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南京RIP免疫沉淀實(shí)驗(yàn)視頻

來(lái)源： 發(fā)布時(shí)間：2024-07-05

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation，簡(jiǎn)稱IP）是一種生物化學(xué)方法，它利用特異性抗體對(duì)抗原進(jìn)行親和純化,。在含有目的抗原的細(xì)胞裂解液中加入特定的抗體以及Protein A/G-Beads（預(yù)先將Protein A/G固定結(jié)合在磁珠上）,，根據(jù)抗原與抗體,、Protein A/G與抗體的Fc的特異性,，形成“抗原-抗體-Protein A/G-Beads”復(fù)合物，清洗離心后去除溶液中未結(jié)合的雜蛋白,，檢測(cè)是否存在目的蛋白,。
免疫沉淀技術(shù)常用于從細(xì)胞或組織裂解物中分離用于免疫印跡檢測(cè)或其他檢測(cè)技術(shù)的蛋白和其他生物分子。它的目標(biāo)是分離足夠用于Western Blot或其他檢測(cè)方法檢測(cè)的蛋白質(zhì),。
免疫沉淀技術(shù)Co-IP的優(yōu)缺點(diǎn)是什么,？南京RIP免疫沉淀實(shí)驗(yàn)視頻

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免疫沉淀純化所得抗原純度低一般有多種原因：
1. 非特異性蛋白污染
如果洗脫所得抗原純度較低，則有幾種方法可以進(jìn)行優(yōu)化,。在結(jié)合或洗滌緩沖液中加入去污劑或其他可以降低非特異性結(jié)合的組分,。使用普通微珠預(yù)純化樣本還可以降低非目標(biāo)分子的共純化。此外,，還可以使用無(wú)關(guān)蛋白 (如BSA) 封閉微珠 ,。
2. 抗體污染
使用蛋白A、G或A/G的經(jīng)典免疫沉淀實(shí)驗(yàn)中會(huì)出現(xiàn)抗體與抗原共洗脫的情況,。如果共洗脫會(huì)影響下游分析,，則需要使用抗體通過(guò)共價(jià)連接固定至微珠的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如Pierce 直接 IP 或交聯(lián) IP 的形式,。
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Co-IP（Co-Immunoprecipitation，共免疫沉淀）的實(shí)驗(yàn)方法通常包括以下步驟：
1. 細(xì)胞培養(yǎng)與裂解：細(xì)胞在適宜的培養(yǎng)條件下生長(zhǎng)到適當(dāng)?shù)拿芏取?/span>
蛋白質(zhì)分離：裂解后的細(xì)胞混合物通過(guò)離心去除未破碎的細(xì)胞碎片和未裂解的細(xì)胞,。收集上清液
2. 抗體的添加：將特異性抗體（針對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)的抗體）加入到裂解物中,。
3. 免疫復(fù)合物的形成：抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合后,，形成免疫復(fù)合物。
4. 親和介質(zhì)的使用：向混合物中添加蛋白A或蛋白G結(jié)合的珠子（如瓊脂糖或磁性珠子）,。
5. 免疫復(fù)合物的捕獲：將混合物與珠子孵育一段時(shí)間后,，使用磁鐵或離心的方法將珠子收集起來(lái)，同時(shí)捕獲了與之結(jié)合的免疫復(fù)合物,。
6. 洗滌：洗滌珠子以去除未特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)和其他分子,。
7. 洗脫：使用適當(dāng)?shù)木彌_液將免疫復(fù)合物從珠子上洗脫下來(lái)，常用的緩沖液包括SDS樣品緩沖液,，用于后續(xù)的電泳分析,。
8. 蛋白質(zhì)分析：洗脫的蛋白質(zhì)可以通過(guò)SDS-PAGE凝膠電泳、Western blot,、質(zhì)譜分析等方法進(jìn)行進(jìn)一步分析,。
9. 實(shí)驗(yàn)對(duì)照：實(shí)驗(yàn)中應(yīng)包括陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性,。
10. 數(shù)據(jù)分析：對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析,，確認(rèn)目標(biāo)蛋白是否成功沉淀，并鑒定任何可能的相互作用蛋白,。

Co-IP（免疫共沉淀）技術(shù)主要用于研究蛋白質(zhì)之間的相互作用,，其應(yīng)用場(chǎng)景如下：
1. 蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)的鑒定：Co-IP可用于構(gòu)建蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)，發(fā)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的結(jié)合伙伴,。
2. 信號(hào)傳導(dǎo)途徑的研究：通過(guò)Co-IP技術(shù),，科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)了許多關(guān)鍵的細(xì)胞信號(hào)通路，如MAPK和PI3K/Akt通路等,，為深入理解這些通路的功能和調(diào)控機(jī)制提供了重要線索,。
3. 藥物靶點(diǎn)篩選：利用Co-IP技術(shù)，研究人員可以篩選潛在的藥物靶點(diǎn),。
疾病機(jī)制研究：通過(guò)分析疾病相關(guān)蛋白質(zhì)的相互作用,，Co-IP有助于揭示疾病的分子機(jī)制。
4. 抗體藥物開發(fā)：Co-IP可用于研究抗體藥物與其靶標(biāo)蛋白的結(jié)合特性,，評(píng)估抗體藥物的親和力和特異性,。
5. 轉(zhuǎn)錄因子研究：Co-IP技術(shù)可以用于研究轉(zhuǎn)錄因子與蛋白質(zhì)的相互作用，進(jìn)而揭示基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò),。
免疫沉淀RIP技術(shù)選瓊脂糖珠還是磁珠,？

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免疫沉淀實(shí)驗(yàn)中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實(shí)驗(yàn)情況。
瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構(gòu)  (直徑 50-150 μm)  可以結(jié)合抗體  (繼而結(jié)合靶蛋白) ,，它能夠直接高效,、快速結(jié)合抗體，而不需借助特殊的專業(yè)設(shè)備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構(gòu),，這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質(zhì)相互接觸,，具有更高的結(jié)合載量。
與瓊脂糖珠不同,，磁珠是固體,，抗體的結(jié)合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ,，盡管磁珠沒(méi)有多孔中心增加結(jié)合能力,，但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多，使磁珠擁有足夠的抗體結(jié)合表面積滿足高容量的抗體結(jié)合,。
簡(jiǎn)而言之,，瓊脂糖珠的結(jié)合能力較強(qiáng)，而磁珠在得率,，可重復(fù)性以及自動(dòng)化方面有明顯的優(yōu)勢(shì),。
免疫沉淀技術(shù)的實(shí)驗(yàn)方法。南京RIP免疫沉淀磁珠多少錢

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免疫沉淀RIP實(shí)驗(yàn)中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實(shí)驗(yàn)情況,。
瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構(gòu)  (直徑 50-150 μm)  可以結(jié)合抗體  (繼而結(jié)合靶蛋白) ，它能夠直接高效,、快速結(jié)合抗體,，而不需借助特殊的專業(yè)設(shè)備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構(gòu),，這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質(zhì)相互接觸,，具有更高的結(jié)合載量。
與瓊脂糖珠不同,，磁珠是固體,，抗體的結(jié)合限于磁珠的表面,。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ,，盡管磁珠沒(méi)有多孔中心增加結(jié)合能力，但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多,，使磁珠擁有足夠的抗體結(jié)合表面積滿足高容量的抗體結(jié)合,。
簡(jiǎn)而言之，瓊脂糖珠的結(jié)合能力較強(qiáng),，而磁珠在得率,，可重復(fù)性以及自動(dòng)化方面有明顯的優(yōu)勢(shì)。
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標(biāo)簽： 免疫沉淀 支原體