鼠尾膠原備用膠凝程序:1)在冰上放置以下物品:膠原蛋白I、無(wú)菌10×PBS,、無(wú)菌蒸餾水,、無(wú)菌1MNaOH。2)確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積,。3)在冰上放置無(wú)菌管以收存膠原蛋白I,。4)在無(wú)菌條件下執(zhí)行以下步驟。4.1加入10×PBS(終體積/10)mL4.2計(jì)算要使用的膠原蛋白I的體積(不要添加到管中直到步驟4.6為止)終體積x終膠原蛋白I濃度(mg/mL),。4.3向10×PBS溶液中加入(要加入的膠原體積×0.023)mL的無(wú)菌冰冷1MNaOH,。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無(wú)菌冰冷蒸餾水:添加蒸餾水體積=V(終)—V(膠原蛋白)—V(10×PBS)—V(1MNaOH)4.5混合管中的物質(zhì)并放入冰中,。4.6加入膠原蛋白I并計(jì)算體積,,混勻,冰上備用。5)膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時(shí),。6)使用時(shí),,無(wú)菌條件下將溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min。制備鼠尾膠原:取大鼠尾巴洗凈,,75%酒精浸泡5分鐘。太原正規(guī)鼠尾膠原價(jià)格
鼠尾膠原簡(jiǎn)介:鼠尾I型膠原蛋白(Collagenfromrattail,TypeI)系采用Birkedal-Hansen方法在無(wú)菌下制備,,純度達(dá)到95%以上,,可溶于0.006mol/L乙酸。本品可用于細(xì)胞培養(yǎng)皿的包被,,特別適合普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿不易貼壁細(xì)胞的培養(yǎng),;也可用于制備三維膠原凝膠,使細(xì)胞在模擬的三維環(huán)境中生長(zhǎng),。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):1,、SDS-PAGE分析純度大于95%。2,、無(wú)菌檢驗(yàn)結(jié)果為陰性,。3、本品2μg/cm2包被細(xì)胞培養(yǎng)皿后培養(yǎng)PC-12細(xì)胞,,貼壁及生長(zhǎng)正常,。4、本品濃度1mg/mL,,pH7.0時(shí)形成具有一定強(qiáng)度的三維膠原凝膠,,NIH-3T3細(xì)胞在三維凝膠內(nèi)生長(zhǎng)正常、PC-12細(xì)胞在三維凝膠表面生長(zhǎng)正常,。唐山鼠尾膠原平均價(jià)格吸去生理鹽水,,將尾腱稱重(0.5-1克)。
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng):通過(guò)醋酸抽提,、氯化鈉沉淀,、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿,,培養(yǎng)一些在普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞,。也可用于制備三維膠,模擬真實(shí)的生長(zhǎng)環(huán)境,,使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長(zhǎng),。1,在使用鼠膠原蛋白型包被的細(xì)胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細(xì)胞的貼壁和生長(zhǎng),。1mg/ml濃度以上,,pH左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度的三維膠,檢查到NIH-3T3細(xì)胞在三維膠內(nèi)正常生長(zhǎng)、PC-12細(xì)胞在三維膠表面正常生長(zhǎng),。使用方法:1,、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度:1-5ug/cm0.012mg/ml。按以下表格體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中,。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,并且制作簡(jiǎn)便,,成本低廉,。
鼠尾膠原,10mg包裝,,配制方法如下:1.配0.1M的乙酸溶液100ml,。即取575ul冰乙酸加超純水至100ml,容量瓶配制比較準(zhǔn)確,。2.用吸管吸取10ml剛配好的0.1M乙酸溶液(不要用*加,,吸十次不如加一次z準(zhǔn)確),加入盛膠原的瓶中,,輕輕顛倒,,不要震蕩,蛋白容易起泡,。幾分鐘即可,,蛋白質(zhì)非常好溶解。3.將膠原溶液移入事先壓好的玻璃瓶中,,比青霉素瓶大點(diǎn)的就行,。用*在瓶底加1ml氯仿,打到一檔就行,,避免加入氣泡,。然后4度過(guò)夜除菌。4.第二天將上層膠原溶液分裝進(jìn)EP管中,。用封口膜封口,,4度保存,勿冷凍,。鼠尾膠原蛋白的用途是什么:顧名思義,,鼠尾膠原蛋白是從老鼠尾巴提取出來(lái)的物質(zhì)。
鼠尾膠原的生物礦化和TEM觀察:果凍樣Ⅰ型膠原蛋白膠體初始浸泡在礦化液中時(shí)呈微白色,;礦化2d后,,膠體的顏色逐漸加深至乳白色;礦化6d后,,隨著羥基磷灰石晶體礦化長(zhǎng)入膠原纖維內(nèi)部,,膠體顏色加深至純白色,,并在膠體表面沉積了一層薄薄的羥基磷灰石鈣晶體,予鑷子夾起,,其表層羥基磷灰石鈣晶體破碎散落,。TEM表征顯示:礦化2d后,Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔周期性條紋結(jié)構(gòu)逐漸模糊,,羥基磷灰石鈣前體滲入膠原纖維內(nèi)部,,膠原纖維部分礦化,沿著膠原纖維生長(zhǎng),,忖度變深,;礦化6d后,Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔D-Band結(jié)構(gòu)完全消失,,膠原纖維內(nèi)部可以看到黑色羥基磷灰石晶體,嵌入膠原纖維縱向生長(zhǎng),。當(dāng)鼠尾Ⅰ型膠原纖維完全礦化時(shí),,由于整條膠原纖維都被羥基磷灰石鈣晶體占據(jù),膠原纖維呈現(xiàn)黑色,,選區(qū)衍射斑圖符合羥基磷灰石表征,。一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝,。成都鼠尾膠原推薦廠家
當(dāng)我們需要在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)放置小玻片,,制備細(xì)胞爬片時(shí),可在瓶底涂一層膠原,。太原正規(guī)鼠尾膠原價(jià)格
膠原蛋白是脊椎動(dòng)物和無(wú)脊椎動(dòng)物支持結(jié)構(gòu)的主要組成,。在人的身體中這是皮膚、筋,、軟骨,、骨骼及結(jié)締組織的較主要的蛋白質(zhì)。膠原蛋白占人體蛋白質(zhì)總量的三分之一,,不論來(lái)源于哪一種動(dòng)物或哪一種組織的膠原都有許多共同特性,。氨基酸組成中約有三分之一為甘氨酸,有脯氨酸和羥脯氨酸,。根據(jù)其遺傳分子結(jié)構(gòu)遺傳基因的差別,,膠原蛋白分為20幾個(gè)亞型。但較為常見(jiàn)的為Ι,、Π,、ΙΙΙ型膠原蛋白,即間質(zhì)膠原蛋白,。其中I型較為豐富且品質(zhì)優(yōu)良,。太原正規(guī)鼠尾膠原價(jià)格