細胞電轉(zhuǎn)染實驗的幾點建議：1.電場強度要合適合適的電場強度對于電轉(zhuǎn)染實驗非常重要，電場強度不能過高,，過高會增加細胞的死亡率,；也不能過低，過低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔,。不同細胞系具有不同的較佳場強值,，實驗前應(yīng)測定所轉(zhuǎn)染細胞系的較佳電場強度。2.細胞狀態(tài)要好用于電轉(zhuǎn)的細胞一般選取處于對數(shù)生長期的細胞（15代以內(nèi),，傳代后2d）,。因為處于對數(shù)生長期的細胞分裂旺盛，表面結(jié)構(gòu)致密比穩(wěn)定期的細胞差,，電轉(zhuǎn)后,，細胞膜的恢復(fù)能力強,，而且處于有絲分裂期的細胞更容易接受外源DNA~轉(zhuǎn)染試劑與細胞不匹配細胞轉(zhuǎn)染較適合的不是原代細胞,。廈門南昌細胞高效轉(zhuǎn)染試劑

細胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.不注意細節(jié)在轉(zhuǎn)染之前更換一次37℃預(yù)溫的培養(yǎng)基，可提高轉(zhuǎn)染效率,。脂質(zhì)體和DNA/RNA混合物應(yīng)當(dāng)一滴一滴地滴下來,，從培養(yǎng)皿一邊滴到另一邊，邊滴邊輕搖培養(yǎng)皿,，以確保均勻分布和避免局部高濃度,。這些都是一些細枝末節(jié)，但是,，如果不注意的話,，也會造成轉(zhuǎn)染效率低下。2.細胞狀態(tài)不好細胞狀態(tài)不好,，會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低下,。一般進行轉(zhuǎn)染的細胞應(yīng)該處于對數(shù)生長期。如果是貼壁細胞的話,，貼壁率應(yīng)該在70-80%,；如果是懸浮細胞的話，應(yīng)該是6X105個/孔（24孔板）,，一般是轉(zhuǎn)染前現(xiàn)在換液,，轉(zhuǎn)染前用無血清培養(yǎng)基或PBS洗細胞一次。轉(zhuǎn)染的整個過程都不應(yīng)該有物品,。細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家批發(fā)價重新接種于培養(yǎng)皿或瓶,，較好在轉(zhuǎn)染前4小時換一次新鮮培養(yǎng)液。

細胞轉(zhuǎn)染操作方法：轉(zhuǎn)染,，是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種專門技術(shù),。隨著基因與蛋白功能研究的深入,，轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo),、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑,。電穿孔法、顯微注射和基因?qū)儆谕ㄟ^物理方法將基因?qū)爰毎姆独?；化學(xué)介導(dǎo)方法很多,，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法,、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù),；生物介導(dǎo)方法，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染,，和現(xiàn)在比較多見的各種細菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù),。理想細胞轉(zhuǎn)染方法，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高,、細胞毒性小等優(yōu)點,。細菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法,，同時具有細胞毒性很低的優(yōu)勢,。但是，細菌轉(zhuǎn)染方法的準備程序復(fù)雜,，常常對細胞類型有很強的選擇性,，在一般實驗室中很難普及。

轉(zhuǎn)染的注意事項：細胞鋪板密度用于轉(zhuǎn)染的較佳細胞密度根據(jù)不同的細胞類型或應(yīng)用而異,。一般轉(zhuǎn)染時,，貼壁細胞密度為70%-90%，懸浮細胞密度為2×106-4×106細胞/ml時效果較好,。確保轉(zhuǎn)染時細胞沒有長滿或處于靜止期,。因為轉(zhuǎn)染效率對細胞密度很敏感，所以在不同實驗間保持一個基本的傳代步驟很重要,。鋪板細胞數(shù)目的增加可以增加轉(zhuǎn)染活性和細胞產(chǎn)量,。在三種不同密度進行細胞鋪板的比較表明鋪板密度較高的，CAT活性也較高,。得到較高活性所需的LIPOFECTAMINE試劑的量也相應(yīng)增加了,。這些結(jié)果說明，對于轉(zhuǎn)染相同量的DNA所需的較佳陽離子脂質(zhì)體試劑的量會因細胞密度而異,。表達水平與位臵無關(guān),，不會受到周圍染色體元件的影響。

細胞轉(zhuǎn)染的注意事項：血清A,、DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物形成時不能含血清,，因為血清會影響復(fù)合物的形成,。B、一般細胞對無血清培養(yǎng)可以耐受幾個小時沒問題,，轉(zhuǎn)染用的培養(yǎng)液可以含血清也可以不加,，但血清一度曾被認為會降低轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中加入血清需要對條件進行優(yōu)化,。C,、對于對血清缺乏比較敏感的細胞，可以使用營養(yǎng)豐富的無血清培養(yǎng)基,，或者在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中使用血清,。對血清缺乏比較敏感的貼壁細胞，建議使用**轉(zhuǎn)染試劑,。有條件的話,，可以用無血清培養(yǎng)基代替PBS洗細胞兩遍，注意洗的時候要輕,，靠邊緣緩緩加入液體,，然后不要吹吸細胞而是轉(zhuǎn)動培養(yǎng)板讓液體滾動在細胞表面。如果洗的太厲害,，細胞又損失一部分,，加了脂質(zhì)體后,，細胞受影響就更大了,，死亡細胞會增多對于轉(zhuǎn)染相同量的DNA所需的較佳陽離子脂質(zhì)體試劑的量會因細胞密度而異。貴陽正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家批發(fā)價

轉(zhuǎn)染試劑的準備①將400ul去核酸酶水加入管中,，震蕩10秒鐘,，溶解脂狀物。廈門南昌細胞高效轉(zhuǎn)染試劑

細胞轉(zhuǎn)染簡介：轉(zhuǎn)染,，是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種專門技術(shù),。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法,。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo),、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法,、顯微注射和基因?qū)儆谕ㄟ^物理方法將基因?qū)爰毎姆独?；化學(xué)介導(dǎo)方法很多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法,、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法,、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)；生物介導(dǎo)方法,，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染,，和現(xiàn)在比較多見的各種細菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù),。理想細胞轉(zhuǎn)染方法，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高,、細胞毒性小等優(yōu)點,。細菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法,，同時具有細胞毒性很低的優(yōu)勢,。但是，細菌轉(zhuǎn)染方法的準備程序復(fù)雜,，常常對細胞類型有很強的選擇性,，在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法,，則各有其特點,。廈門南昌細胞高效轉(zhuǎn)染試劑