研究中研究人員發(fā)現(xiàn),,胃病細(xì)胞周圍富含TAM,。TAM以M2極化表型為特征,,并促進(jìn)胃病細(xì)胞在體外和體內(nèi)的遷移,。此外,,研究人員發(fā)現(xiàn)M2衍生的外泌體決定了TAMs介導(dǎo)的遷移活動,。通過使用質(zhì)譜方法,,研究人員確定載脂蛋白E(ApoE)是M2巨噬細(xì)胞衍生的外泌體中高度特異性和有效的蛋白質(zhì)。ApoE是一種M2特異性且高度豐富的來源于M2外泌體的蛋白質(zhì),,是決定胃病細(xì)胞遷移潛力的主要驅(qū)動因素,。然而,來自ApoE-/-的小鼠M2巨噬細(xì)胞的外泌體在體外和體內(nèi)對胃病細(xì)胞的遷移沒有顯著影響,。在機(jī)制上,,M2巨噬細(xì)胞衍生的外泌體介導(dǎo)ApoE啟動的PI3K-Akt信號通路,并在TAM和受體胃病細(xì)胞之間進(jìn)行細(xì)胞間轉(zhuǎn)移,,促進(jìn)細(xì)胞骨...
外泌體的提取方法學(xué)規(guī)范,、統(tǒng)一定量及鑒定等。關(guān)于外泌體的提取有超速離心,、試劑盒,、超濾法、蔗糖密度梯度離心等,,然而各種方法均有其利弊,。超速離心法是目前外泌體相關(guān)文章中的主流方法,由于離心步驟繁瑣,,費(fèi)事費(fèi)力,,而且步驟多導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)中容易污染,且損耗量大,,使得較終回收的外泌體不穩(wěn)定,。而且對于抽提細(xì)胞上清來說,更是極為不請便,,試想用提取300ml的上清需要6個50ml離心管,,無論是過濾還是后續(xù)的每一步的離心去沉淀,都具有操作極其不便的缺點(diǎn),,總之非常麻煩,。而超濾法存在外泌體會堵塞膜孔,造成濃縮效率低,,濃縮管重復(fù)利用差,,甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會粘連成團(tuán),造成損失及較后的數(shù)據(jù)有誤差,對于后續(xù)實(shí)驗(yàn)也有影響利用...
由于這些核酸被囊膜包裹而被保護(hù),,穩(wěn)定性高,,不易降解,是一種用于一些病癥診斷和預(yù)后監(jiān)測的非常理想的新型生物標(biāo)記物一些疾病的早期診斷,、用藥監(jiān)控,、預(yù)后判斷。近年來,,隨著人們對外泌體的研究和認(rèn)識加深,外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點(diǎn)技術(shù)已被許多臨床科研機(jī)構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷,、治病和監(jiān)測,;如何高效地提取外泌體是實(shí)現(xiàn)這項(xiàng)新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵。外泌體(Exosome)是從體液(尿液,、血液,、唾液、腹水,、胸腹水等)和細(xì)胞液中快速提取的,,其是活細(xì)胞分泌到胞外的囊泡樣小體,含有多種蛋白和核酸分子(DNA,、RNA,、以及miRNA),在體內(nèi)細(xì)胞間物質(zhì)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起到重要作用,。同時可...
外泌體項(xiàng)目獲批學(xué)科方向:從統(tǒng)計(jì)來看,,與前年相似外泌體立項(xiàng)集中的領(lǐng)域還是一些病癥學(xué),近年來外泌體發(fā)表的文章也絕大部分與其在一些病癥的形成,,耐藥性,,檢測等方面有關(guān)。例如2019年發(fā)表在MolecularCancer(IF=10.679)上的文章表明外泌體FMR1-AS1通過TLR7/NFκB/c-My信號通路在女性食管ai中促進(jìn)維持ai癥干細(xì)胞樣細(xì)胞的動態(tài)平衡,。發(fā)表在JournalofExperimental&ClinicalCancerResearch(IF=5.646)上的一篇文章發(fā)現(xiàn)外泌體轉(zhuǎn)運(yùn)p-STAT3可促進(jìn)結(jié)直腸ai細(xì)胞獲得性5-FU耐藥性,。發(fā)表在Cancers(IF=6.162)上的...
外泌體與免疫系統(tǒng):不同的細(xì)胞來源的外泌體,包括免疫細(xì)胞(B細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞),、病細(xì)胞,、上皮細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞,釋放出帶有載體的外泌體,,可影響先天免疫系統(tǒng)和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)中受體細(xì)胞的增殖和各自的活性,。CD4+和CD8+T細(xì)胞可直接或間接地受到外泌體的影響,刺激或壓制其增殖和功能,。外泌體與代謝性和心血管疾?。和饷隗w可以通過攜帶miRNA或代謝物分子在代謝性疾病和心血管疾病的發(fā)生的發(fā)展過程中起作用。體外培養(yǎng)心血管疾病的細(xì)胞收集的外泌體與疾病相關(guān)的代謝適應(yīng)有關(guān);體外培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞的外泌體具有保護(hù)心血管的作用,。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,,大于一般蛋白質(zhì)。南京正規(guī)外泌體提取試劑...
外泌體的提取方法學(xué)規(guī)范,、統(tǒng)一定量及鑒定等,。關(guān)于外泌體的提取有超速離心、試劑盒,、超濾法,、蔗糖密度梯度離心等,然而各種方法均有其利弊,。超速離心法是目前外泌體相關(guān)文章中的主流方法,,由于離心步驟繁瑣,費(fèi)事費(fèi)力,,而且步驟多導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)中容易污染,,且損耗量大,使得較終回收的外泌體不穩(wěn)定,。而且對于抽提細(xì)胞上清來說,,更是極為不請便,試想用提取300ml的上清需要6個50ml離心管,,無論是過濾還是后續(xù)的每一步的離心去沉淀,,都具有操作極其不便的缺點(diǎn),總之非常麻煩,。而超濾法存在外泌體會堵塞膜孔,,造成濃縮效率低,濃縮管重復(fù)利用差,,甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會粘連成團(tuán),,造成損失及較后的數(shù)據(jù)有誤差,對于后續(xù)實(shí)驗(yàn)也有影響超速...
外泌體的提取分離:1,、超濾離心,。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,大于一般蛋白質(zhì),,利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進(jìn)行選擇性分離,,便可獲得外泌體。超濾離心法簡單高效,,且不影響外泌體的生物活性,,是提取細(xì)胞外泌體的一種新方法。2,、磁珠免疫法,。外泌體表面有其特異性標(biāo)記物(如CD63,、CD9蛋白),用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,,即可將外泌體吸附并分離出來,。磁珠法具有特異性高、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn),,但是效率低,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,,不利于下游實(shí)驗(yàn),,難以普遍普及。外泌體在免疫中抗原呈遞,、一些病癥的生長與遷移,、組織損傷的修復(fù)等生理病理...
外泌體的提取方法:1、色譜法,。色譜法是利用根據(jù)凝膠孔隙的孔徑大小與樣品分子尺寸的相對關(guān)系而對溶質(zhì)進(jìn)行分離的分析的方法。樣品中大分子不能進(jìn)入凝膠孔,,只能沿多孔凝膠粒子之間的空隙通過色譜柱,,首先被流動相洗脫出來;小分子可進(jìn)入凝膠中絕大部分孔洞,,在柱中受到更強(qiáng)地滯留,,更慢地被洗脫出。分離到的外泌體在電鏡下大小均一,,但是需要特殊的設(shè)備,,應(yīng)用不普遍。2,、超濾離心,。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,大于一般蛋白質(zhì),,利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進(jìn)行選擇性分離,,便可獲得外泌體。超濾離心法簡單高效,,且不影響外泌體的生物活性,,是提取細(xì)胞外泌體的一種新方法。外泌體:形成了一種全新的細(xì)胞...
外泌體可通過流式,、WB(檢測指標(biāo)有CD9,CD63,CD81),、電鏡觀察、NTA粒徑追蹤等手段檢測,,普遍應(yīng)用于藥物載體,、疾病診斷marker,、精細(xì)醫(yī)療、一些病癥治病等方面研究,。由于外泌體直徑小,,樣本含量低,提取十分困難,。已有的外泌體分離方式有密度梯度離心,、超濾離心法、免疫磁珠抗體捕獲,、商用試劑盒等,。但到目前為止,仍沒有一種提取方法能同時保證外泌體的含量,、純度以及生物活性,。外泌體是細(xì)胞間進(jìn)行物質(zhì)運(yùn)輸和信息交流的重要工具,可以通過調(diào)節(jié)免疫功能促進(jìn)一些病癥的增殖,,血管新生和一些病癥轉(zhuǎn)移,。與細(xì)菌傳染,幫助細(xì)菌逃避免疫關(guān)系很大,,并與心血管疾病,,老年癡呆等疾病具有密切關(guān)系外泌體的提取方法:多聚物沉淀法。成...
外泌體相關(guān)技術(shù)在過去幾年一直在快速發(fā)展,,預(yù)計(jì)市場將大幅增長,,因?yàn)樗鼈兛杀粦?yīng)用到液體活檢、精細(xì)醫(yī)學(xué)和再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,。特別是,,一些疾病衍生的外泌體通過調(diào)節(jié)血管生成、轉(zhuǎn)移和免疫來影響細(xì)胞的侵襲性,,使其成為用于一些疾病檢測,、診斷和治病選擇的極其有用的生物標(biāo)志物來源。在風(fēng)險投資方面,,有很多市場活動,。2016年1月,ExosomeDiagnostics公司在B輪融資中獲得6000萬美元資金,,并于2017年7月獲得3000萬美元的C輪融資,。同樣,CodiakBiosciences公司于2016年由MDAnderson一些疾病中心與兩家風(fēng)險投資公司共同成立,,以8000多萬美元的A和B輪融資成立該公司,。2017年...
作為一種分子通斷開關(guān)的KRAS發(fā)生突變時會處于“開啟”狀態(tài)。在80%~95%的胰腺導(dǎo)管腺?。≒DAC)當(dāng)中,,這個基因發(fā)生突變,,這也是這種一些疾病中較為常見的突變。這些研究人員證實(shí)iExosome能夠運(yùn)送特異性地靶向KRAS的siRNA和shRNA分子,,并且比他們的合成對應(yīng)物脂質(zhì)體(liposome)更加高效,。脂質(zhì)體不具有外泌體表現(xiàn)出的天然復(fù)雜性和優(yōu)勢。德州大學(xué)MD安德森一些疾病中心一些疾病生物學(xué)助理教授ValerieLeBleu博士說,,“我們的研究提示著與脂質(zhì)體相比,,外泌體表現(xiàn)出運(yùn)送siRNA分子和壓制侵襲性胰腺瘤生長的優(yōu)異能力。我們也證實(shí)外泌體表面上的CD47存在允許它們躲避來自循環(huán)單核細(xì)胞...
CD47是信號調(diào)節(jié)蛋白α(SIRPα,,也稱為CD172a)的配體,,CD47-SIRPα間的結(jié)合能夠發(fā)出“不要吃我”的信號,從而壓制吞噬作用,。病基因RAS能夠促進(jìn)胰腺病細(xì)胞增殖,,增強(qiáng)胞飲作用從而促進(jìn)一些病癥細(xì)胞攝取外泌體。合成納米顆粒對細(xì)胞有一定毒性作用,,但使用外泌體能夠較小化對細(xì)胞的毒性,。研究人員發(fā)現(xiàn),CD47和病基因KRAS驅(qū)動的胞飲作用都會壓制外泌體被循環(huán)系統(tǒng)的清理,,并增強(qiáng)胰腺病細(xì)胞對外泌體的特異性,。所以,外泌體的這種特性增強(qiáng)了它們通過遞送RNAi來特異性靶向胰腺病中的KRAS的能力,,并且使用外泌體作為單一靶向劑顯著改善了所有實(shí)驗(yàn)PDAC小鼠模型的總生存期,。外泌體提?。撼x法是較常用的外泌...
外泌體相關(guān)miRNA與肺病的診斷:miRNAs是一類含有20~25個核苷酸的非編碼小RNA,能夠通過下調(diào)或壓制靶mRNAs來調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄水平上的基因表達(dá),,目前非編碼RNA被普遍發(fā)現(xiàn)存在于NSCLC患者外泌體中,,參與一些病癥的形成和演化過程。單個miRNA可能通過壓制性復(fù)合物與多個mRNA結(jié)合,,從而阻滯整個生物通路,。因此,外泌體的miRNA具有成為NSCLC標(biāo)志物的優(yōu)勢,。Chen等在152例肺病患者的研究中初次報(bào)道了循環(huán)游離miRNA的表達(dá),,與75例健康者相比,發(fā)現(xiàn)了兩種高表達(dá)的miRNA(miR-25和miR-223),。Rabinonowits等對27例肺病患者和9例健康人的血漿外泌體中12個mi...
外泌體研究的主要應(yīng)用:外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型,,其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈,、細(xì)胞遷移,、細(xì)胞分化,、一些病癥侵襲等方方面面。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換,,從而導(dǎo)致大量新生血管的生成,,促進(jìn)了一些病癥的生長與侵襲。一些病癥,。一些病癥轉(zhuǎn)移,。來自白血病干細(xì)胞的外泌體促進(jìn)急性骨髓性白血病(AML)細(xì)胞的增殖,、遷移和壓制細(xì)胞凋亡,。治病靶標(biāo)。利用外泌體遞送小干擾RNA來沉默KRASG12D,,從而特異性高效靶向至胰腺病細(xì)胞,,以明顯降低RAS活化、病細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移過程,。免疫,。β細(xì)胞將含有蛋白質(zhì)和miRNA的外泌體釋放到細(xì)胞外,并可轉(zhuǎn)移到其他代謝部位或免...
這一特性已被應(yīng)用于開發(fā)心血管疾病,,神經(jīng)系統(tǒng)疾病和一些病癥的分子診斷方法,,也在肝腎肺相關(guān)疾病中進(jìn)行研發(fā)測試。將沉淀物用PBS緩沖液進(jìn)行懸浮,,使外泌體懸浮于液體上層,,外泌體與神經(jīng)退行性疾病:外泌體可能促進(jìn)或限制大腦中未折疊和異常折疊的蛋白質(zhì)的聚集,。AD病人腦脊液外泌體中均可檢測到Tau和Aβ蛋白,。類似的現(xiàn)象也在PD和ALS疾病中發(fā)現(xiàn)。PD病人腦脊液外泌體可檢測到α-synuclein,,ALS病人外泌體中也可以檢測到SOD1或TDP-43,。外泌體與疾病診斷(應(yīng)用潛能):外泌體生成機(jī)制表明,通過分析外泌體的組分,,可以幫助識別其來源的細(xì)胞類型,。外泌體提取:使用抗體包被珠子的分離不適合從大量樣本中獲得外泌...
外泌體在肺病進(jìn)程中的作用:肺病細(xì)胞來源外泌體(LCC-exosome)可以通過刺激一些病癥血管的形成來促進(jìn)一些病癥的生長,。據(jù)相關(guān)報(bào)道稱,,LCC-exosome中的miR-210可以通過調(diào)節(jié)基質(zhì)細(xì)胞中酪氨酸受體激酶A3的含量,促進(jìn)一些病癥血管的生成,;而LCC-exosome中的miR-23a則可以通過啟動脯氨酰羥化酶及壓制緊密結(jié)合蛋白ZO-1來促進(jìn)肺病的生血管作用,。此外,有研究發(fā)現(xiàn),,外泌體中的內(nèi)容物可以觸發(fā)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT),。晚期肺病患者血清中外泌體波形蛋白表達(dá)增加,,促使人正常支氣管上皮細(xì)胞出現(xiàn)EMT,從而使肺支氣管正常上皮細(xì)胞出現(xiàn)增殖,,遷移能力,。色譜法。這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小...
外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來的微小囊泡,,直徑約為30-200nm,,密度在1.13-1.21g/ml,具有杯狀形態(tài),、雙層膜結(jié)構(gòu),,天然存在于血液、尿液,、唾液,、母乳和細(xì)胞培養(yǎng)基等生物體液中。包括瘤細(xì)胞在內(nèi)幾乎所有類型的細(xì)胞(免疫細(xì)胞,、神經(jīng)細(xì)胞,、干細(xì)胞),都可以產(chǎn)生并釋放exosome,。Exosome內(nèi)含有與細(xì)胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA,,Exosome可通過細(xì)胞膜受體直接受體細(xì)胞,也可運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì),、mRNA,、miRNA、lncRNA,、circRNA,,甚至細(xì)胞器進(jìn)入受體細(xì)胞,參與細(xì)胞間通訊,。Exosome在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng),、血管生成,、凋亡、凝血和廢物處理等生理過程發(fā)揮關(guān)鍵作...
外泌體的提取主要包括以下幾種方式,。一是超速離心法,,這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,,但是純度不足,,電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),,也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體,。二是過濾離心,,這種操作簡單、省時,,不影響外泌體的生物活性,,但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法,,用此種方法分離到的外泌體純度高,,但是前期準(zhǔn)備工作繁雜,耗時,,量少,。外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點(diǎn)技術(shù)已被許多臨床科研機(jī)構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷外泌體提取:用這種聚合物沉淀具有許多優(yōu)點(diǎn),,包括對分離的外泌體影響小,、pH中性等。廈門正規(guī)外泌體...
外泌體與肺病預(yù)后:外泌體mirRNA和蛋白質(zhì)被認(rèn)為是NSCLC的預(yù)后因子,。Dejima等在研究NSCLC患者預(yù)后的生物標(biāo)志物時發(fā)現(xiàn),,外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升。此外,,還有研究表明,,低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復(fù)發(fā)率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時發(fā)現(xiàn),,NY-ESO-1是其中對低生存率有顯著影響的標(biāo)志物,。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統(tǒng)分析了28位NSCLC患者體內(nèi)的365種miRNA,其中l(wèi)et-7f,、miR-30e-3p和miR-20b表...
將濃縮液加至20mmol/LTris/30%蔗糖/45%蔗糖(pH7.4)的密度梯度液上行4℃超速離心100000×g(水平轉(zhuǎn)子SW-41)8h,吸取位于蔗糖之上的顏色明顯較深條帶的液體約5mL,以10倍PBS稀釋混勻后再次用100-ku超濾離心管(Millipore)濃縮至5mL,將濃縮液重新以10倍PBS稀釋后4℃超速離心100000×g(角轉(zhuǎn)子TYPE50.2)4h,收集離心管底部約1mL液體及極微量沉淀(來自2×107個細(xì)胞)以20mLPBS重懸即為胞外體,用0.22μm過濾膜除菌后凍存于-80℃?zhèn)溆?。(該步驟參考文獻(xiàn)“腫瘤細(xì)胞來源胞外體的分離鑒定與功能檢測”)優(yōu)點(diǎn)是:分離得到的外泌體...
外泌體相關(guān)技術(shù)在過去幾年一直在快速發(fā)展,預(yù)計(jì)市場將大幅增長,,因?yàn)樗鼈兛杀粦?yīng)用到液體活檢,、精細(xì)醫(yī)學(xué)和再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。特別是,,一些疾病衍生的外泌體通過調(diào)節(jié)血管生成,、轉(zhuǎn)移和免疫來影響細(xì)胞的侵襲性,使其成為用于一些疾病檢測,、診斷和治病選擇的極其有用的生物標(biāo)志物來源,。在風(fēng)險投資方面,有很多市場活動,。2016年1月,,ExosomeDiagnostics公司在B輪融資中獲得6000萬美元資金,并于2017年7月獲得3000萬美元的C輪融資。同樣,,CodiakBiosciences公司于2016年由MDAnderson一些疾病中心與兩家風(fēng)險投資公司共同成立,,以8000多萬美元的A和B輪融資成立該公司。2017年...
外泌體的提取方法:1,、磁珠免疫法,。外泌體表面有其特異性標(biāo)記物(如CD63、CD9蛋白),,用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,,即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高,、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn),但是效率低,,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,,不利于下游實(shí)驗(yàn),難以普遍普及,。2,、多聚物沉淀法。聚乙二醇(PEG)為常用的多聚物,,可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,,早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒,現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,,其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān),。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽性),,顆粒大小不均一,,產(chǎn)生難以去除的聚合物,機(jī)...
人體幾乎所有類型的細(xì)胞都能分泌外泌體,,外泌體普遍存在并分布于各種體液中,,攜帶多種蛋白質(zhì)、mRNA,、miRNA和脂質(zhì)類物質(zhì)等,,作為重要的傳遞信號分子,形成了一種全新的細(xì)胞-細(xì)胞間信息傳遞系統(tǒng),,可參與細(xì)胞通訊、細(xì)胞遷移,、血管新生和一些病癥細(xì)胞生長等過程,。外泌體與微泡:我們知道,細(xì)胞間相互作用可以通過釋放蛋白質(zhì)、核酸,、脂質(zhì)等分子到胞外與受體結(jié)合從而介導(dǎo)胞內(nèi)細(xì)胞傳導(dǎo),。除此之外,細(xì)胞還可以釋放膜囊泡,,外泌體與微泡就是其中兩種,,二者相似但形成方式不同:外泌體是細(xì)胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中的膜囊泡,,而微泡則是細(xì)胞出芽與細(xì)胞膜融合后直接脫落形成的囊泡,,且外...
外泌體的提取方法:1.超速離心法(差速離心)。超離法是較常用的外泌體純化手段,,采用低速離心,、高速離心交替進(jìn)行,可分離到大小相近的囊泡顆粒,。超離法因操作簡單,,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,但過程比較費(fèi)時,,且回收率不穩(wěn)定(可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)),,純度也受到質(zhì)疑;此外,,重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害,,從而降低其質(zhì)量。2.密度梯度離心,。在超速離心力作用下,,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,是一種區(qū)帶分離法,。通過密度梯度離心,,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,,但步驟繁瑣,,耗時,對離心時間極為敏感,。聚乙二醇(PEG)可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合...
人體幾乎所有類型的細(xì)胞都能分泌外泌體,,外泌體普遍存在并分布于各種體液中,攜帶多種蛋白質(zhì),、mRNA,、miRNA和脂質(zhì)類物質(zhì)等,作為重要的傳遞信號分子,,形成了一種全新的細(xì)胞-細(xì)胞間信息傳遞系統(tǒng),,可參與細(xì)胞通訊、細(xì)胞遷移、血管新生和一些病癥細(xì)胞生長等過程,。外泌體與微泡:我們知道,,細(xì)胞間相互作用可以通過釋放蛋白質(zhì)、核酸,、脂質(zhì)等分子到胞外與受體結(jié)合從而介導(dǎo)胞內(nèi)細(xì)胞傳導(dǎo),。除此之外,細(xì)胞還可以釋放膜囊泡,,外泌體與微泡就是其中兩種,,二者相似但形成方式不同:外泌體是細(xì)胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中的膜囊泡,,而微泡則是細(xì)胞出芽與細(xì)胞膜融合后直接脫落形成的囊泡,,且外...
外泌體可通過流式、WB(檢測指標(biāo)有CD9,CD63,CD81),、電鏡觀察,、NTA粒徑追蹤等手段檢測,普遍應(yīng)用于藥物載體,、疾病診斷marker,、精細(xì)醫(yī)療、一些病癥治病等方面研究,。由于外泌體直徑小,,樣本含量低,提取十分困難,。已有的外泌體分離方式有密度梯度離心,、超濾離心法、免疫磁珠抗體捕獲,、商用試劑盒等,。但到目前為止,仍沒有一種提取方法能同時保證外泌體的含量,、純度以及生物活性,。外泌體是細(xì)胞間進(jìn)行物質(zhì)運(yùn)輸和信息交流的重要工具,可以通過調(diào)節(jié)免疫功能促進(jìn)一些病癥的增殖,,血管新生和一些病癥轉(zhuǎn)移,。與細(xì)菌傳染,幫助細(xì)菌逃避免疫關(guān)系很大,,并與心血管疾病,,老年癡呆等疾病具有密切關(guān)系。在體內(nèi)細(xì)胞間物質(zhì)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起到...
外泌體(Exosome)是細(xì)胞主動分泌的囊泡樣小體,,大小均一,,直徑30-200nm,,密度1.10-1.18g/ml,來源普遍,,幾乎所有細(xì)胞都可分泌,在血液,,尿液,,唾液,腦脊液,,腹水,,乳汁等體液中普遍分布。外泌體較早在1986年發(fā)現(xiàn)于培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中,。1996年,,研究者發(fā)現(xiàn)外泌體作為抗原呈遞因子參與T細(xì)胞依賴的抗一些病癥反應(yīng),開啟了外泌體蛋白研究的新天地,。2013年諾貝爾生物/醫(yī)學(xué)獎解答了細(xì)胞如何組織其內(nèi)部較重要的運(yùn)輸系統(tǒng)之一——囊泡傳輸系統(tǒng)的奧秘,。外泌體的提取方法:多聚物沉淀法。合肥外泌體提取試劑廠家PS不是你想有,,想有就能有,,迄今為止所發(fā)現(xiàn)的外泌體,并非所有的外膜表面都暴露PS,。例如...
外泌體的提取方法學(xué)規(guī)范,、統(tǒng)一定量及鑒定等。關(guān)于外泌體的提取有超速離心,、試劑盒,、超濾法、蔗糖密度梯度離心等,,然而各種方法均有其利弊,。超速離心法是目前外泌體相關(guān)文章中的主流方法,由于離心步驟繁瑣,,費(fèi)事費(fèi)力,,而且步驟多導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)中容易污染,且損耗量大,,使得較終回收的外泌體不穩(wěn)定,。而且對于抽提細(xì)胞上清來說,更是極為不請便,,試想用提取300ml的上清需要6個50ml離心管,,無論是過濾還是后續(xù)的每一步的離心去沉淀,都具有操作極其不便的缺點(diǎn),,總之非常麻煩,。而超濾法存在外泌體會堵塞膜孔,,造成濃縮效率低,濃縮管重復(fù)利用差,,甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會粘連成團(tuán),,造成損失及較后的數(shù)據(jù)有誤差,對于后續(xù)實(shí)驗(yàn)也有影響,。外...
外泌體可通過流式,、WB(檢測指標(biāo)有CD9,CD63,CD81)、電鏡觀察,、NTA粒徑追蹤等手段檢測,,普遍應(yīng)用于藥物載體、疾病診斷marker,、精細(xì)醫(yī)療,、一些病癥治病等方面研究。由于外泌體直徑小,,樣本含量低,,提取十分困難。已有的外泌體分離方式有密度梯度離心,、超濾離心法,、免疫磁珠抗體捕獲、商用試劑盒等,。但到目前為止,,仍沒有一種提取方法能同時保證外泌體的含量、純度以及生物活性,。外泌體是細(xì)胞間進(jìn)行物質(zhì)運(yùn)輸和信息交流的重要工具,,可以通過調(diào)節(jié)免疫功能促進(jìn)一些病癥的增殖,血管新生和一些病癥轉(zhuǎn)移,。與細(xì)菌傳染,,幫助細(xì)菌逃避免疫關(guān)系很大,并與心血管疾病,,老年癡呆等疾病具有密切關(guān)系,。外泌體提取:超離法因操作簡單,,獲...
外泌體(Exosome)是細(xì)胞主動分泌的囊泡樣小體,,大小均一,直徑30-200nm,,密度1.10-1.18g/ml,,來源普遍,幾乎所有細(xì)胞都可分泌,,在血液,,尿液,,唾液,腦脊液,,腹水,,乳汁等體液中普遍分布。外泌體較早在1986年發(fā)現(xiàn)于培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中,。1996年,,研究者發(fā)現(xiàn)外泌體作為抗原呈遞因子參與T細(xì)胞依賴的抗一些病癥反應(yīng),開啟了外泌體蛋白研究的新天地,。2013年諾貝爾生物/醫(yī)學(xué)獎解答了細(xì)胞如何組織其內(nèi)部較重要的運(yùn)輸系統(tǒng)之一——囊泡傳輸系統(tǒng)的奧秘。外泌體提?。菏褂每贵w包被珠子的分離不適合從大量樣本中獲得外泌體,。濟(jì)南正規(guī)外泌體提取試劑外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-15...