細胞轉(zhuǎn)染為什么不能加血清：不同的細胞及轉(zhuǎn)染試劑要求轉(zhuǎn)染的條件是不同的,。較好是在靠前次實驗前做一個預實驗,，比如：HeLa，293,，CHO,，COS7,，MCF－7，HepG2等細胞,，是否加血清,，對不同的細胞是有不同的影響的，有些細胞是可以有血清的,，有些加血清就會受影響,。轉(zhuǎn)染后在6小時左右較好換液且換為有血清的培養(yǎng)基,，其一因為普通轉(zhuǎn)染試劑對細胞的毒性作用大，其二可降低因血清的缺乏引起的細胞的死亡,。轉(zhuǎn)染時不加血清是防止血清的干擾作用,，轉(zhuǎn)染后可適時加入。加入過早會引起未轉(zhuǎn)染細胞的優(yōu)勢生長,，過晚會引起較多細胞死亡,。可實時觀察1/5細胞變圓的時候加入血清其可降解性對體內(nèi)應(yīng)用也具有重要的意義,。徐州正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑直銷廠家

細胞轉(zhuǎn)染實驗簡介：實驗材料與器材：1,、材料293T細胞、MyoD表達質(zhì)粒和EGFP表達質(zhì)粒,、DMEM培養(yǎng)基,、鏈霉素/青霉素(雙抗)、FCS(小牛血清),、PBS(磷酸鹽緩沖溶液),、胰酶/EDTA消化液、轉(zhuǎn)染試劑(TransFast)2,、器材20ul/200ul/1ml微量移液器和Tip頭酒精燈,、廢液缸、血球計數(shù)板,、渦旋振蕩器,、恒溫水浴箱、臺式離心機,、35mm培養(yǎng)皿,、轉(zhuǎn)染管、15ml離心管,、觀察用倒置顯微鏡熒光顯微鏡和CCD。利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法較重要的就是防止其毒性,，因此脂質(zhì)體與質(zhì)粒的比例,，細胞密度以及轉(zhuǎn)染的時間長短和培養(yǎng)基中血清的含量都是影響轉(zhuǎn)染效率的重要問題，通過實驗摸索的合適轉(zhuǎn)染條件對于效率的提高有巨大的作用,。南昌正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑銷售廠家加入混合液,，將細胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時。

細胞轉(zhuǎn)染簡介：轉(zhuǎn)染,，是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種專門技術(shù),。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法,。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導,、化學介導和生物介導三類途徑,。電穿孔法、顯微注射和基因?qū)儆谕ㄟ^物理方法將基因?qū)爰毎姆独?；化學介導方法很多,，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法,、和多種陽離子物質(zhì)介導的技術(shù),；生物介導方法，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染,，和現(xiàn)在比較多見的各種細菌介導的轉(zhuǎn)染技術(shù),。

細胞轉(zhuǎn)染效率影響因素：1.細胞密度一般來說，當細胞密度達到60%～80%時進行轉(zhuǎn)染可以取得較高的轉(zhuǎn)染效率,，過低或過高都會影響轉(zhuǎn)染效果,。2.細胞生長狀態(tài)這點非常關(guān)鍵，很多時候傳代次數(shù)太少或者太多都將導致細胞對轉(zhuǎn)染試劑敏感度的改變,。因此,，為了提高轉(zhuǎn)染效率以及轉(zhuǎn)染穩(wěn)定性、降低細胞毒性,，應(yīng)盡量使用適度傳代的細胞系,，并在不同次實驗時保持細胞傳代次數(shù)的一致性。3.細胞種類不同細胞種類的細胞在做轉(zhuǎn)染時所需要的轉(zhuǎn)染體系是不同的,，不能一種體系用在所有類型細胞的轉(zhuǎn)染實驗,。當復合物接近細胞膜時，通過內(nèi)吞作用形成內(nèi)體進入細胞,。

細胞轉(zhuǎn)染方法：1.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷,，能與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子包裹入內(nèi),，形成DNA脂復合物,，也能被表面帶負電的細胞膜吸附，再通過融合或細胞內(nèi)吞進入細胞,。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細胞中,，是目前實驗室較方便的轉(zhuǎn)染方法之一，其轉(zhuǎn)染率較高,，優(yōu)于磷酸鈣法,。由于脂質(zhì)體對細胞有一定的毒性，所以轉(zhuǎn)染時間一般不超過24小時,。常用細胞類型：cos-7,、BHK、NIH3T3、Hela等2.電穿孔轉(zhuǎn)染法電流能夠可逆地擊穿細胞膜形成瞬時的水通路或膜上小孔促使DNA分子進入胞內(nèi),，這種方法就是電穿孔,。當遇到某些脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率很低或幾乎無法轉(zhuǎn)入時建議用電穿孔法轉(zhuǎn)染。一般情況下,，高電場強度會殺死50%-70%的細胞?，F(xiàn)在針對細胞死亡開發(fā)出了一種電轉(zhuǎn)保護劑，可以較大的降低細胞的死亡率,，同時提高電穿孔轉(zhuǎn)染效率,。在現(xiàn)生命可續(xù)研究中，大部分的工作是利用基因功能研究來探索生命過程,。無錫細胞高效轉(zhuǎn)染試劑價格

選擇傳代次數(shù)較低并處于對數(shù)生長期的細胞進行轉(zhuǎn)染,。徐州正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑直銷廠家

細胞轉(zhuǎn)染：(1)轉(zhuǎn)染試劑的準備A.將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘,，溶解脂狀物,。B.震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存，使用前還需震蕩,，,。(2)選擇合適的混合比例(1：1-1：2/脂質(zhì)體體積：DNA質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細胞。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基,。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA,，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩,。(3)將混合液在室溫放置10—15分鐘,。(4)吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次,。(5)加入混合液,，將細胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時。(6)到時后,，根據(jù)細胞種類決定是否移除混合液,，之后加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24-48小時。徐州正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑直銷廠家