使用方法：1,、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被：以包被濃度為2μg/cm2為例，用無菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL,。加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中,，確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面。開蓋在超凈臺上過夜晾干,，也可以在室溫放置1小時后,，用PBS洗3~4次后直接使用。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個月以上的時間,。2,、三維膠原凝膠的制備：A、無細(xì)胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）將200μL本品加到置于冰浴的離心管中,，加入690μL雙蒸水,，然后加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）,，立即混勻,。再加入100μL10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時需要測定pH值）,。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi),。如果配制中使用的是10×PBS,，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。4°C沉淀10小時,，去除上清液,，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀,。唐山正規(guī)鼠尾膠原哪里買

鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基,，它具有促進(jìn)體外培養(yǎng)細(xì)胞（特別是上皮細(xì)胞）貼壁的作用，同時它也是一種天然的黏附劑,，當(dāng)我們需要在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)放置小玻片,，制備細(xì)胞爬片時，可在瓶底涂一層膠原,，再放上小玻片,，自然干燥后小玻片就固定于培養(yǎng)瓶之中。通過本實(shí)驗(yàn)可掌握鼠尾膠原的制備方法,，以及如何切割小玻片,，并利用鼠尾膠原將其固定于培養(yǎng)瓶內(nèi)。實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料：大鼠尾巴,、剪刀,、鑷子、止血鉗,、彎頭吸管,、平皿、三角燒瓶,、燒杯,、量筒、天平,、生理鹽水,、75%酒精、0.1%醋酸溶液,、蓋玻片,、培養(yǎng)瓶、鉆石筆,、鼠尾膠原,。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1、制備鼠尾膠原,。2,、切割小玻片,。3、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶內(nèi),。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時程記錄，并且制作簡便,，成本低廉,。廈門鼠尾膠原單價方法制作鼠尾膠原，觀察全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)中,，自制的鼠尾膠原對前庭毛細(xì)胞的貼壁黏附作用,。

鼠尾膠原蛋白等實(shí)驗(yàn)技術(shù)應(yīng)用：干細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等多種「難伺候」的細(xì)胞,，以及一些組織在體外培養(yǎng)時,，需要在模擬體內(nèi)環(huán)境的細(xì)胞外基質(zhì)中生長，膠原蛋白和纖粘蛋白正是細(xì)胞外基質(zhì)的主要組成部分,，富含1型膠原蛋白大鼠尾部也成了實(shí)驗(yàn)室用膠原蛋白的較主要來源,。鼠尾取血剪下幾毫米小鼠尾巴、在小鼠尾靜脈上劃一道小口,、用注射器抽取的操作都可以得到這種鮮紅的。它可以用于監(jiān)測小鼠血液成分的變化,，確認(rèn)小鼠是否患上了糖尿病或者某些治好能夠改變小鼠的血糖等,。比起心臟和眼部取血，實(shí)驗(yàn)用鼠尾尖取血的取血量較小,，但取血之后,，小鼠還能繼續(xù)下一步建模或者實(shí)驗(yàn),，完全沒有性命之憂,。

鼠尾Ⅰ型膠原：選擇適當(dāng)?shù)墓切迯?fù)材料是治好骨缺損的中心環(huán)節(jié)。目前,，臨床上常用的有人工骨移植,、自體骨移植和同種異體骨移植。其中,，人工骨材料多為磷酸三鈣,、半水硫酸鈣等含有鈣和磷的無機(jī)礦物材料[1-2]，由于不含自體骨組織中的有機(jī)大分子Ⅰ型膠原蛋白,，其臨床療效遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于自體骨組織,。但是，自體骨移植和同種異體骨移植均來源于人類自身骨組織,，數(shù)量有限,，難以滿足臨床需要,。因此，研發(fā)與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料,，成為全世界骨組織工程學(xué)者孜孜以求的目標(biāo),。由于天然骨組織是Ⅰ型膠原蛋白和羥基磷灰石鈣生物礦化的產(chǎn)物，在分子結(jié)構(gòu)上,，羥基磷灰石鈣晶體是以Ⅰ型膠原纖維為模板,，呈片狀鑲嵌在膠原纖維分子間隙，沿著膠原纖維的長軸縱向礦化生長[3],。本研究仿生天然骨組織的分子結(jié)構(gòu),，酸解提取鼠尾肌腱的Ⅰ型膠原蛋白，重構(gòu)形成Ⅰ型膠原纖維,，然后將Ⅰ型膠原纖維放置在礦化液中模擬人體內(nèi)骨生物礦化,，通過透射電子顯微鏡(TEM)和電子衍射觀察羥基磷灰石鈣晶體在膠原纖維內(nèi)部的骨生物礦化。鼠尾膠原蛋白用于生產(chǎn)明膠并添加到布丁和棉花糖中,。

鼠尾膠原的生物礦化和TEM觀察：果凍樣Ⅰ型膠原蛋白膠體初始浸泡在礦化液中時呈微白色,；礦化2d后，膠體的顏色逐漸加深至乳白色,；礦化6d后,，隨著羥基磷灰石晶體礦化長入膠原纖維內(nèi)部，膠體顏色加深至純白色,，并在膠體表面沉積了一層薄薄的羥基磷灰石鈣晶體,，予鑷子夾起，其表層羥基磷灰石鈣晶體破碎散落,。TEM表征顯示：礦化2d后,，Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔周期性條紋結(jié)構(gòu)逐漸模糊，羥基磷灰石鈣前體滲入膠原纖維內(nèi)部,，膠原纖維部分礦化,，沿著膠原纖維生長，忖度變深,；礦化6d后,，Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔D-Band結(jié)構(gòu)完全消失，膠原纖維內(nèi)部可以看到黑色羥基磷灰石晶體,，嵌入膠原纖維縱向生長,。當(dāng)鼠尾Ⅰ型膠原纖維完全礦化時，由于整條膠原纖維都被羥基磷灰石鈣晶體占據(jù),，膠原纖維呈現(xiàn)黑色,，選區(qū)衍射斑圖符合羥基磷灰石表征。免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的分泌上皮細(xì)胞特征。北京正規(guī)鼠尾膠原生產(chǎn)廠家

利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶內(nèi),。唐山正規(guī)鼠尾膠原哪里買

實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞中的應(yīng)用,。目的：建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的效果,。結(jié)果：自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞,，細(xì)胞角蛋白18表達(dá)陽性，免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的分泌上皮細(xì)胞特征,。結(jié)論：成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法,，并且制作簡便,成本低廉。唐山正規(guī)鼠尾膠原哪里買