鼠尾膠原醋酸溶解：1．將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解,。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中,，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿,。氯仿的量約為膠原溶液的10%,。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜,。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液,。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導(dǎo)致丟失蛋白,。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液,。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時或者2-8度過夜。5．從包被表面除去多余的液體,。過夜干燥,。如果膠原溶液不是無菌的，這時候可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒,。在接種細胞前用無菌的水漂洗,。鼠尾膠原、多聚賴氨酸和明膠作為基質(zhì)包被培養(yǎng)器皿,。太原鼠尾膠原服務(wù)電話

鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基,，它具有促進體外培養(yǎng)細胞（特別是上皮細胞）貼壁的作用，同時它也是一種天然的黏附劑,，當我們需要在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)放置小玻片,，制備細胞爬片時，可在瓶底涂一層膠原,，再放上小玻片,，自然干燥后小玻片就固定于培養(yǎng)瓶之中。通過本實驗可掌握鼠尾膠原的制備方法,，以及如何切割小玻片,，并利用鼠尾膠原將其固定于培養(yǎng)瓶內(nèi)。實驗設(shè)備及材料：大鼠尾巴,、剪刀,、鑷子、止血鉗,、彎頭吸管,、平皿、三角燒瓶,、燒杯,、量筒、天平,、生理鹽水,、75%酒精、0.1%醋酸溶液,、蓋玻片,、培養(yǎng)瓶、鉆石筆,、鼠尾膠原,。實驗內(nèi)容：1、制備鼠尾膠原,。2,、切割小玻片。3、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶內(nèi),。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便,，成本低廉,。無錫鼠尾膠原哪里買它是研究成纖維細胞與細胞外基質(zhì)之間以及細胞之間相互作用的良好模型。

三維膠原的制備：鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,，pH7左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml,。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中，在成膠過程中需要加入0.06X體積的0.1mol/LNaOH來中和,。需要的溶液(均需要無菌,、預(yù)冷):10xPBS(可含10mg/L的酚紅用于pH指示)或10x培養(yǎng)液,0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水A．不含細胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,，加入690ulH2O,。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）,，立即混勻,。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說明：不含細胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,，加入690ulH2O,。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）,，立即混勻,。再加入100ul10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時需要用pH試紙測試)。將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi),。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入適當體積的細胞培養(yǎng)液預(yù)平衡,。鼠尾Ⅰ型膠原：選擇適當?shù)墓切迯?fù)材料是治好骨缺損的中心環(huán)節(jié),。

鼠尾膠原：鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基和一種天然的黏附劑。實驗設(shè)備及材料：大鼠尾巴,、剪刀,、鑷子、止血鉗,、彎頭吸管、平皿、三角燒瓶,、燒杯,、量筒、天平,、生理鹽水,、75%酒精、0.1%醋酸溶液,、蓋玻片,、培養(yǎng)瓶、鉆石筆,、鼠尾膠原,。實驗內(nèi)容：1、制備鼠尾膠原（兩個同學一組操作）,。2,、切割小玻片。3,、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶內(nèi),。制備鼠尾膠原：1、取大鼠尾巴洗凈,，75%酒精浸泡5分鐘,；2、手持尾巴,，用止血鉗夾住鼠尾的,，折斷尾骨后拉出尾腱；3,、將尾腱剪斷置于平皿中,，生理鹽水浸泡；4,、重復(fù)步驟2,、3，直至尾腱量夠用,；5,、吸去生理鹽水，將尾腱稱重（0.5-1克）,；6,、將尾腱置于平皿內(nèi)剪碎，轉(zhuǎn)移至三角燒瓶中,；7,、按每克尾腱50ml的比例,，加入0.1%醋酸溶液；8,、搖晃,，使尾腱分散于醋酸溶液中，4℃放置一星期,；9,、離心，4000轉(zhuǎn)/分,，10-15分鐘,；10、吸取上清,，分裝成小瓶,，4℃保存。鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立,。太原鼠尾膠原服務(wù)電話

一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,，采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝。太原鼠尾膠原服務(wù)電話

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：通過醋酸抽提,、氯化鈉沉淀,、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。鼠尾膠原蛋白可用于包被細胞培養(yǎng)器皿,，培養(yǎng)一些在普通細胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細胞,。也可用于制備三維膠，模擬真實的生長環(huán)境,，使細胞在三維環(huán)境中生長,。1，在使用鼠膠原蛋白型包被的細胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細胞的貼壁和生長,。1mg/ml濃度以上,，pH左右時可形成具有一定強度的三維膠，檢查到NIH-3T3細胞在三維膠內(nèi)正常生長,、PC-12細胞在三維膠表面正常生長,。使用方法：1、細胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度：1-5ug/cm0.012mg/ml,。按以下表格體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中,。太原鼠尾膠原服務(wù)電話

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