關(guān)于細(xì)胞株和細(xì)胞系以及原代細(xì)胞的區(qū)別：1、獲取方法不同,，原代細(xì)胞是指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞,；細(xì)胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的培養(yǎng)物；細(xì)胞系是原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)開始傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體,。2,、原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了，細(xì)胞的生長(zhǎng)就會(huì)出現(xiàn)停滯,，大部分細(xì)胞衰老死亡,。但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過“危機(jī)”而繼續(xù)傳下去，這些存活的細(xì)胞一般能夠傳到40--50代,，這種傳代細(xì)胞叫做細(xì)胞株,；細(xì)胞株的遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生改變。當(dāng)細(xì)胞傳至50代以后又會(huì)出現(xiàn)“危機(jī)”,，不能再傳下去,。但是有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變，并且?guī)в凶兊奶攸c(diǎn),，有可能在培養(yǎng)條件下無限制地傳代下去,，這種傳代細(xì)胞稱為細(xì)胞系。要避免經(jīng)常翻動(dòng)和振動(dòng),，否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會(huì)脫落飄起,。石家莊正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒廠家推薦

懸浮型原代細(xì)胞：1）必須保持細(xì)胞的懸浮狀態(tài)?？梢酝ㄟ^增加培養(yǎng)液的黏度來幫助細(xì)胞呈懸浮狀態(tài),，如給培養(yǎng)液中加入低濃度的透明質(zhì)酸復(fù)合物,。在有攪拌裝置的培養(yǎng)器皿內(nèi)加入培養(yǎng)液，以5ml為較低限度,，否則攪拌時(shí)會(huì)產(chǎn)生氣泡對(duì)細(xì)胞造成傷害,。使用這種方式需注意勿使攪拌速度過快，否則即可使培養(yǎng)液溢出又容易造成污染,。如果培養(yǎng)液的量在5ml以下,，可以采用旋轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。給懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞換液時(shí)要注意不要吸出細(xì)胞,。2）能夠進(jìn)行懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞,，其生命力一般都比較旺盛，體外分裂增殖的速度較快,，營(yíng)養(yǎng)成分消耗大,，換液時(shí)間隔一般較短。溫州原代細(xì)胞分離試劑盒單價(jià)永生化細(xì)胞系通常具有更快的倍增時(shí)間并可持續(xù)地分裂,。

原代細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)：由于每種原代細(xì)胞培養(yǎng)的條件迥異,，而且每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都摸索出自己的培養(yǎng)條件，而對(duì)于一個(gè)特定的組織塊,，所用培養(yǎng)條件不一樣,，得出的所需細(xì)胞族群就不一樣，因?yàn)槊糠N組織塊都含有不同種類的細(xì)胞群,，而每一種細(xì)胞群在所選定的培養(yǎng)條件下（比如所選蛋白分解酶的種類和條件,，細(xì)胞因子的種類，基礎(chǔ)培養(yǎng)基的種類或者是培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)短）都會(huì)得出不同的結(jié)果,。由于各實(shí)驗(yàn)室采取不同的培養(yǎng)條件,，即使是同一塊心組織就有可能造成A實(shí)驗(yàn)室獲得30%的心肌細(xì)胞，70%其他種類細(xì)胞,，而B實(shí)驗(yàn)室卻能獲得70%所需心肌細(xì)胞,，30%為成纖維、脂肪等種類,。這樣的話,，即使是做同一項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)，就有可能得出相反的科學(xué)結(jié)論,。

膠原酶的配制：建議看相關(guān)的文獻(xiàn)進(jìn)行膠原酶的配制。小編常用的是DMEM進(jìn)行配制,，配制好的膠原酶消化液放置在37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱（注意現(xiàn)用現(xiàn)配）,。胰酶（酶聯(lián)合法獲取原代細(xì)胞中會(huì)加入胰酶，相關(guān)文章也蠻多的）膠原酶消化時(shí)間：根據(jù)組織特性,，消化時(shí)間會(huì)有差異,。以小鼠腎細(xì)胞為例，加入膠原酶Ⅰ進(jìn)行消化后，放入37℃培養(yǎng)箱中消化45min~1h左右,，期間每10min中震蕩一次,，知道組織塊幾乎完全消失為止（若是組織塊剪得非常細(xì)小，時(shí)間可以短一些,，30min左右即可）,。原代細(xì)胞的獲取：酶消化法：所用試劑：膠原酶和胰酶,。原代細(xì)胞是出了名的難養(yǎng),，對(duì)培養(yǎng)環(huán)境和實(shí)驗(yàn)操作的要求更苛刻,。

原代細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)：原代內(nèi)皮細(xì)胞提?。?)整個(gè)操作要在潔凈通風(fēng)的超凈臺(tái)下進(jìn)行,，所有的器材要高壓消毒。2)根據(jù)BALB/c小鼠的體重,，用10ml/kg3%濃度的戊巴比妥鈉麻醉,；將小鼠置于盛有75%乙醇的燒杯內(nèi)，這一步不僅可以消毒,，也可以讓小鼠體毛浸濕,，后續(xù)剃去皮毛的時(shí)候不會(huì)沾到剪刀或組織上。3)用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟,，裝有PBS的注射器插入心尖,，同時(shí)在右心耳處剪開一個(gè)小口，緩慢推動(dòng)注射器,，隨著心臟的跳動(dòng),，將體內(nèi)的血液沖洗出來。4)取出小鼠的肺部組織,，將肺組織切成小米粒樣的大小,，置于預(yù)冷的HBSS中反復(fù)沖洗幾次。5)將小米粒大小的肺組織置于培養(yǎng)瓶中（培養(yǎng)瓶前現(xiàn)在用1%明膠溶液包被培養(yǎng)面,，4度過夜,，小鼠處理前,，將培養(yǎng)瓶放置培養(yǎng)箱中，使其溫度恢復(fù)至37度）,，置于培養(yǎng)箱37度的環(huán)境下,，消化4個(gè)小時(shí)。只用于某些特定的細(xì)菌如豬傳染性腸胃炎細(xì)菌的培養(yǎng),。青島原代細(xì)胞分離試劑盒廠家推薦

原代細(xì)胞作為更接近體內(nèi)環(huán)境的研究模型,。石家莊正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒廠家推薦

原代細(xì)胞培養(yǎng)問題：1、細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，多久更換一次培養(yǎng)基這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度,。一般而言2-3天更換一次培養(yǎng)基，許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一,，周三,，周五更換培養(yǎng)基。注意：凍存細(xì)胞復(fù)蘇后,，在6-16小時(shí)內(nèi)更換培養(yǎng)基,，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡的細(xì)胞。2,、我能擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存原代正常人類細(xì)胞嗎,？這取決于細(xì)胞的類型。一些細(xì)胞類型像神經(jīng)細(xì)胞,，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和一些生長(zhǎng)緩慢的上皮細(xì)胞,，不推薦擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存。其它的細(xì)胞類型像成纖維細(xì)胞,、星形細(xì)胞,、腎系膜細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞等等,，可以擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存,。然而，需要注意的是再次凍存的過程可能導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)性能的改變,。3,、培養(yǎng)瓶中應(yīng)該加入多少體積的培養(yǎng)基？我們推薦的用量為：T-25培養(yǎng)瓶5ml,，T-75培養(yǎng)瓶15ml,，T-150培養(yǎng)瓶30ml。石家莊正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒廠家推薦