細胞培養(yǎng)過程中如果發(fā)現(xiàn)支原體污染,，可以采取以下一些方法嘗試去除污染：
1. 抗*素治*：使用針對支原體有效的抗*素,，如四環(huán)素類,、大環(huán)內(nèi)酯類,、氟喹諾酮類等,。根據(jù)搜索結(jié)果,，可以加入高濃度抗*素進行沖擊治*,，例如慶大霉素 200ug/ml,，四環(huán)素10ug/ml,，卡那霉素50ug/ml，并維持24-48小時后再換入常規(guī)培養(yǎng)液,。
2. 加溫處理：支原體不耐熱,，可以將細胞置于41°C中處理5-10小時以殺滅支原體。但需注意,，高溫也可能對細胞造成傷害,，因此需要預先確定對細胞影響較小的處理時間。
3. 使用支原體清除劑：市場上有專門的支原體清除劑,，按照產(chǎn)品說明使用,。
4. 使用支原體清*培養(yǎng)基：如Procell支原體清*培養(yǎng)基，這類產(chǎn)品含有清*支原體的特殊成分,，可以抑制支原體生長并挽救珍貴細胞,。
5. 物理方法：一些實驗室采用過濾的方法，使用0.22μm或更小孔徑的濾膜過濾培養(yǎng)基和試劑,，以阻止支原體的侵入,。
6. 細胞傳代：在一些情況下，通過細胞傳代可能有助于減少支原體的污染程度,。
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支原體是細胞外生存的 小微生物,，是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物，大小一般在0.2~0.5um之間,，呈高度多形性,，有球形、桿形,、絲形,、分枝狀等多種態(tài)。
1,、支原體存在于我們周圍,，他可能就如塵埃一樣存在于我們的環(huán)境中
2、可透過一般的濾膜,，所以不要寄希望于過濾可以清楚支原體污染的液體
支原體對培養(yǎng)細胞的污染發(fā)生率高,，據(jù)估計平均發(fā)生率在60%左右。同時又非常隱秘,，早期不容易被發(fā)現(xiàn),，除非用特異性和靈敏度都非常高的檢測試劑盒。支原體因為個頭小，能穿過0.22微米濾器,，并且在實驗室內(nèi)會潛在的擴散,。支原體污染使得用被污染的細胞樣本做的實驗完全失去意義和價值。
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目前有 210 +種不同種類的支原體分布于人類,、動物、昆蟲和植物中,，其中 20 +種在細胞培養(yǎng)中被發(fā)現(xiàn)為污染物,。支原體在實驗室中的傳播來源多種多樣，主要來源包括實驗室人員,、胎牛血清（FBS）或新生牛血清（NBS）,、以及由豬來源的胰蛋白酶溶液。此外,，來自其他實驗室或商業(yè)供應商的細胞培養(yǎng)物,、培養(yǎng)基、污染的試劑,；非無菌供應品,、培養(yǎng)基和溶液；實驗室人員,；培養(yǎng)箱,；液氮；空氣顆粒和氣溶膠,；抗*素的過度使用,；細胞培養(yǎng)器皿的不正確密封；以及其他的支原體細胞培養(yǎng)物等都可能成為支原體的傳播途徑,。
細胞培養(yǎng)中,，支原體檢測的重要性體現(xiàn)在以下幾個方面：
1. 高污染發(fā)生率：支原體對培養(yǎng)細胞的污染發(fā)生率非常高，據(jù)估計平均發(fā)生率在60%左右,。
3. 隱匿性強：支原體污染具有很高的隱匿性,，早期不容易被發(fā)現(xiàn)，除非使用特異性和靈敏度都非常高的專業(yè)檢測試劑盒,。
3. 影響實驗結(jié)果：支原體污染會改變細胞的生理性質(zhì),，影響實驗結(jié)果的準確性。細胞培養(yǎng)物一旦被支原體污染,，會改變細胞DNA,、RNA及蛋白表達,，導致實驗數(shù)據(jù)不準確,、不穩(wěn)定。
4. 難以通過肉眼或常規(guī)方法發(fā)現(xiàn)：支原體污染無法通過肉眼檢查細胞來發(fā)現(xiàn),，也不能通過向培養(yǎng)基中加入抗*素控制,。
5. 對細胞培養(yǎng)數(shù)據(jù)可靠性的影響：支原體污染會降低細胞系的有效性,，使得細胞培養(yǎng)數(shù)據(jù)失去可靠性，無法為生命科學研究提供有意義的數(shù)據(jù),。
6. 預防和控制污染的必要性：定期進行支原體檢測是細胞培養(yǎng)實驗室進行自我質(zhì)量監(jiān)控的必要組成部分,，有助于及時發(fā)現(xiàn)并控制污染，保證實驗的準確性和重復性,。
7. 避免細胞株受損：支原體污染可能導致細胞株受損,，影響細胞株的質(zhì)量和研究價值。及時檢測和清*支原體污染有助于保護珍貴的細胞資源
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支原體去除試劑在清*支原體的過程中可能會對細胞的生長狀態(tài)產(chǎn)生一定的影響,。支原體去除試劑是一種非抗*素類試劑，它通過與支原體膜特異性結(jié)合,，改變支原體膜的通透性,，從而導致支原體破裂死亡。盡管該產(chǎn)品在作用期間可能會對細胞的活力和形態(tài)有一定的影響,，但由于它不能穿過真核細胞的細胞膜,，因此不會改變細胞的任何特性。支原體被清*后,，細胞在后續(xù)的傳代過程中能快速恢復其正常的生長和增殖狀態(tài),，細胞后續(xù)的生長增殖幾乎無影響。
此外,，該產(chǎn)品不含抗*素,，不會使支原體發(fā)生耐藥反應，細胞毒性小,。然而,，需要注意的是，不同細胞對支原體去除試劑的耐受程度有所差異,，可以根據(jù)實驗結(jié)果適當調(diào)整細胞量和處理條件,。在某些情況下，如果出現(xiàn)細胞變形,、生長緩慢等現(xiàn)象,，可以更換成標準培養(yǎng)液終止作用，或者調(diào)整去除試劑的使用濃度和作用時間,。
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細胞培養(yǎng)中支原體難以徹底消滅的原因主要包括以下幾點：
1. 無細胞壁結(jié)構(gòu)：支原體是沒有細胞壁的微生物,，這使得許多作用于細胞壁的抗*素對支原體無效,。
2. 微小體積：支原體體積小，能夠穿過常規(guī)的除菌濾膜，例如0.20微米甚至0.10微米的濾膜,。
3. 隱匿性：支原體污染初期很難被察覺,，它們在普通光學顯微鏡下幾乎不可見，因此細胞被支原體污染后,，前期很難被發(fā)現(xiàn),。
4. 傳播途徑多樣：支原體可以通過細胞培養(yǎng)物、細胞懸液,、細胞培養(yǎng)用具等途徑迅速傳播,。
5. 污染源 ：支原體污染源包括細胞間的交叉污染、操作人員的口腔,、皮膚,，以及細胞培養(yǎng)用的組分如血清、培養(yǎng)液等,。
6. 環(huán)境因素：實驗室環(huán)境,、試驗臺、超凈臺,、培養(yǎng)箱等可能被支原體污染,，引起細胞的污染。
7. 抗*素耐藥性：支原體可能對某些抗*素產(chǎn)生耐藥性,，使得治*效果變差,。
8. 檢測和清理方法的局限性：一些傳統(tǒng)的支原體檢測和清理方法可能不夠靈敏或有效,，導致難以徹底清理支原體
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