含細(xì)胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞,，并放置于冰浴中,。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）,，立即混勻,。再加入23μL10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時需要測定pH值）。加入760μL的細(xì)胞懸浮液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。本品在室溫下pH中性時可迅速成膠，在操作過程中要盡量保持低溫,。保存條件4℃保存,，切勿凍存，有效期一年,。免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的分泌上皮細(xì)胞特征,。昆明鼠尾膠原

膠原蛋白的適用征狀：1、由于工作勞累,，睡眠不足形成的皮膚晦暗無光,、發(fā)黃、皮膚彈性差等皮膚衰老的不良癥狀,。2,、由于年齡、太陽輻射因素引起的皮膚松弛,、下垂,、皺紋、干燥等皮膚衰老現(xiàn)象,。3,、由于體內(nèi)異常黑色素分泌旺盛，大量沉積皮膚表面,，肌膚不能及時代謝出異常黑色素,，形成各種色斑。4,、由于長期戶外活動及皮膚保養(yǎng)不當(dāng)使膚質(zhì)受到損傷,，過早出現(xiàn)細(xì)紋,皮膚干燥,、脫皮、,、毛孔粗大等不良癥狀,。5、由于內(nèi)分泌功能紊亂,，皮膚膚質(zhì)差,、皮膚發(fā)油、發(fā)暗,，易長青春痘留下的色印,、色素沉著等。6,、由于生活無規(guī)律,吸煙等因素,造成的黑眼圈,眼袋等問題,。7.長期電腦旁工作，電腦輻射造成脫發(fā),，內(nèi)分泌紊亂問題,。深圳鼠尾膠原廠家推薦鼠尾膠原醋酸溶解：制備成濃度為0.1%的溶液。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi),。如果配制中使用的是10PBS，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡,。B．含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻,。再加入23ul10PBS10培養(yǎng)液,，混勻(混勻后pH左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時需要用pH試紙測試),。加入760ul的細(xì)胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后,，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。注意事項型在室溫下pH中性時可迅速成膠，在操作過程中要盡量保持低溫,。鼠尾肌腱膠原蛋白I（rattailtendoncollagentypeI）根據(jù)Birkedal-Hansen方法,，經(jīng)過醋酸（HAc）抽提、氯化鈉沉淀,、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備所得,。

鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法，其特征在于，包括以下步驟:(1)將無組織纖維,、脂肪和多糖殘留的鼠尾腱,，真空冷凍干燥備用；(2)凍干鼠尾腱經(jīng)低溫凍干粉碎至200?400目,；(3)在冰水浴中將粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶脹,，鼠尾腱與醋酸的固液比為I克:10mL?I克:120mL，期間不斷攪拌,，防止凍結(jié)成塊,，得到膠原溶脹液；(4)稱取胃蛋白酶加入到膠原溶脹液中,，鼠尾腱與蛋白酶質(zhì)量比為50:I?100:1,，在4°C，48?74小時酶解,，期間間歇性攪拌,。整個操作請在無菌環(huán)境下無菌操作，避免污染以影響細(xì)胞生長,。

詳細(xì)步驟如下：1.75％酒精浸泡大鼠尾巴30min,；2.將尾巴剪開、去掉皮毛,，并剪成小段（3cm左右）,，抽出銀色的尾鍵；3.把剪碎的尾鍵置于150ml,，0.1％消過毒的醋酸中,，4℃放置，并不時振蕩,；4.48h后取上清,，4000轉(zhuǎn)離心30min后，取上清,；5.分裝上清（鼠尾膠）4度（或-20度）保存,。有時可繼續(xù)向4。中沉淀中加入10－20ml醋酸,，重復(fù)以上步驟,，以制備更多的鼠尾膠。在使用時,，先將冰存的膠原液在室溫下解凍,，再按以下步驟包被培養(yǎng)器皿：1）用吸管吸取膠原液，在無菌的培養(yǎng)器皿的生長面內(nèi)壁上均勻地涂上薄薄的一層膠原溶液,。2）若包被的是培養(yǎng)瓶,，可向培養(yǎng)瓶通入氨氣或用浸有氨水的棉球封口片刻,。讓氨氣充入瓶內(nèi)后，即可旋緊瓶蓋或塞緊瓶塞,。若為培養(yǎng)皿或板的話,，可將培養(yǎng)皿或板放在已消毒的飯盒內(nèi)，將浸有氨水的棉球放入飯盒內(nèi),，蓋緊飯盒蓋,，四周用封口膠封死。堿法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰,、氫氧化鈉,、碳酸鈉等。成都正規(guī)鼠尾膠原價格

細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被以包被濃度為2μg/cm2為例,。昆明鼠尾膠原

一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,，采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝，保持恒低溫?zé)o菌的環(huán)境,，利用同樣濃度的鹽溶液進(jìn)行兩次鹽析與離心,，簡化了提純步驟。所用酸為低濃度酸溶液,，并采用檸檬酸替代醋酸進(jìn)行提純,。從提取原料到樣品生成過程中，進(jìn)行多次真空冷凍干燥,，并經(jīng)進(jìn)一步處理獲得含水率在3％以下的膠原蛋白微粉,；較后由滅菌、無菌包裝,，成品膠原蛋白粉末的純度在98％以上,。本發(fā)明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性，提高了產(chǎn)率和生物相容性,，降低了成本,，適用于生物醫(yī)用材料。昆明鼠尾膠原

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