外泌體的提取,、分離方法：開發(fā)高效,、快速,、穩(wěn)定，并且保持外泌體結(jié)構(gòu)和生物功能完整性的方法,，是目前外泌體應用于臨床的基礎和前提,。從細胞上清和體液中提取分離外泌體的方法很多，但是外泌體的純度和產(chǎn)量卻和分離方法息息相關,。通常分離步驟少、產(chǎn)率高,，但是純度會受到影響,。鑒于每種分離方法都有其優(yōu)缺點，實驗可以根據(jù)樣本來源,、下游實驗目的等,，選擇合適的外泌體分離方法。2015年,，國際囊泡組織(InternationSocietyforExtracelluarVesicles,ISEV)指出,，簡單依靠一種分離方法得到的外泌體的純度和產(chǎn)量都難滿足實驗的需求。因此,，推薦聯(lián)合使用各種方法,，從而得到高純度和高產(chǎn)量的外泌體?；罴毎置诘桨獾哪遗輼有◇w,，含有多種蛋白和核酸分子(DNA、RNA,、以及miRNA),。天津正規(guī)外泌體提取試劑報價

外泌體（Exosomes）是細胞分泌到胞外的一種囊泡（ExtracellularVesicles，EVs）,，其大小為30-150nm,，具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài)，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸,、蛋白和脂質(zhì)等）,，參與細胞間的分子傳遞,。外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，包括血液,、唾液,、尿液、乳汁等,，同時也存在于組織樣本中,，如腦組織、肌肉組織,、脂肪組織等,。腦組織分離方法簡述：將腦組織剪成薄片，放入離心管中加上消化液進行消化,，經(jīng)水浴,、反復輕輕上下顛倒，再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束,。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,，混勻，置于冰上,。再進行一系列的差速超速離心過程,，包括除雜、濾膜過濾,、超離等,。較后用PBS重懸外泌體，用重懸后的外泌體進行下面的透射電鏡（TEM）,、納米粒徑追蹤分子（NTA）和markerWB鑒定,。廣州外泌體提取試劑廠家用于外泌體提取的體液收集注意事項：選擇血清還是血漿？推薦大多數(shù)研究選擇血漿,。

外泌體在肺病進程中的作用：在一些病癥微環(huán)境中,，一些病癥細胞來源的外泌體能夠誘導CD4+T分化為調(diào)節(jié)性T細胞，壓制機體的抗一些病癥免疫反應,；肺病細胞分泌的外泌體含有miR-21和miR-29a,，可在免疫細胞中結(jié)合并啟動TLR8，使TLR介導的NF-κB信號通路活化,，從而導致一些病癥的生長和轉(zhuǎn)移,。在肺病的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中，細胞間通訊扮演著重要的角色,。據(jù)有關報道稱,，NSCLC分泌的外泌體內(nèi)TGFβ和IL10的高表達與肺病的轉(zhuǎn)移密切相關。此外，啟動的T細胞可以通過調(diào)控Fas信號通路增加基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP9）的表達,，進而促進肺病的轉(zhuǎn)移,。這些機制有望成為肺病治病的潛在靶點。雖然大多數(shù)外泌體都是促進一些病癥的侵襲與轉(zhuǎn)移,，但也有報道稱,，外泌體miR-302b可以通過壓制TGFβRⅡ來壓制肺病細胞的轉(zhuǎn)移與增殖。如純度和回收率低,，雜蛋白較多（假陽性）,，顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物

近年來,，隨著外泌體研究的不斷深入,，它的應用已經(jīng)涉及一些病癥治病領域、醫(yī)學基礎和免疫領域,、寄生蟲領域,；臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng)、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等,。外泌體來源及內(nèi)含物,。幾乎所有類型的細胞都可以分泌外泌體，同時外泌體也普遍存在于體液中,，包括血液,、眼淚、尿液,、唾液、乳汁,、腹水等,。目前研究發(fā)現(xiàn)外泌體中富含核酸（microRNA、lncRNA,、circRNA,、mRNA、tRNA等）,、蛋白,、膽固醇等。外泌體的表面marker主要有CD63,、CD81,、CD9、TSG101,、HSP27等,。外泌體鑒定。目前對于外泌體的鑒定主要有四種方法：透射電子顯微鏡（TEM）、Nanosight,、WesternBlot,、流式細胞術。外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,，不利于下游實驗,，難以普遍普及。

外泌體的形成與鑒定：首先,，細胞膜內(nèi)陷形成一個杯狀結(jié)構(gòu),，包括細胞表面蛋白和與細胞外環(huán)境相關的可溶性蛋白，導致早期胞內(nèi)體(early-sortingendosome,，ESE)的從頭形成,，或者是杯狀結(jié)構(gòu)直接和已經(jīng)存在的ESEs融合；trans-高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)也能協(xié)助形成ESEs,。ESE成熟后形成晚期胞內(nèi)體(late-sortingendosomes,，LSEs)，較終形成MVBs(也稱為多囊內(nèi)小體),。MVBs是通過endosome限制膜向內(nèi)凹(即質(zhì)膜雙凹)形成的,，這一過程導致MVBs含有多個ILVs。MVB可以與溶酶體或自噬體融合,，較終降解或與質(zhì)膜融合釋放作為外泌體的ILVs,。外泌體表面蛋白包括四聚體蛋白、整合蛋白,、免疫調(diào)節(jié)蛋白等,。外泌體可以包含不同類型的細胞表面蛋白、細胞內(nèi)蛋白,、RNA,、DNA、氨基酸和代謝物,。使用可截留100KD分子量的膜,，通過離心截留上清中的外泌體，截留完成后,。外泌體(Exosome)是從體液(尿液,、血液、唾液,、腹水,、胸腹水等)和細胞液中快速提取的。珠海外泌體提取試劑進貨價

早先應用于從血清等樣本中收集細菌,，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關,。天津正規(guī)外泌體提取試劑報價

外泌體鑒定：外泌體分離之后，需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體,。鑒定方法從物理特征到表面分子標志物,，多角度進行鑒定。l透射電鏡鑒定法：簡稱TEM,，適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察,，即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形。l納米顆粒追蹤分析法：簡稱NTA,，該方法能保證外泌體原始狀態(tài),、檢測速度快，檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息,。lWesternblot分子標志物檢測：外泌體標志蛋白包括四跨膜蛋白家族,，如CD9、CD63和CD81,；細胞質(zhì)蛋白,，如肌動蛋白（Actin）和鈣磷脂結(jié)合蛋白（Annexins）；天津正規(guī)外泌體提取試劑報價