細(xì)胞轉(zhuǎn)染常用步驟：1.轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備①將400ul去核酸酶水加入管中,，震蕩10秒鐘,，溶解脂狀物。②震蕩后將試劑放在－20攝氏度保存,，使用前還需震蕩,。2.選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細(xì)胞,。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA,，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑,，再次震蕩。3.將混合液在室溫放置10―15分鐘,。4.吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基,，用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次,。5.加入混合液,，將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時。6.到時后,，根據(jù)細(xì)胞種類決定是否移除混合液,，之后加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24－48小時是目前實(shí)驗(yàn)室較方便的轉(zhuǎn)染方法之一，其轉(zhuǎn)染率較高,，優(yōu)于磷酸鈣法,。合肥成都細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑

轉(zhuǎn)染技術(shù)：國際上推出了一些陽離子聚合物基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，以其適用宿主范圍廣,，操作簡便,，對細(xì)胞毒性小，轉(zhuǎn)染效率高受到研究者們的青睞,。其中樹枝狀聚合物(Dendrimers)和聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,，PEI)的轉(zhuǎn)染性能較佳，但樹枝狀聚合物的結(jié)構(gòu)不易于進(jìn)一步改性,，且其合成工藝復(fù)雜,。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機(jī)大分子，每相隔二個碳個原子,，即每“第三個原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,，使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”(protonsponge)體。這種聚陽離子能將各種報告基因轉(zhuǎn)入各種種屬細(xì)胞,，其效果好于脂質(zhì)聚酰胺,，經(jīng)進(jìn)一步的改性后，其轉(zhuǎn)染性能好于樹枝狀聚合物,，而且它的細(xì)胞毒性低,。大量實(shí)驗(yàn)證明，PEI是非常有希望的基因治好載體,。目前在設(shè)計更復(fù)雜的基因載體時,，PEI經(jīng)常做為中心組成成分。南京細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑直銷廠家大部分外源DNA會被核酸酶降解或隨細(xì)胞分裂而稀釋,。

細(xì)胞電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的幾點(diǎn)建議：1.電場強(qiáng)度要合適合適的電場強(qiáng)度對于電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)非常重要,，電場強(qiáng)度不能過高,，過高會增加細(xì)胞的死亡率；也不能過低,，過低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔,。不同細(xì)胞系具有不同的較佳場強(qiáng)值，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)測定所轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的較佳電場強(qiáng)度,。2.細(xì)胞狀態(tài)要好用于電轉(zhuǎn)的細(xì)胞一般選取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞（15代以內(nèi),，傳代后2d）。因?yàn)樘幱趯?shù)生長期的細(xì)胞分裂旺盛,，表面結(jié)構(gòu)致密比穩(wěn)定期的細(xì)胞差,，電轉(zhuǎn)后，細(xì)胞膜的恢復(fù)能力強(qiáng),，而且處于有絲分裂期的細(xì)胞更容易接受外源DNA~

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：物品(PS)物品,，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物,。這些物品一般對于真核細(xì)胞無毒,，但陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細(xì)胞的通透性，使物品可以進(jìn)入細(xì)胞,。這降低了細(xì)胞的活性,，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低。所以,，在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中不能使用物品,，甚至在準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染前進(jìn)行細(xì)胞鋪板時也要避免使用物品。這樣,，在轉(zhuǎn)染前也不必潤洗細(xì)胞,。對于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素,，ICIN選擇性物品的競爭性克制劑,。另外，為了保證無血清培養(yǎng)基中細(xì)胞的健康生長,，使用比含血清培養(yǎng)基更少的物品量一類是瞬時轉(zhuǎn)染,，一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（很長轉(zhuǎn)染）。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：血清A,、DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物形成時不能含血清,，因?yàn)檠鍟绊憦?fù)合物的形成。B,、一般細(xì)胞對無血清培養(yǎng)可以耐受幾個小時沒問題,，轉(zhuǎn)染用的培養(yǎng)液可以含血清也可以不加，但血清一度曾被認(rèn)為會降低轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中加入血清需要對條件進(jìn)行優(yōu)化,。C,、對于對血清缺乏比較敏感的細(xì)胞，可以使用營養(yǎng)豐富的無血清培養(yǎng)基,，或者在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中使用血清,。對血清缺乏比較敏感的貼壁細(xì)胞，建議使用**轉(zhuǎn)染試劑,。有條件的話,，可以用無血清培養(yǎng)基代替PBS洗細(xì)胞兩遍，注意洗的時候要輕,，靠邊緣緩緩加入液體,，然后不要吹吸細(xì)胞而是轉(zhuǎn)動培養(yǎng)板讓液體滾動在細(xì)胞表面。如果洗的太厲害,，細(xì)胞又損失一部分,，加了脂質(zhì)體后，細(xì)胞受影響就更大了,，死亡細(xì)胞會增多直到外源基因在細(xì)胞分裂過程中因各種因素丟失為止。深圳正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)貨價

對于原代細(xì)胞,，可用促有絲分裂刺激物進(jìn)行細(xì)胞活化,。合肥成都細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑

細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.準(zhǔn)備不足做脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的時候，在開展正式實(shí)驗(yàn)前要多做預(yù)試驗(yàn),，優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件,。優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件包括：脂質(zhì)體的用量、DNA密度,、細(xì)胞密度,、脂質(zhì)體和DNA混合孵育時間等等。2.電壓過大做電轉(zhuǎn)的時候,，如果電壓太大,，往往會發(fā)生細(xì)胞大量死亡的情況。不同的細(xì)胞,，需要的電壓是不一樣的,。這就要求我們多做預(yù)實(shí)驗(yàn)，多摸索條件,。對于大多數(shù)細(xì)胞來說,，其較佳電壓位于250-1250v/cm。另外,，就是進(jìn)行轉(zhuǎn)染的細(xì)胞應(yīng)該處于對數(shù)生長期,。處于對數(shù)生長期的細(xì)胞的抗損傷能力是較強(qiáng)的。細(xì)胞濃度應(yīng)該處于5x106到1x107／mL之間,。每次轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒應(yīng)該控制在4-6μg,，如果﹥10μg,，轉(zhuǎn)染效率也較大降低。電擊后,，應(yīng)該將DNA和細(xì)胞混合液在室溫下放置10分鐘,，使細(xì)胞恢復(fù)損傷。合肥成都細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑