無血清細胞凍存液：細胞凍存及復(fù)蘇是細胞培養(yǎng)技術(shù)中的重要技術(shù),，細胞凍存是細胞長期保存的重要手段,。細胞凍存液，作為細胞凍存時必須使用的一種溶液,，其作用是將需要凍存的細胞懸浮于凍存液,，供給細胞生命代謝所必須的營養(yǎng)物質(zhì)，同時可以防止或減少冷凍冰晶對細胞的損傷作用,。在現(xiàn)有技術(shù)中,，一般使用培養(yǎng)基、血清和二甲亞砜(DMSO)按照一定比例混合的方法來凍存細胞,，DMSO用量為10％,，過低的DMSO濃度會導(dǎo)致凍存效果欠佳,，但高濃度的DMSO有較大毒性，會對細胞體造成傷害,；且傳統(tǒng)凍存液配方中所使用的血清成本高,，增加動物病原污染的可能性。此外,，有研究表明長期與胎牛血清接觸的細胞會對溶液介質(zhì)中的胎牛血清發(fā)生內(nèi)吞,，內(nèi)吞胎牛血清后的間充質(zhì)干細胞有可能發(fā)生某些蛋白表達的變化，應(yīng)用于人體后可發(fā)生異種動物蛋白引起的免疫反應(yīng),，不能直接用于臨床輸注。因此,，利用含有血清的凍存液凍存的細胞會給臨床使用帶來一定的風(fēng)險,。無血清細胞凍存液的優(yōu)勢：含DMSO、糖類,、氨基酸等成分的一款通用型細胞凍存液,。溫州鄭州無血清細胞凍存液

細胞凍存，我們應(yīng)該注意哪些事項：1,、有文獻表明,，細胞以l℃/min的速度冷凍存活率較髙，因為這一速度可以很好的控制細胞內(nèi)部晶體的產(chǎn)生,。我們實際操作不可能將速度控制的這么精確,，目前慣用的就是4℃30min、-20℃1h30min,、-80℃2h后轉(zhuǎn)入液氮中,。2、正常情況下,，經(jīng)過-20℃1h30min這一步后,，凍存管內(nèi)的細胞已經(jīng)處于凝固狀態(tài)，如果此時凍存管內(nèi)還是液體,，很可能是DMSO或冰箱冷凍功能出現(xiàn)了問題,。如若遇到這種情況，不能因為時間到了,，就把把液體狀態(tài)的凍存管放置到液氮中,，可以適當(dāng)延長在-20℃環(huán)境下的冷凍時間30-60分鐘，直至凍存液凝固后再放到液氮中,。天津無血清細胞凍存液平均價格將要凍存的細胞懸液,，進行細胞計數(shù)，計數(shù)后離心,。

細胞凍存液的原理及配制方法：細胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,，實驗證明這樣可以較大限度的保存細胞活力,。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性,，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外,，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷,。復(fù)蘇細胞應(yīng)采用快速融化的方法,，這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷,。

凍存溫度：凍存溫度是指能長期保存細胞的較低溫度,，在此溫度下，細胞生化反應(yīng)極其緩慢甚至停止,，但經(jīng)過長期保存,，在復(fù)蘇后仍能保持正常的結(jié)構(gòu)和功能。不同的細胞和生物體以及使用不同的冷凍保存方法要取得同樣的冷凍保存效果,，冷凍保存溫度可以不同,。但從實際和效益的觀點出發(fā)，液氮溫度-196℃是目前較佳的冷凍保存溫度,。在-196℃時,，細胞的生命活動幾乎完全停止，但復(fù)蘇后細胞的結(jié)構(gòu)和功能完好,。如果冷凍過程得當(dāng),，一般生物樣品在-196℃下均可保存十年以上。應(yīng)用-70℃～-80℃保存細胞,，短期內(nèi)對細胞的活性無明顯影響,，但隨著凍存時間延長，細胞存活率明顯降低,。在冰點到-40℃范圍內(nèi)保存細胞的效果不佳,。無血清細胞凍存液的優(yōu)勢：即用型，無需現(xiàn)配,，直接將細胞懸浮于凍存液中即可,。

無血清細胞凍存液：1.逐滴加入5-7mL的預(yù)熱的培養(yǎng)基到15mL的離心管中，加入的同時輕輕混勻,。2.室溫（15-25°C）以300xg離心5分鐘,。3.吸出培養(yǎng)基，使細胞沉淀完好無損,。使用2mL血清移液管輕輕將細胞沉淀重懸于1mL的培養(yǎng)基中,。小心保持細胞作為聚集體。4.將0.5mL的細胞混合物轉(zhuǎn)移到含有培養(yǎng)基的預(yù)包被的6孔板的培養(yǎng)孔中（例如,，每個冷凍管可以鋪板兩個孔）,。注意：鋪板多少孔可能需要根據(jù)凍存的細胞聚集體數(shù)量進行調(diào)整,。通常在復(fù)蘇后，要比在常規(guī)的傳代鋪板更多的細胞聚集體數(shù)量,。將培養(yǎng)板放入37°C培養(yǎng)箱,。快速前后左右的搖晃培養(yǎng)板數(shù)次,，將細胞聚集體分布均勻,。24小時內(nèi)不要移動培養(yǎng)板。隨著細胞凍存數(shù)量增加,，凍存流程簡化也成為必然趨勢,，因此無血清非程序降溫凍存液應(yīng)運而生。寧波唐山無血清細胞凍存液

無血清細胞凍存液存儲條件：推薦將產(chǎn)品分裝成小管后,，再存放于4℃以下或-20℃冰箱凍存,。溫州鄭州無血清細胞凍存液

無血清凍存液使用方法：1、收集懸浮細胞或貼壁細胞,，離心去除上清培養(yǎng)液。2,、加入適量的細胞凍存液,，重懸細胞，調(diào)節(jié)密度至1-5x10*↑/mL,。3,、將加有凍存液的細胞懸液分裝至凍存管中。4,、將凍存管直接轉(zhuǎn)移至-80C水箱中冷凍保存,。5、儲存條件：2-8C保存,，年有效：-20C保存,，兩年有效。無血清凍存液注意事項：1,、請選擇對數(shù)生長期細胞進行凍存,。2、凍存液加入細胞后,，請盡快放入-80C冰箱凍存,。3、本產(chǎn)品凍存細胞可以在-80°C冰箱保存3年以上,。4,、若需長期凍存細胞，請轉(zhuǎn)移至液氮罐中貯存,。5,、凍存液中含DMSO成分,，為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套,。溫州鄭州無血清細胞凍存液