選擇原代細(xì)胞的原因：長期以來,，科學(xué)家多依賴永生化的細(xì)胞系來進(jìn)行各種研究,，但在過去十年，隨著細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展,，細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域發(fā)生了巨大變化,，新型的技術(shù)和培養(yǎng)試劑讓使用原代細(xì)胞作為研究對(duì)象成為可能。相比于細(xì)胞系,，原代細(xì)胞更多保留了體內(nèi)原始組織的生物學(xué)特征,，如生長和衰老，因此通過原代細(xì)胞可建立更好的細(xì)胞疾病模型,。原代細(xì)胞（Primarycells）是指來源組織,，經(jīng)過特定分離方法制備而成的初始細(xì)胞。原代細(xì)胞離體時(shí)間短且不經(jīng)過永生化過程,，其生物學(xué)特性未發(fā)生很大變化,，仍保持原有的遺傳特征,，可更好地反映細(xì)胞在體內(nèi)的生長狀態(tài)，從而獲得與體內(nèi)生理功能更接近的數(shù)據(jù),，很適合用于藥物測(cè)試,、細(xì)胞分化和轉(zhuǎn)化等實(shí)驗(yàn)研究。細(xì)胞適應(yīng)體外環(huán)境后進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)再以較低的密度接種和培養(yǎng),。廣州原代細(xì)胞分離試劑盒廠家供應(yīng)

原代細(xì)胞培養(yǎng)：組織材料若來自血液,、羊水、胸水或腹水的懸液材料,，較簡單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘,，若懸液量大，可適當(dāng)延長離心時(shí)間,，但速度不能太高,，延時(shí)也不能太長，以避免擠壓或機(jī)械損傷細(xì)胞,，離心沉淀用無鈣,、鎂PBS洗兩次，用培養(yǎng)基洗一次后,，調(diào)整適當(dāng)細(xì)胞濃度后再分瓶培養(yǎng),，若選用懸液中某些細(xì)胞，常采用離心后的細(xì)胞分層液,，因?yàn)?，?jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞,。成都原代細(xì)胞分離試劑盒廠家直銷原代細(xì)胞的培養(yǎng)是指直接從機(jī)體取下細(xì)胞,、組織和部位后立即進(jìn)行培養(yǎng)。

原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)步驟為：1）將動(dòng)物組織從機(jī)體中取出并消毒除去存留在組織上的細(xì)菌,、細(xì)菌,、等污染源，這些污染源將會(huì)所需培養(yǎng)的原代細(xì)胞凋亡,、停止生長和繁殖直至死亡,，因此整個(gè)原代細(xì)胞培養(yǎng)過程中較全在無菌狀態(tài)下進(jìn)行。2）將組織塊在選定的蛋白酶溶液中浸泡20-30分鐘,，通常在37C水浴里進(jìn)行,，而蛋白酶的選定取決于部位組織和所需細(xì)胞的類型，比如成骨,、肌肉、心,、肝等就需要用胰蛋白酶才能解而出單個(gè)細(xì)胞,，但是對(duì)于腦組織和乳腺等軟組織，就只能用分解能力較弱的膠原蛋白酶，以免損傷分散出來的單個(gè)細(xì)胞,。3）將分散而成的單個(gè)細(xì)胞置于合適的培養(yǎng)基（含有特殊細(xì)胞生長因子,、添加劑以及血清，或者無血清培養(yǎng)基）中培養(yǎng),，使細(xì)胞得以生存,、生長和繁殖，整個(gè)過程都是在無菌情況下操作

原代細(xì)胞與細(xì)胞系：原代細(xì)胞來源于或是新近死亡的供體,，通過機(jī)械或酶方法解離獲得,，其方案根據(jù)來源物種（例如人，小鼠）和所涉及的組織類型而變化,。通常包含以下步驟：組織切割和切碎,，酶解，反復(fù)洗滌,，研磨和微濾分餾,，較后重新懸浮和接種收集的細(xì)胞群。對(duì)于松散的,、被纖維結(jié)締包圍的組織,，機(jī)械均質(zhì)化可能足以進(jìn)行解離。如果您的組織來源是外周血,，差速離心便可以分離目的細(xì)胞,。由于與細(xì)胞分裂相關(guān)的染色體端粒縮短,，原代細(xì)胞在體外的壽命有限,。大約20到60次分裂后，端粒變得太短而無法承受另一個(gè)循環(huán),，導(dǎo)致細(xì)胞分裂停止,。這種現(xiàn)象被稱為Hayflick極限。對(duì)于具有無限倍增能力的細(xì)胞系,，必須通過細(xì)菌或化學(xué)誘導(dǎo)方法的轉(zhuǎn)化使其永生化,。細(xì)菌對(duì)于細(xì)胞的基因編輯引入有效促進(jìn)增殖的基因（例如SV-40，E6,，E7）,，允許細(xì)胞無限的細(xì)胞分裂1。同樣地,，化學(xué)誘導(dǎo)方法（例如電離輻射,，氯化鎳，苯并芘）改變?cè)?xì)胞的基因組成,，也可實(shí)現(xiàn)無限增殖,。要避免經(jīng)常翻動(dòng)和振動(dòng),，否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會(huì)脫落飄起。

原代細(xì)胞與細(xì)胞系該如何選：原代細(xì)胞生長緩慢,，一般認(rèn)為,，原代細(xì)胞培養(yǎng)的第1代和傳代到第10代以內(nèi)統(tǒng)稱為原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了,，細(xì)胞的生長會(huì)出現(xiàn)停滯,，大部分細(xì)胞衰老死亡。但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過“危機(jī)”而繼續(xù)傳下去,，這些存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代,，這種傳代細(xì)胞叫做細(xì)胞株。當(dāng)細(xì)胞傳至50代以后又會(huì)出現(xiàn)“危機(jī)”,，這時(shí)有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в凶兊奶攸c(diǎn),，從而可能無限制地傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱為細(xì)胞系,。用多聚賴氨酸（或參照說明書）包被培養(yǎng)瓶,。石家莊原代細(xì)胞分離試劑盒

適當(dāng)增大原代培養(yǎng)接種的細(xì)胞密度。廣州原代細(xì)胞分離試劑盒廠家供應(yīng)

原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件：靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)：a.細(xì)胞要通過充分漂洗,，以盡量除去消化液的毒性,。b.細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些，至少為5×108細(xì)胞/L,。c.培養(yǎng)基可用Eagle(MEMCorning10-010-CVR)或DMEM(Corning10-013-CVR)培養(yǎng),。d.胎牛血清濃度為10%-80%。e.應(yīng)在37℃5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。f.在起始的2天中盡量減少振蕩,，以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落，漂浮,。g.待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,，應(yīng)將原代細(xì)胞換液。h.用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),，應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液,。廣州原代細(xì)胞分離試劑盒廠家供應(yīng)