鼠尾Ⅰ型膠原：選擇適當(dāng)?shù)墓切迯?fù)材料是治好骨缺損的中心環(huán)節(jié)。目前,，臨床上常用的有人工骨移植,、自體骨移植和同種異體骨移植。其中,，人工骨材料多為磷酸三鈣,、半水硫酸鈣等含有鈣和磷的無(wú)機(jī)礦物材料[1-2]，由于不含自體骨組織中的有機(jī)大分子Ⅰ型膠原蛋白,，其臨床療效遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于自體骨組織,。但是，自體骨移植和同種異體骨移植均來(lái)源于人類自身骨組織,，數(shù)量有限,，難以滿足臨床需要。因此,，研發(fā)與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料,，成為全世界骨組織工程學(xué)者孜孜以求的目標(biāo)。由于天然骨組織是Ⅰ型膠原蛋白和羥基磷灰石鈣生物礦化的產(chǎn)物,，在分子結(jié)構(gòu)上,，羥基磷灰石鈣晶體是以Ⅰ型膠原纖維為模板，呈片狀鑲嵌在膠原纖維分子間隙,，沿著膠原纖維的長(zhǎng)軸縱向礦化生長(zhǎng),。本研究仿生天然骨組織的分子結(jié)構(gòu)，酸解提取鼠尾肌腱的Ⅰ型膠原蛋白,，重構(gòu)形成Ⅰ型膠原纖維,，然后將Ⅰ型膠原纖維放置在礦化液中模擬人體內(nèi)骨生物礦化，通過(guò)透射電子顯微鏡(TEM)和電子衍射觀察羥基磷灰石鈣晶體在膠原纖維內(nèi)部的骨生物礦化,。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄，并且制作簡(jiǎn)便,，成本低廉,。布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄。廣州正規(guī)鼠尾膠原廠家

鼠尾Ⅰ型膠原：材料與方法：1.主要材料,、試劑和儀器鼠尾,、鹽酸、等滲氯化鈉溶液、鈣液,、磷液均購(gòu)自上海晶純生化科技股份有限公司,。日立高新TEMHT770(日本日立公司)；多功能粉末X射線衍射儀,。2.酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白取大鼠尾巴洗凈,，用75%的乙醇浸泡5min,。將尾巴剪開(kāi),，去掉皮毛，并剪成小段,，抽出銀色的肌腱,。將肌鍵剪斷置于平皿中，用無(wú)菌等滲氯化鈉溶液浸泡,。吸去等滲氯化鈉溶液,，將肌鍵置于平皿中剪碎，按每克肌鍵50mL的比例加入0.1%的醋酸溶液,。搖晃,，將肌鍵分散于醋酸溶液中，4℃放置一周,，然后以2186×g離心20min,。在醋酸溶液的酸解下，肌腱水解成膠凍狀凝膠,，置于冰箱4℃保存,。無(wú)錫鼠尾膠原服務(wù)電話制備鼠尾膠原：將尾腱剪斷置于平皿中，生理鹽水浸泡,。

一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法：隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展,，各種醫(yī)用耗材的更新?lián)Q代也是日新月異。止血材料是常見(jiàn)的醫(yī)療器械產(chǎn)品,。但是現(xiàn)今市面上的止血材料不光存在著容易引起傷口傳染的缺點(diǎn),；同時(shí)還存在著容易與傷口粘附不易去除，導(dǎo)致傷口潰爛,，或者因?yàn)檎掣綄?dǎo)致傳染,；再次就是止血材料多是通過(guò)吸收血液及添加凝血酶等外在因素止血，很少有止血材料是使用能夠自身具有止血性質(zhì)的材料來(lái)生產(chǎn)的?，F(xiàn)今市面上的可吸收止血材料有氧化纖維素、α-氰基丙烯酸酯類組織膠,、醫(yī)用止血明膠等,，但是都有各自的缺點(diǎn)。如氧化纖維素可引起組織周圍PH值升高,；α-氰基丙烯酸酯類組織膠降解過(guò)程中釋放出氰和甲醛等有毒物質(zhì)；醫(yī)用止血明膠黏附性較差,，易脫落，因其吸收血液后膨脹可能壓迫傷口周圍組織等,。

酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原及相對(duì)分子質(zhì)量和濃度檢測(cè)鼠尾肌腱在醋酸溶液的酸解作用下,，其腱性組織被水解成膠凍狀溶液，從而分解成鼠尾Ⅰ型膠原蛋白分子,。抽取鼠尾Ⅰ型膠原150μL滴在薄膜上,，可形成液滴狀膠原蛋白凝膠(,，其生物力學(xué)強(qiáng)度極差,，一碰即散。將鼠尾膠原蛋白進(jìn)行SDS-PAGE,，結(jié)果顯示：Ⅰ型膠原蛋白原液在相對(duì)分子質(zhì)量130000附近有明顯條帶,，另一條帶的相對(duì)分子質(zhì)量大于170000(圖2),。膠原蛋白濃度為1.8mg/mL,。吸取礦化液倒入小培養(yǎng)皿中，將鼠尾Ⅰ型膠原纖維浸泡在礦化液中,。礦化2、6d后,，分別將礦化后的Ⅰ型膠原纖維進(jìn)行TEM和電子衍射觀察,。在操作過(guò)程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存,，切勿凍存,，有效期一年。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng)：通過(guò)醋酸抽提,、氯化鈉沉淀,、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿,，培養(yǎng)一些在普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞,。也可用于制備三維膠，模擬真實(shí)的生長(zhǎng)環(huán)境,，使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長(zhǎng),。1，在使用鼠膠原蛋白型包被的細(xì)胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細(xì)胞的貼壁和生長(zhǎng)。1mg/ml濃度以上,，pH左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度的三維膠,，檢查到NIH-3T3細(xì)胞在三維膠內(nèi)正常生長(zhǎng)、PC-12細(xì)胞在三維膠表面正常生長(zhǎng),。使用方法：1,、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度：1-5ug/cm0.012mg/ml,。按以下表格體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中,。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,，并且制作簡(jiǎn)便,，成本低廉。鼠尾膠原,，是一種天然培養(yǎng)基,，它具有促進(jìn)體外培養(yǎng)細(xì)胞(特別是上皮細(xì)胞)貼壁的作用。無(wú)錫鼠尾膠原廠家推薦

將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi),。廣州正規(guī)鼠尾膠原廠家

鼠尾膠原在心肌細(xì)胞氧化損傷中的保護(hù)作用：原蛋白具有抗氧化作用,但既往在實(shí)驗(yàn)室主要將鼠尾膠原用于促進(jìn)細(xì)胞貼壁和支架構(gòu)建,對(duì)于其抗氧化作用目前尚無(wú)相關(guān)研究。目的:探討鼠尾膠原對(duì)過(guò)氧化氫導(dǎo)致離體心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用,。方法:將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿(實(shí)驗(yàn)組)和普通培養(yǎng)皿(對(duì)照組)中,并且均用0,10,100μmol/LH2O2誘導(dǎo),。24h后,以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細(xì)胞的形態(tài),應(yīng)用MTT比色法檢測(cè)心肌細(xì)胞存活率,TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡形態(tài),流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率,黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法檢測(cè)丙二醛水平,Western-Blot檢測(cè)凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表達(dá),。廣州正規(guī)鼠尾膠原廠家

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