鼠尾Ⅰ型膠原：材料與方法：1.主要材料、試劑和儀器鼠尾,、鹽酸、等滲氯化鈉溶液,、鈣液,、磷液均購自上海晶純生化科技股份有限公司。日立高新TEMHT770(日本日立公司),；多功能粉末X射線衍射儀,。2.酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白取大鼠尾巴洗凈，用75%的乙醇浸泡5min,。將尾巴剪開,，去掉皮毛，并剪成小段,，抽出銀色的肌腱,。將肌鍵剪斷置于平皿中，用無菌等滲氯化鈉溶液浸泡,。吸去等滲氯化鈉溶液,，將肌鍵置于平皿中剪碎,，按每克肌鍵50mL的比例加入0.1%的醋酸溶液。搖晃,，將肌鍵分散于醋酸溶液中,，4℃放置一周，然后以2186×g離心20min,。在醋酸溶液的酸解下,，肌腱水解成膠凍狀凝膠，置于冰箱4℃保存,。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便,，成本低廉,。4°C沉淀10小時，去除上清液,，絮狀溶液高速冷凍離心處理,，收集沉淀。廈門唐山鼠尾膠原

鼠尾膠原備用膠凝程序：1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白I,、無菌10×PBS,、無菌蒸餾水、無菌1MNaOH,。2）確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積,。3）在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I。4）在無菌條件下執(zhí)行以下步驟,。4.1加入10×PBS（終體積/10）mL4.2計算要使用的膠原蛋白I的體積（不要添加到管中直到步驟4.6為止）終體積x終膠原蛋白I濃度（mg/mL）,。4.3向10×PBS溶液中加入（要加入的膠原體積×0.023）mL的無菌冰冷1MNaOH。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水：添加蒸餾水體積=V（終）—V（膠原蛋白）—V(10×PBS）—V（1MNaOH）4.5混合管中的物質(zhì)并放入冰中,。4.6加入膠原蛋白I并計算體積,，混勻，冰上備用,。5）膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時,。6）使用時，無菌條件下將溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min,。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便,，成本低廉,。寧波鼠尾膠原哪家好使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。

鼠尾膠原：含細(xì)胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞,，并放置于冰浴中,。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻,。再加入23μL10×PBS或10×培養(yǎng)液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時需要測定pH值）,。加入760μL的細(xì)胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后,，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。本品在室溫下pH中性時可迅速成膠,，在操作過程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存,，切勿凍存,，有效期一年。

一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,，采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝,，保持恒低溫?zé)o菌的環(huán)境，利用同樣濃度的鹽溶液進(jìn)行兩次鹽析與離心,，簡化了提純步驟,。所用酸為低濃度酸溶液，并采用檸檬酸替代醋酸進(jìn)行提純,。從提取原料到樣品生成過程中,，進(jìn)行多次真空冷凍干燥，并經(jīng)進(jìn)一步處理獲得含水率在3％以下的膠原蛋白微粉,；較后由滅菌,、無菌包裝，成品膠原蛋白粉末的純度在98％以上,。本發(fā)明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性,，提高了產(chǎn)率和生物相容性,，降低了成本,，適用于生物醫(yī)用材料。鼠尾膠原蛋白 型在濃度1mg/ml 以上,， pH 左右時可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,。

鼠尾膠原在心肌細(xì)胞氧化損傷中的保護(hù)作用：兩組培養(yǎng)皿中，隨著過氧化氫濃度的增高,，均可見細(xì)胞凋亡狀態(tài)明顯加重,，細(xì)胞存活率及細(xì)胞內(nèi)過氧化氫活力明顯下降,，細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞內(nèi)丙二醛水平明顯增高，Bcl-2/Bax比值明顯降低,，呈劑量依賴性,。而在相同濃度過氧化氫誘導(dǎo)下，與對照組相比,，實驗組細(xì)胞凋亡狀態(tài)明顯減弱,，細(xì)胞存活率、超氧化物歧化酶活力及Bcl-2/Bax比值增高,，細(xì)胞凋亡率和丙二醛水平明顯減低,。表明鼠尾膠原對過氧化氫所致的心肌細(xì)胞氧化損傷具有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與提高超氧化物歧化酶活力,，減少丙二醛產(chǎn)生及提高Bcl-2的表達(dá)有關(guān),。鼠尾膠原醋酸溶解：不要晃動或攪拌。寧波鼠尾膠原哪家好

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鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.將黏稠的膠體溶液進(jìn)行高速冷凍離心處理,，收集上清液；在冰水浴中,，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出，4°C沉淀10小時,，去除上清液,，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物,，成透明澄清黏稠溶液,；在冰水浴中，調(diào)節(jié)pH=6.5,，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出，4°C沉淀10小時,，去除上清液,，去除上清液，絮狀溶液高速冷凍離心處理,，收集沉淀,。廈門唐山鼠尾膠原

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