細胞轉染那些事兒：1.設置陰性和陽性對照：一般在轉染后24-48h,靶基因即在細胞內表達,?？梢罁煌膶嶒災康模?4-48h后即可進行靶基因表達的檢測等實驗,。2.轉染后效率的檢測方法：觀察轉染后細胞熒光情況,；qPCR驗證,；WB檢測敲減或過表達蛋白。3.轉染效率低,，可采取以下兩種方法：1)復轉染,，即轉染后12-24h再進行轉染，前提是該細胞對脂質體的耐受性較好,，轉染后細胞死亡數較少,。2)通過藥篩來殺死未轉入成功的細胞，前提是該質粒帶有物品抗性的基因,。4.電轉時,，不同的細胞需要的電壓是不一樣的，需要做預實驗,，摸索較佳條件,。對于大多數細胞而言，較佳電壓位于250-1250v/cm,。電擊后,，應該將DNA和細胞混合液在室溫下放置10min,使細胞恢復損傷。通過實驗優(yōu)化合適的轉染條件對于轉染效率的提高很重要,。上海武漢細胞高效轉染試劑

細胞轉染的注意事項：細胞狀態(tài)這點非常重要，不要急于求成,，一定要讓細胞處于較佳的生長狀態(tài)再做,。有文獻說傳代不要超過17代。細胞復蘇后的3代左右時細胞狀態(tài)較好,，不要用傳了很多代的細胞去做,，細胞的形態(tài)都會發(fā)生變化。大多數已建立的細胞系都是非整倍體,，原代培養(yǎng)包括了表達不同基因組合的細胞的混合物,。細胞培養(yǎng)在實驗室中保存數月和數年后會經歷突變，總染色體重組或基因調控變化等而演化,。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化,。如果隨時間發(fā)現這種變化，融化一管新鮮的細胞可能會恢復原先的轉染活性,。因此,，如果觀察到轉染效率降低，可以試著轉染新鮮培養(yǎng)的細胞以恢復較佳結果,?；蛘撸瑤追N來源于經篩選,，轉染效率較高細胞亞系的細胞系現在有售杭州正規(guī)細胞高效轉染試劑單價瞬時表達分析檢測未重組質粒DNA上基因的表達,。

細胞轉染,，你至少要掌握以下幾點：主要有下面幾種方法：：化學法：磷酸鈣法、DEAE-右旋糖苷法,、陽離子脂質體法,；物理法：電穿孔法、顯微注射法,、顆粒傳遞法,；細菌介導法：逆轉錄細菌、腺細菌A.陽離子脂質體法：帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞,。特點：簡單通用,，適用性廣，轉染效率高,，重復性好,，但轉染時需除血清，轉染效率隨細胞類型變化大,。由于脂質體復合物與貼壁細胞的接觸機會遠大于懸浮細胞,，所以貼壁比懸浮轉染效率要高。懸浮細胞建議使用電穿孔法,。B.電穿孔法：利用高壓電脈沖對細胞膜的干擾,，使其形成利于核酸進入的微孔

細胞轉染的常用方法：人工脂質體法原理：帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物，進而可被細胞內吞穩(wěn)定轉染/瞬時性轉染,。這種方法幾乎適用于所有細胞,，轉染效率高、重復型好,，但轉染時需要去除血清,，轉染效果隨細胞類型變化大。實驗步驟：在單獨試管中分別稀釋核酸及轉染試劑→脂質體與核酸的磷酸骨架結合,，形成復合物→脂質體上的正電荷有助于復合物與細胞膜結合→復合物通過內吞作用進入胞漿→分析細胞瞬時基因表達或沉默情況,。其可降解性對體內應用也具有重要的意義。

如何提高細胞轉染實驗效率：優(yōu)化細胞生長狀態(tài)密切觀察您的細胞;確保它們狀態(tài)良好,。在開始轉染細胞之前,，先制定一個適當的種板方案，使細胞密度從轉染開始到結束都保持較佳狀態(tài),。增加成功幾率—細胞是轉染過程中的一個關鍵元素,，它可以是影響結果的一致性和質量的較重要的變量。此外,，還常用促有絲分裂刺激物(如,，細菌轉化，生長因子,，條件培養(yǎng)基,，以及滋養(yǎng)細胞)來活化原代培養(yǎng)細胞,。貼壁細胞相比較懸浮細胞—在轉染效率方面貼壁細胞和懸浮細胞之間的差異明顯。天生趨于懸浮的細胞(如HL60,，Jurkat)非常難以轉染,。相反，天生為貼壁的細胞(如HEK,，CHO)則可適應懸浮生長的條件,。脂質體轉染法陽離子脂質體表面帶正電荷。南京細胞高效轉染試劑銷售廠家

對于真核生物,，轉染就是原核生物中轉化的同義詞,。上海武漢細胞高效轉染試劑

影響轉染試驗的因素：1.轉染試劑跟細胞系不匹配轉染試劑跟細胞系也是講究配合默契的，使用同一種試劑,，不同細胞系轉染效率通常不同,。但細胞系的選擇通常是根據實驗的需要，因此在轉染實驗前應根據實驗要求和細胞特性選擇適合的轉染試劑,。每種轉染試劑都會提供一些已經成功轉染的細胞株列表和文獻,，通過這些資料可選擇較適合實驗設計的轉染試劑。當然,，較適合的是高效,、低毒、方便,、廉價的轉染試劑,。因為有些細胞系是不穩(wěn)定的，可能隨著培養(yǎng)時間的改變,，培養(yǎng)條件的不同，不同的選擇壓力,，可能引起不同的克隆選擇,。因此就算是同一個細胞系，在不同條件下轉染能力的差異可能會很大,。上海武漢細胞高效轉染試劑