細胞轉(zhuǎn)染的注意事項：血清A,、DNA-陽離子脂質(zhì)體復合物形成時不能含血清,，因為血清會影響復合物的形成,。B,、一般細胞對無血清培養(yǎng)可以耐受幾個小時沒問題,，轉(zhuǎn)染用的培養(yǎng)液可以含血清也可以不加，但血清一度曾被認為會降低轉(zhuǎn)染效率,，轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中加入血清需要對條件進行優(yōu)化,。C、對于對血清缺乏比較敏感的細胞,，可以使用營養(yǎng)豐富的無血清培養(yǎng)基,，或者在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中使用血清。對血清缺乏比較敏感的貼壁細胞,，建議使用**轉(zhuǎn)染試劑,。有條件的話，可以用無血清培養(yǎng)基代替PBS洗細胞兩遍,，注意洗的時候要輕,，靠邊緣緩緩加入液體，然后不要吹吸細胞而是轉(zhuǎn)動培養(yǎng)板讓液體滾動在細胞表面,。如果洗的太厲害,，細胞又損失一部分，加了脂質(zhì)體后,，細胞受影響就更大了,，死亡細胞會增多一般的瞬時轉(zhuǎn)染 方法多采用脂質(zhì)體法。廣州細胞高效轉(zhuǎn)染試劑銷售廠家

細胞轉(zhuǎn)染的注意事項：物品(PS)物品,，比如青霉素和鏈霉素,，是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物,。這些物品一般對于真核細胞無毒，但陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細胞的通透性,，使物品可以進入細胞,。這降低了細胞的活性，導致轉(zhuǎn)染效率低,。所以,，在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中不能使用物品，甚至在準備轉(zhuǎn)染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品,。這樣,，在轉(zhuǎn)染前也不必潤洗細胞。對于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,，不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素,，ICIN選擇性物品的競爭性克制劑。另外,，為了保證無血清培養(yǎng)基中細胞的健康生長,，使用比含血清培養(yǎng)基更少的物品量。金華細胞高效轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品介紹果觀察到轉(zhuǎn)染效率降低,，可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細胞以恢復較佳結(jié)果,。

DNA細胞轉(zhuǎn)染步驟：1.提前現(xiàn)在細胞鋪板提前現(xiàn)在將細胞種植在24孔板中，以轉(zhuǎn)染時細胞密度在60％左右為宜,。2.轉(zhuǎn)染過程⑴將0.8μg的DNA用25μl無血清稀釋液稀釋,，充分混勻，制成DNA稀釋液,。注意：無血清稀釋液建議采用OPTI-MEM,、無血清DMEM或1640。⑵將2μlEntransterTM-H4000用25μl無血清稀釋液體稀釋,，充分混勻,，制成EntransterTM-H4000稀釋液。室溫靜置5分鐘,。⑶將EntransterTM-H4000稀釋液分別加入到DNA稀釋液中,，充分混勻（可用振蕩器振蕩或用加樣器吹吸10次以上），室溫靜置15分鐘,。轉(zhuǎn)染復合物制備完成,。⑷將轉(zhuǎn)染復合物加入到含細胞和完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器上，輕柔混勻,。注意：①對本試劑,，采用含血清的全培養(yǎng)基有助于提升轉(zhuǎn)染效率。②完全培養(yǎng)基可加物品,。

細胞轉(zhuǎn)染實驗注意事項：1.如為貼壁生長細胞,，一般要求在轉(zhuǎn)染前一日,，必須應用胰酶處理成單細胞懸液，重新接種于培養(yǎng)皿或瓶,，轉(zhuǎn)染當日的細胞密度以70-90%（貼壁細胞）或2×106-4×106細胞/ml（懸浮細胞）為宜,，較好在轉(zhuǎn)染前4h換一次新鮮培養(yǎng)液。2.用于轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒DNA必須無蛋白質(zhì),，無RNA和其他化學物質(zhì)的污染，OD260/280比值應在1.8以上,。3.培養(yǎng)基中的血清在開始準備DNA和陽離子脂質(zhì)體試劑稀釋液時要使用無血清的培養(yǎng)基,，因為血清會影響復合物的形成。其實,，只要在DNA-陽離子脂質(zhì)體復合物形成時不含血清,，在轉(zhuǎn)染過程中是可以使用血清的。細胞密度以及轉(zhuǎn)染的時間長短和培養(yǎng)基中血清的含量都是影響轉(zhuǎn)染效率的重要因素,。

瞬時轉(zhuǎn)染和轉(zhuǎn)染效率的監(jiān)測：基因的瞬時表達在24-72小時內(nèi)就結(jié)束了,。這種快速的瞬時表達非常適用于驗證質(zhì)粒表達和監(jiān)測轉(zhuǎn)染步驟的效率?？梢允褂脠蟾婊騺泶_定優(yōu)化條件,，其表達蛋白易檢測，在目的細胞中不含此蛋白或水平很低,。常用的報告基因包括氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶（CAT）,，綠色熒光蛋白（GFP），熒光素酶（Lux或Luc）以及b-半乳糖苷酶（b-gal）,?？梢允褂煤唵蔚姆峭凰胤椒z測b-gal的表達以測定轉(zhuǎn)染效率和活性。pCMVSPORT-bgal質(zhì)粒包含CMV啟動子調(diào)控下的LacZ基因,，轉(zhuǎn)染入真核細胞內(nèi)后可以直接表達bgal,。結(jié)合簡單的檢測步驟，可以做為監(jiān)測轉(zhuǎn)染條件的一種方便靈敏的方法,。因為DNA攝入效率和表達水平在不同實驗中差異較大,，實驗必須很小心。細胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪里買

由于脂質(zhì)體對細胞有一定的毒性,，所以轉(zhuǎn)染時間一般不超過24小時,。廣州細胞高效轉(zhuǎn)染試劑銷售廠家

細胞轉(zhuǎn)染：(1)轉(zhuǎn)染試劑的準備A.將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘,，溶解脂狀物,。B.震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存，使用前還需震蕩,，,。(2)選擇合適的混合比例(1：1-1：2/脂質(zhì)體體積：DNA質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細胞,。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA,，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑,，再次震蕩。(3)將混合液在室溫放置10—15分鐘,。(4)吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基,，用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次。(5)加入混合液,，將細胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時,。(6)到時后，根據(jù)細胞種類決定是否移除混合液,，之后加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24-48小時,。廣州細胞高效轉(zhuǎn)染試劑銷售廠家