原代細(xì)胞的培養(yǎng)是指直接從機(jī)體取下細(xì)胞,、組織和部位后立即進(jìn)行培養(yǎng),。因此,，較為嚴(yán)格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng)，此時的細(xì)胞保持原有細(xì)胞的基本性質(zhì),，如果是正常細(xì)胞,，仍然保留二倍體數(shù),。原代細(xì)胞在培養(yǎng)的過程中,，也可能產(chǎn)生基因突變而形成無限傳代的細(xì)胞株，傳代次數(shù)越多,，就越有可能變成細(xì)胞株（基因缺陷型）,，因此科學(xué)界也通常把靠前代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。較常用的原代細(xì)胞的培養(yǎng)有組織塊培養(yǎng)和分散細(xì)胞培養(yǎng),。組織塊培養(yǎng)是將剪碎的組織塊直接移植在培養(yǎng)瓶壁上,，加入培養(yǎng)基后進(jìn)行培養(yǎng)。如果培養(yǎng)液的量在5ml以下,，可以采用旋轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng),。成都正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒產(chǎn)品介紹

膠原酶的配制：建議看相關(guān)的文獻(xiàn)進(jìn)行膠原酶的配制。小編常用的是DMEM進(jìn)行配制,，配制好的膠原酶消化液放置在37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱（注意現(xiàn)用現(xiàn)配）,。胰酶（酶聯(lián)合法獲取原代細(xì)胞中會加入胰酶，相關(guān)文章也蠻多的）膠原酶消化時間：根據(jù)組織特性,，消化時間會有差異,。以小鼠腎細(xì)胞為例，加入膠原酶Ⅰ進(jìn)行消化后,，放入37℃培養(yǎng)箱中消化45min~1h左右,，期間每10min中震蕩一次，知道組織塊幾乎完全消失為止（若是組織塊剪得非常細(xì)小,，時間可以短一些,，30min左右即可）。原代細(xì)胞的獲?。好赶ǎ核迷噭耗z原酶和胰酶,。成都正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒產(chǎn)品介紹取樣后培養(yǎng)時間較少需要一周以上的時間，期間可換液或者傳代,。

原代細(xì)胞的培養(yǎng)：原代細(xì)胞的培養(yǎng)是指直接從機(jī)體取下細(xì)胞,、組織和部位后立即進(jìn)行培養(yǎng)。因此,，較為嚴(yán)格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng),，此時的細(xì)胞保持原有細(xì)胞的基本性質(zhì)，如果是正常細(xì)胞,，仍然保留二倍體數(shù),。但實(shí)際上,，通常把靠前代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。較常用的原代細(xì)胞的培養(yǎng)有組織塊培養(yǎng)和分散細(xì)胞培養(yǎng),。組織塊培養(yǎng)是將剪碎的組織塊直接移植在培養(yǎng)瓶壁上,，加入培養(yǎng)基后進(jìn)行培養(yǎng)。分散細(xì)胞培養(yǎng)大致步驟為：將動物組織從機(jī)體中取出離散成單個細(xì)胞(常用胰蛋白酶),，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞得以生存、生長和繁殖(注意整個過程無菌),。

原代細(xì)胞的獲?。?.培養(yǎng)時間無論是酶消化法還是組織塊法，取樣后培養(yǎng)時間較少需要一周以上的時間,，期間可換液或者傳代,。2.換液時間無論酶消化法還是組織塊法，在培養(yǎng)期間需要隨時關(guān)注細(xì)胞的生長狀況,，需觀察其是否貼壁,，是否污染，組織塊法要觀察是否有細(xì)胞遷移出來,。正常情況下48~72h可換液一次,。3.細(xì)胞狀態(tài)判斷正常貼壁細(xì)胞在培養(yǎng)幾天后，會逐漸貼滿整個瓶底或者皿底,，有的呈纖維狀,，有的呈多邊形。下圖均為比較健康的原代細(xì)胞圖（左：小鼠成纖維細(xì)胞,；右：雞胚成纖維細(xì)胞,；下：人成纖維細(xì)胞）。大多數(shù)組織可以制備原代細(xì)胞,，但生長的快慢及難易程度不一,。

原代細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)：由于每種原代細(xì)胞培養(yǎng)的條件迥異，而且每個實(shí)驗(yàn)室都摸索出自己的培養(yǎng)條件,，而對于一個特定的組織塊,，所用培養(yǎng)條件不一樣，得出的所需細(xì)胞族群就不一樣,，因?yàn)槊糠N組織塊都含有不同種類的細(xì)胞群,，而每一種細(xì)胞群在所選定的培養(yǎng)條件下（比如所選蛋白分解酶的種類和條件，細(xì)胞因子的種類,，基礎(chǔ)培養(yǎng)基的種類或者是培養(yǎng)時間長短）都會得出不同的結(jié)果,。由于各實(shí)驗(yàn)室采取不同的培養(yǎng)條件，即使是同一塊心組織就有可能造成A實(shí)驗(yàn)室獲得30%的心肌細(xì)胞，70%其他種類細(xì)胞,，而B實(shí)驗(yàn)室卻能獲得70%所需心肌細(xì)胞,，30%為成纖維、脂肪等種類,。這樣的話,，即使是做同一項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)，就有可能得出相反的科學(xué)結(jié)論,。因此,，早在2004年，美國科學(xué)界就質(zhì)疑之前以原代細(xì)胞為主的科研文章,，并同時提出原代細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)的概念,。將凍存管立即從水浴中拿出,，擦干,，轉(zhuǎn)入無菌環(huán)境。無錫正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒推薦廠家

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原代細(xì)胞體外培養(yǎng)現(xiàn)狀：原代細(xì)胞自然生長有兩種方式，錨定依賴或非錨定依賴,，這主要取決于它們在體內(nèi)的組織來源：外周血（非錨定依賴）或固體組織部位（錨定依賴）,。原代細(xì)胞一旦分離后，24-48h內(nèi)需要進(jìn)行貼壁或起始,，開始培養(yǎng),。廣義地說，所有的哺乳動物細(xì)胞,，無論其類型或來源,，都需要在與人類生理?xiàng)l件非常相似的條件下生長。此外,，它們還需要一個pH可調(diào)節(jié)的生長環(huán)境,，并且培養(yǎng)基中需包含細(xì)胞類型特定的營養(yǎng)因子、生長因子,、葡萄糖和/或物品,。為了確定一種特定細(xì)胞類型在低至無血清培養(yǎng)基中正常生長和功能所需的較低條件，相關(guān)研究工作已經(jīng)揭示了生長培養(yǎng)基必須包含的基本成分：胰島素,、轉(zhuǎn)鐵蛋白,、葡萄糖和各種鹽、維生素和氨基酸1,。然而,，除此之外培養(yǎng)基也可以含有組織和細(xì)胞特異性細(xì)胞因子和增殖、生存所需的生長因子。例如,，原代內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞都需要添加L-谷氨酰胺和成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）,，但是，應(yīng)該添加額外的組織特異性因子,，以防止成纖維細(xì)胞的生長成都正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒產(chǎn)品介紹