。胸腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)基包含500ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基,,5ml氣道胸腺細(xì)胞生長添加物(TyEpiCGS,Cat.#3962)和5ml青霉素/鏈霉素溶液(P/S,Cat.#0503).上皮細(xì)胞培養(yǎng)基的制作方法...
無污染體外生長的細(xì)胞對微生物及一些有害有毒物質(zhì)沒有抵抗能力,,因此培養(yǎng)基應(yīng)達(dá)到無化學(xué)物質(zhì)污染、無微生物污染(如細(xì)菌,、,、支原體、病毒等),、無其他對細(xì)胞產(chǎn)生損傷作用的生物活性物質(zhì)污染(如抗體,、補(bǔ)體)。對于天然培養(yǎng)基,,污染主要來源于取材過程及生物材料本身,,應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格選材,嚴(yán)格操作,。對于合成培養(yǎng)基,,污染主要來源于配制過程,配制所用的水,,器皿應(yīng)十分潔凈,,配制后應(yīng)嚴(yán)格過濾除菌??蒲袑?shí)驗(yàn)中,,細(xì)胞的體外培養(yǎng)一直是一個(gè)重要環(huán)節(jié)。細(xì)胞要養(yǎng)好,,就要用好血清,,如Ausbian?特級胎牛血清,它適合各種細(xì)胞培養(yǎng),,尤其適合難養(yǎng)細(xì)胞,,如:干細(xì)胞、肝細(xì)胞,,神經(jīng)細(xì)胞,,原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合,、轉(zhuǎn)染細(xì)胞等,。Ausbian?特級...
體外培養(yǎng)的上皮細(xì)胞直接生活在培養(yǎng)基中,因此培養(yǎng)基應(yīng)能滿足細(xì)胞對營養(yǎng)成分、促生長因子,、,、滲透壓、pH等諸多方面的要求,。一,、營養(yǎng)成分維持細(xì)胞生長的營養(yǎng)條件一般包括以下幾個(gè)方面:1、氨基酸:是細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的原料,。所有細(xì)胞都需要12種必須氨基酸:纈氨酸,、亮、異亮,、蘇,、賴、色,、苯丙,、蛋、組,、酪,、精氨酸、胱氨酸,。此外還需要谷氨酰胺,,它在細(xì)胞代謝過程中有重要作用,所含的氮是核酸中嘌令和嘧啶合成的來源,,同樣也是合成三,、二、一磷酸酰苷所需要的基本物質(zhì),。體外培養(yǎng)的各種培養(yǎng)基內(nèi)都含有必需氨基酸,。2、單糖:培養(yǎng)中的細(xì)胞可以進(jìn)行有氧與無氧酵解,,六碳糖是主要能源,。此外六碳糖也是合成某些氨基酸、脂肪,、核酸的原...
合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分,,用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計(jì),、配制的培養(yǎng)基,。早開發(fā)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基(minimalessentialmedium,MEM),其本質(zhì)為含有鹽,、氨基酸,、維生素和其他必需營養(yǎng)物的pH緩沖的等滲混合物,。在此基礎(chǔ)上,DMEM,、IMDM,、HAMF12、PRMI1640等各種合成細(xì)胞培養(yǎng)基被不斷開發(fā)出來,。與天然培養(yǎng)基相比,,有些天然的未知成分尚無法用已知的化學(xué)成分所替代,因此,,細(xì)胞培養(yǎng)中使用合成培養(yǎng)基時(shí)必須加入一定量的天然培養(yǎng)基成分,,以克服合成培養(yǎng)基的不足。普遍的做法是添加5~10%的血清,,這樣才能維持細(xì)胞活力,促進(jìn)細(xì)胞增殖,。針對不同的動(dòng)物細(xì)胞,,現(xiàn)已開發(fā)了多種商業(yè)化、...
培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞生物學(xué)一,、基本概念通常,,體外培養(yǎng)的生物成分無外乎兩種結(jié)構(gòu)形式:其一是小塊組織或稱為組織塊(tissueblock),一般稱為外植塊,;其二是將生物組織分散后制成的單個(gè)細(xì)胞,,一般稱為分離的細(xì)胞(isolatedcell)或者分散的細(xì)胞(dissociatedcell)。分散的過程通常在培養(yǎng)液或平衡鹽溶液中進(jìn)行,,分散的細(xì)胞被懸浮于培養(yǎng)液或平衡鹽溶液中。單個(gè)細(xì)胞分散存在于培養(yǎng)液或其它平衡鹽溶液中,、緩沖溶液中,,就稱為細(xì)胞懸液(cellsuspension),。狹義的細(xì)胞培養(yǎng)(cellculture)主要是指分離(散)細(xì)胞培養(yǎng),,廣義的細(xì)胞培養(yǎng)的概念還包括單(個(gè))細(xì)胞培養(yǎng)(singl...
肺泡上皮細(xì)胞培養(yǎng)基:上皮細(xì)胞培養(yǎng)基是專門為正常人類肺泡上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)設(shè)計(jì)的適于其生長的培養(yǎng)基,。是經(jīng)滅菌的液體培養(yǎng)基,,包含必需和非必需氨基酸,、維生素,、有機(jī)和無機(jī)化合物,、,、生長因子,、微量礦物質(zhì)和低濃度胎牛血清(2%),。該培養(yǎng)基緩沖體系為重碳酸鹽,,在含5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中平衡后pH值為。該培養(yǎng)基的配方能夠選擇性的促進(jìn)正常人類微血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)中的增殖和生長,,并為其達(dá)到理想營養(yǎng)平衡狀態(tài),。肺泡上皮細(xì)胞培養(yǎng)基包含500ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基,,10mll胎牛血清(FBS,),、5ml上皮細(xì)胞生長因子(EpiCGS,),、5ml青霉素/鏈霉素溶液(P/S,),。 上海中喬新舟 上皮細(xì)胞培養(yǎng)基的優(yōu)勢,。歡...
生長培養(yǎng)基可控制培養(yǎng)體系的pH值,,為培養(yǎng)的細(xì)胞緩沖pH值的變化。這種緩沖作用通常是通過添加有機(jī)緩沖鹽(例如:HEPES)或者二氧化碳-碳酸氫鹽緩沖鹽實(shí)現(xiàn),。由于培養(yǎng)基的pH值取決于溶解態(tài)二氧化碳(CO2)與碳酸氫鹽(HCO–)間的精密平衡,,因此空氣中二氧化碳含量的變化會改變培養(yǎng)基的pH值,。為此,,使用二氧化碳-碳酸氫鹽緩沖鹽培養(yǎng)基時(shí)必須使用外源性二氧化碳,特別是使用開放式培養(yǎng)皿培養(yǎng)細(xì)胞或者進(jìn)行高濃度的轉(zhuǎn)化細(xì)胞系培養(yǎng)時(shí),。雖然大多數(shù)研究人員通常使用濃度5–7%的二氧化碳,,但是4–10%濃度的二氧化碳適用于大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。然而,,每種細(xì)胞的培養(yǎng)條件不一,,每種培養(yǎng)基均具有其推薦的二氧化碳壓力...
如何選用培養(yǎng)基?選擇培養(yǎng)基沒有一定標(biāo)準(zhǔn),,有幾點(diǎn)建議可供參考:1.建立某種細(xì)胞株所用的培養(yǎng)基應(yīng)該是培養(yǎng)這種細(xì)胞優(yōu)先的培養(yǎng)基??梢圆殚單墨I(xiàn),,或在購買細(xì)胞株時(shí)咨詢。2.根據(jù)細(xì)胞株的特點(diǎn),、實(shí)驗(yàn)的需要來選擇培養(yǎng)基,。如小鼠細(xì)胞株多選1640;進(jìn)行細(xì)胞雜交,、基因轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn),,可選擇IMDM。3.用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)目的細(xì)胞,,觀察其生長狀態(tài),,可以用生長曲線、集落形成率等指標(biāo)判斷,,根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇比較好培養(yǎng)基,,這是客觀的方法,但比較繁瑣,。(AmericanTypeCultureCollection)收集了絕大多數(shù)細(xì)胞的詳細(xì)資料,。打開ATCC網(wǎng)頁的Cellsandhybridomas鏈接,輸入細(xì)胞名稱就可以搜...
體外培養(yǎng)的上皮細(xì)胞直接生活在培養(yǎng)基中,,因此培養(yǎng)基應(yīng)能滿足細(xì)胞對營養(yǎng)成分,、促生長因子、,、滲透壓、pH等諸多方面的要求,。一,、營養(yǎng)成分維持細(xì)胞生長的營養(yǎng)條件一般包括以下幾個(gè)方面:1、氨基酸:是細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的原料,。所有細(xì)胞都需要12種必須氨基酸:纈氨酸,、亮、異亮,、蘇,、賴、色,、苯丙,、蛋、組,、酪,、精氨酸,、胱氨酸。此外還需要谷氨酰胺,,它在細(xì)胞代謝過程中有重要作用,,所含的氮是核酸中嘌令和嘧啶合成的來源,同樣也是合成三,、二,、一磷酸酰苷所需要的基本物質(zhì)。體外培養(yǎng)的各種培養(yǎng)基內(nèi)都含有必需氨基酸,。2,、單糖:培養(yǎng)中的細(xì)胞可以進(jìn)行有氧與無氧酵解,六碳糖是主要能源,。此外六碳糖也是合成某些氨基酸,、脂肪、核酸的原...
M199細(xì)胞培養(yǎng)基1950年Morgan等設(shè)計(jì)的具有確定化學(xué)成分的細(xì)胞培養(yǎng)液,,即M-199。除BSS外,,含有53種成分,為多方面培養(yǎng)基,,主要用于雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng),。此培養(yǎng)液必須輔以血清才能支持長期培養(yǎng),。M-199可用于培養(yǎng)多種種屬來源的細(xì)胞,,并能培養(yǎng)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞?,F(xiàn)普遍用于病毒學(xué)、疫苗生產(chǎn),。McCoy5A培養(yǎng)基1959年MeCoy為肉瘤細(xì)胞設(shè)計(jì),BSS+40種成分,。可支持多種(如骨髓,、皮膚,、肺和脾臟等)的原代移植物的生長,,除適于一般的原代細(xì)胞培養(yǎng)外,,主要用于作組織活檢培養(yǎng)、一些淋巴細(xì)胞培養(yǎng)以及一些難培養(yǎng)細(xì)胞的生長支持,。例如Jensen大鼠肉瘤成纖維細(xì)胞,、人淋巴細(xì)胞,、HT-29,、BHL...
在低血清、無血清細(xì)胞培養(yǎng)基中,,為滿足細(xì)胞生長增殖需要,常常添加一些成份:蛋白質(zhì),、多肽,、核苷,、嘌呤、檸檬酸循環(huán)的中間產(chǎn)物,、脂類、及一些血清替代因子等,。其中蛋白質(zhì)具有重要的作用,,動(dòng)物細(xì)胞對許多物質(zhì)(難溶于水的離子或脂類物質(zhì))的攝取需要借助蛋白質(zhì)的傳遞作用,如白蛋白,、傳遞蛋白、貼壁蛋白等能夠攜帶脂肪酸,、,、礦物質(zhì)等促進(jìn)細(xì)胞生長,。轉(zhuǎn)鐵蛋白是一種重要的傳遞蛋白,能夠結(jié)合鐵,,促進(jìn)細(xì)胞對鐵離子的吸收,并具有作用,,其促生長作用可能與其具有生長因子的功能有關(guān),。胰島素可促進(jìn)細(xì)胞對葡萄糖和氨基酸的利用,商業(yè)化中一些生長因子以重組蛋白形式添加到培養(yǎng)基中,,主要用來刺激細(xì)胞增殖,并可促進(jìn)糖元和脂肪酸的合成,。乙醇...