新型土壤總RNA快速提取試劑盒:獨特裂解劑/裂解液迅速裂解細胞和滅活細胞內核酸酶,,然后RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于玻璃奶,,然后將粗純化的玻璃奶轉移到離心柱,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,漂洗液將腐植酸,、細胞代謝物,、蛋白等雜質去除,,較后低鹽的洗脫緩沖液將純凈RNA從硅基質膜上洗脫,。試劑盒特點:離心吸附柱內硅基質膜全部采用進口世界有名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,,可重復性好,。克服了國產試劑盒膜質量不穩(wěn)定的弊端,。兼容性強,,適用于各種不同的土壤、糞便以及其他soil.不需要使用有毒的苯酚等試劑,,也不需要乙醇沉淀等步驟,。快速,,簡捷,,單個樣品操作一般可在1小時內完成。多次柱漂洗確保高純度,,OD260/OD280典型的比值達1.9以上,,可直接用于PCR,Northern-blot和各種酶切反應~RNA提取試劑注意事項:需自備氯仿,,異丙醇,,DEPC,,75%乙醇(DEPC水配制),和DEPC水,。武漢正規(guī)RNA提取試劑生產廠家
RNA提取濃度不高或質量不佳原因及解決辦法:1,、RNA降解:可能是提取樣本本身降解,或者是在提取過程中導致的降級,;應當盡可能使用新鮮樣本進行RNA提取,,采集的樣本應當及時置于液氮或者-80℃冰箱凍存,并減少反復凍融,。在RNA提取過程中應當使用RNase/DNasefree的吸頭,、離心管及其他材料,提取過程盡可能的快,,提取后的RNA應置于冰盒上并及時放于-80凍存,。如提取后的RNA需要進行凝膠電泳檢測,則應提取好后立刻進行電泳,,電泳緩沖液應更換新配制的,。2、鹽及有機溶劑殘留:提取試劑中含有酚及胍鹽,,洗滌液中含有乙醇,,在提取過程中裂解液吸棄不徹底,洗液沒有充分晾干導致的,,殘留的鹽及有機溶劑對后續(xù)的逆轉錄和PCR均存在不同程度的壓制作用,,因此在提取過程中應充分去除組織裂解液,洗滌時應充分,,使管壁四周均能被洗滌到,,另外管子空離和吹風是必須的步驟,會進一步降低有機物殘留,。杭州正規(guī)RNA提取試劑產品介紹RNA提取試劑:能夠作RNA印跡分析,、斑點雜交、poly(A)+選擇,。
植物,、動物、人類都存在RNA干擾現象,,這對于基因表達的管理,、參與對病菌傳染的防護、控制活躍基因具有重要意義,。RNA干擾是一個生物過程,,在這個過程中雙鏈RNA以一種非常明確的方式壓制了基因表達。自1998年發(fā)現以來,RNA干擾已經作為一種強大的“基因沉默”技術而出現,。RNA干擾作為研究基因運行的一種研究方法已被普遍應用于基礎科學,,它可能在將來產生更多更新的醫(yī)治方法??茖W家認為,,RNA干擾技術不僅是研究基因功能的一種強大工具,不久的未來,,這種技術也許能用來直接從源頭上讓致病基因“沉默”,,以醫(yī)治病癥甚至一些病,在農業(yè)上也將大有可為,。
植物RNA提?。褐参锝M織中,富含酚類化合物,,或富含多糖,,或含有某些尚無法確定的次級代謝產物,或RNase的活性較高,。這些物質在細胞裂解后與RNA緊密結合形成難溶復合物或者膠狀沉淀,,很難將其去除。所以我們在提取植物組織時,,要選取針對植物的試劑盒,,試劑盒里的裂解液能有效解決多酚易氧化、多糖化合物與核酸分離等難題,。1,、植物的果皮、果肉,、種子,、葉片等要在研缽中充分研磨,,研磨過程中液氮要及時補充,,避免樣品融化,研磨后的樣品應迅速加入裂解液中震蕩混勻,,避免RNA降解,。2、像水稻及小麥葉片等富含纖維的樣本,,則應適當減少提取用量,,否則組織研磨及裂解不徹底,會使提取的RNA產量較低,。3,、含水分較多的植物組織例如石榴果實、西瓜果實,、桃子果實等則應當適當提高樣本量(可選100~200mg),。4,、植物組織,如植物葉片,、根莖,、堅硬的果實等材料一般建議使用液氮在研缽中徹底研缽成份,再繼續(xù)進行提取步驟,。常規(guī)的組織勻漿機對植物組織的勻漿效果可能不佳,,一般不建議使用。RNA提取試劑注意事項:TRIReagent抽提總RNA的同時,,理論上也可抽提蛋白和DNA,。
總RNA提取試劑試劑能促進不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,,可見許多介于7kb和15kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優(yōu)勢核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),,低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S),。當抽提的RNA用TE稀釋時其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,,28S的位置大約在2kb,,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大,。注意事項:樣品用總RNA提取試劑勻漿后,,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個月以上,。保存在75%乙醇中的RNA沉淀,,2-8°C可以保存一周,-20°C條件下可以保存1年,。RNA半衰期比較短,,容易降解,建議提取后盡快進行后續(xù)實驗,,如反轉錄成cDNA,,NorthernBlot等。在細胞中,,RNA種類繁多,。根據結構功能的不同,RNA主要分三類,,即tRNA,、rRNA,以及mRNA。武漢RNA提取試劑直銷廠家
很多RNA也需要通過堿基配對原則形成一定的二級結構乃至三級結構來行使生物學功能,。武漢正規(guī)RNA提取試劑生產廠家
rRNA是細胞內的一種基本RNA,,與r蛋白一起構成蛋白質合成的場所—核糖體。隨著rRNA基因序列越來越了解,,其在生物研究中也的得到了更普遍的應用,,主要表現在生物進化研究和分子流行病研究。(1)rRNA在生物進化上的研究,。rRNA具有高度保守性,,且普遍存在于各種生物中,rRNA提供了足夠的序列信息?,F在還可用于在細菌分類,、細菌鑒定等方面。(2)rRNA在分子流行病上的研究,。目前,,人們已經把rRNA在進化上的普遍差異應用到了流行病學研究方面,通過對不同細菌進行鑒定分類,,從而明確病因,,追蹤傳染源,進一步控制及預防疾病,。武漢正規(guī)RNA提取試劑生產廠家