細(xì)胞凍存秘籍：細(xì)胞凍存對于大多數(shù)動物細(xì)胞，通常每分鐘下降-1至-3℃,?？刂评鋮s過程的較好方法是使用程序降溫系統(tǒng)。如果沒有程序降溫系統(tǒng)，可以使用程序降溫盒,，然后將其置于-70℃至-90℃冰箱中過夜,。雖然這種方法適用于許多細(xì)胞系，但不能提供可控的,，均勻的或可重復(fù)的冷卻,，不建議用于珍貴細(xì)胞。無論使用哪種冷卻方法,，重要的是快速高效地將其傳輸?shù)捷^終存儲位置,。如果轉(zhuǎn)移不能立即完成，可以將小瓶置于干冰上一段時間,。這樣可以避免在轉(zhuǎn)移過程中發(fā)生溫度升高而損害細(xì)胞,。在這個轉(zhuǎn)移過程中溫度升高是解凍后影響細(xì)胞活力的主要原因。無血清快速細(xì)胞凍存液：含動物來源的血清成分,，能夠有效提高細(xì)胞凍存活率和復(fù)蘇活力,。蘇州正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液報(bào)價

無血清細(xì)胞凍存液與含血清細(xì)胞凍存液對比：細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中細(xì)胞進(jìn)行保種并長期保存的常用方法，其中細(xì)胞凍存液,，作為細(xì)胞凍存時必須使用的一種溶液,，不光光是說只是用來進(jìn)行細(xì)胞的保存，在細(xì)胞的購買,、寄贈,、交換和運(yùn)送過程中也起著關(guān)鍵作用，因此選擇一款好的細(xì)胞凍存液就尤為重要,。如果不加任何條件直接凍存細(xì)胞,，細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會形成冰晶，能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機(jī)械損傷,、電解質(zhì)升高,、滲透壓改變、脫水,、pH值改變,、蛋白變性等，從而引起細(xì)胞死亡,。而細(xì)胞凍存液就相當(dāng)于細(xì)胞的保護(hù)劑,，在凍存細(xì)胞時將細(xì)胞懸浮于凍存液中，可使冰點(diǎn)降低,，提高細(xì)胞膜對水的通透性,，在緩慢的凍結(jié)條件下，能使細(xì)胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細(xì)胞,，可以防止或減少冷凍冰晶對細(xì)胞的損傷作用,。這樣就使細(xì)胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來,，在需要時直接復(fù)蘇就可恢復(fù)細(xì)胞活性。金華南昌無血清細(xì)胞凍存液快速凍存即不需要經(jīng)過梯度降溫,，直接將細(xì)胞放入-80 ℃冰箱24h,。

細(xì)胞凍存，我們應(yīng)該注意哪些事項(xiàng)：DMSO快速稀釋會對細(xì)胞造成滲透性損傷,，使存活率下降50%,。對于DMSO凍存的細(xì)胞，復(fù)蘇后應(yīng)緩慢稀釋成細(xì)胞懸液：1）凍存液：培養(yǎng)基=1:1稀釋成細(xì)胞懸液后離心,，然后重懸至培養(yǎng)皿中培養(yǎng),，隔天換液；2）凍存液：培養(yǎng)基=1:10稀釋成細(xì)胞懸液,，不用離心,，直接放置到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)2-4小時后，換液,。上述兩種方法都是比較常用的細(xì)胞復(fù)蘇方法,，后者更適用于原代細(xì)胞或比較難養(yǎng)的細(xì)胞。液氮內(nèi)的細(xì)胞凍存較長時間不要超過半年,，凍存在液氮中的細(xì)胞應(yīng)一段時間內(nèi)進(jìn)行更替,。一個細(xì)胞系在培養(yǎng)一個月后，可復(fù)蘇一管新的細(xì)胞確保其質(zhì)量沒有發(fā)生太大變化,，傳代幾次后,，再凍存留種,。

無血清細(xì)胞凍存液與含血清細(xì)胞凍存液對比：傳統(tǒng)的細(xì)胞凍存液是使用培養(yǎng)基,、血清和DMSO按照一定的比例混合，其中DMSO的含量是10%,，血清的含量是10%,，統(tǒng)稱為含血清細(xì)胞凍存液。含血清細(xì)胞凍存液的一般的凍存方法是梯度降溫凍存法,，如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘,，然后移至-20℃冰箱30分鐘，再移至-80℃冰箱保存16-18個小時（或隔夜）,，較后才移至液氮罐中進(jìn)行長期的儲存,。可見,，含血清細(xì)胞凍存液凍存細(xì)胞時遇到的問題：1.凍存細(xì)胞時需現(xiàn)配凍存液(如購買市面上通用的含血清細(xì)胞凍存液,，此步可省略)。2.需要程序降溫（4℃→-20℃→-80℃→液氮）,，步驟繁瑣,，耗時耗力。3.含血清，細(xì)胞污染(病毒,、霉菌和支原體等)的風(fēng)險(xiǎn)更高,。4.血清批次、品質(zhì)間差異導(dǎo)致凍存液的批次間差異,。5.需液氮凍存,，且不能原位（如孔板）凍存。無血清凍存液使用方法：加入適量的細(xì)胞凍存液,，重懸細(xì)胞,，調(diào)節(jié)密度至1-5x10*↑/mL。

細(xì)胞凍存：取出凍存管,，注明細(xì)胞名稱,，代數(shù)，日期,。離心后,，以無菌吸管吸棄上清，不要吸到底部的細(xì)胞沉淀,。將細(xì)胞沉淀與凍存液充分混勻,，根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果，將細(xì)胞總數(shù)調(diào)節(jié)成細(xì)胞數(shù)量為5-10*105/ml為宜,。將細(xì)胞凍存懸液分裝進(jìn)細(xì)胞凍存管中,，一般2ml的凍存管中裝入1-1.5ml凍存液為宜。嚴(yán)密封口后,，使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,，使溫度每分鐘大約降低1℃?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入異丙的醇凍存盒中，然后將凍存盒置于–80℃條件下過夜,。若無凍存盒及其他凍存裝置,，可以先將凍存管置于4℃30min，再-20℃凍存1h直至完全冷凍,，再轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過夜,。第二天將已經(jīng)冷凍的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到液氮容器中，置于液氮上方的氣相空間中儲存當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時,，可增至-5 ℃～-10℃/min,。之前。金華南昌無血清細(xì)胞凍存液

無血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品性能：不含牛血清,，無動物源組分,。蘇州正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液報(bào)價

無血清凍存液通用于各種動物細(xì)胞株（tumour細(xì)胞和常規(guī)細(xì)胞）,，凍存細(xì)胞可在-80℃長期保存（>5年）。配方成分明確,，不含動物來源性蛋白,，不含血清，可減少各類細(xì)菌,、病毒和支原體等污染,，保證凍存細(xì)胞的安全。該凍存液含DMSO,、葡萄糖等各種細(xì)胞營養(yǎng)成分,，提高細(xì)胞存活率和活力，亦適合于無血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞,。該產(chǎn)品添加了細(xì)胞沉降穩(wěn)定劑,，可延緩細(xì)胞在凍存過程中的沉降速率，防止細(xì)胞互相擠壓,，影響細(xì)胞凍存效果,。另外，添加了細(xì)胞膜保護(hù)劑,、滲透性細(xì)胞膜內(nèi)保護(hù)劑,、非滲透性細(xì)胞保護(hù)劑等多種冷凍保護(hù)劑，這些成分在溶液中同水分子結(jié)合,，發(fā)生水合作用,，弱化水的結(jié)晶過程使溶液的粘性增加從而少冰晶的形成，能較大降低細(xì)胞在凍存過程中冰晶對于細(xì)胞的損傷,，有效提高細(xì)胞復(fù)蘇存活率,。該產(chǎn)品配方成分明確，不含血清,、不含動物源性蛋白,，可減少各類細(xì)菌、病毒和支原體等污染,，保證凍存細(xì)胞的安全；不光適用于常規(guī)細(xì)胞系,、原代細(xì)胞,，同時亦適合于無血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞。蘇州正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液報(bào)價