轉(zhuǎn)染的注意事項：培養(yǎng)基中的物品物品,，比如青霉素和鏈霉素,，是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物,。這些物品一般對于真核細胞無毒，但陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細胞的通透性,，使物品可以進入細胞,。這降低了細胞的活性，導致轉(zhuǎn)染效率低,。所以,，在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中不能使用物品,，甚至在準備轉(zhuǎn)染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品,。這樣，在轉(zhuǎn)染前也不必潤洗細胞,。對于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,，不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素，因為這些物品是GENETICIN選擇性物品的競爭性克制劑,。另外,，為了保證無血清培養(yǎng)基中細胞的健康生長，使用比含血清培養(yǎng)基更少的物品量,。大多數(shù)已建立的細胞系都是非整倍體,，原代培養(yǎng)包括了表達不同基因組合的細胞的混合物。細胞培養(yǎng)在實驗室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變,，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化,，這會導致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細胞行為的變化。如果隨時間發(fā)現(xiàn)這種變化,，融化一管新鮮的細胞可能會恢復原先的轉(zhuǎn)染活性,。比如，新鮮融化的NIH3T3細胞比傳代8次的細胞表現(xiàn)出更高的轉(zhuǎn)染效率，融化細胞的進一步傳代并沒有降低轉(zhuǎn)染效率,。因此,，如果觀察到轉(zhuǎn)染效率降低，可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細胞以恢復較佳結(jié)果由于脂質(zhì)體對細胞有一定的毒性,，所以轉(zhuǎn)染時間一般不超過24小時,。上海細胞高效轉(zhuǎn)染試劑單價

細胞轉(zhuǎn)染為什么不能加血清：傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染試劑一般會增加細胞的通透性，這樣會把血清中的成分帶入細胞,，造成細胞毒性,。陽離子脂質(zhì)體，轉(zhuǎn)染的過程是帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內(nèi)吞,。血清中含有大量的蛋白質(zhì),，在轉(zhuǎn)染過程中，帶負電的蛋白質(zhì)可能干擾陽離子脂質(zhì)體對核酸的吸附,，影響轉(zhuǎn)染效率,。同時，也會將血清中的蛋白帶入細胞,，引發(fā)細胞毒性,，故不能有血清轉(zhuǎn)染。這些轉(zhuǎn)染試劑要求在轉(zhuǎn)染前換無血清培養(yǎng)基,，轉(zhuǎn)染后4-6h在更換成有血清培養(yǎng)基,，這其實是為了減輕轉(zhuǎn)染造成的細胞毒性和轉(zhuǎn)染效率的降低。蕪湖北京細胞高效轉(zhuǎn)染試劑瞬時轉(zhuǎn)染后,，可在48h-72h細胞長滿之后,，提取細胞蛋白或者RNA。

細胞轉(zhuǎn)染的常用方法：人工脂質(zhì)體法原理：帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物,，進而可被細胞內(nèi)吞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染/瞬時性轉(zhuǎn)染,。這種方法幾乎適用于所有細胞，轉(zhuǎn)染效率高,、重復型好,，但轉(zhuǎn)染時需要去除血清，轉(zhuǎn)染效果隨細胞類型變化大,。實驗步驟：在單獨試管中分別稀釋核酸及轉(zhuǎn)染試劑→脂質(zhì)體與核酸的磷酸骨架結(jié)合,，形成復合物→脂質(zhì)體上的正電荷有助于復合物與細胞膜結(jié)合→復合物通過內(nèi)吞作用進入胞漿→分析細胞瞬時基因表達或沉默情況。

轉(zhuǎn)染的注意事項：有血清時的轉(zhuǎn)染血清一度曾被認為會降低轉(zhuǎn)染效率,，但只要在DNA-陽離子脂質(zhì)體復合物形成時不含血清,，在轉(zhuǎn)染過程中是可以使用血清的。轉(zhuǎn)染過程在兩步中需要使用培養(yǎng)基做為稀釋液：在DNA-陽離子脂質(zhì)體復合物準備過程以及復合物同細胞接觸過程,。在開始準備DNA和陽離子脂質(zhì)體試劑稀釋液時要使用無血清的培養(yǎng)基,，因為血清會影響復合物的形成,。但在復合物形成后，在加入細胞中前可以加入血清,。陽離子脂質(zhì)體和DNA的較佳量在使用血清時會有所不同,，因此如果你想在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中加入血清需要對條件進行優(yōu)化。大部分細胞可以在無血清培養(yǎng)基中幾個小時內(nèi)保持健康,。對于對血清缺乏比較敏感的細胞,，可以使用一些營養(yǎng)豐富的無血清培養(yǎng)基，或者在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中使用血清,。對于真核生物,，轉(zhuǎn)染就是原核生物中轉(zhuǎn)化的同義詞。

如何有效提高細胞轉(zhuǎn)染實驗效率：1.選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑不同細胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同,，但細胞系的選擇通常是根據(jù)實驗的需要,，因此在轉(zhuǎn)染實驗前應根據(jù)實驗要求和細胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑。每種轉(zhuǎn)染試劑都會提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細胞株列表和文獻,，通過這些資料可選擇較適合實驗設計的轉(zhuǎn)染試劑,。當然，較適合的是高效,、低毒,、方便、廉價的轉(zhuǎn)染試劑,。2.保持較佳的細胞狀態(tài)一般低的細胞代數(shù)（<50）能確?；蛐筒蛔儭］^適合轉(zhuǎn)染的細胞是經(jīng)過幾次傳代后達到指數(shù)生長期的細胞,，細胞生長旺盛,，較容易轉(zhuǎn)染。細胞培養(yǎng)在實驗室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變,，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化,。這會導致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細胞行為的變化,。也就是說同一種系的細胞株,，在各實驗室不同培養(yǎng)條件下，其生物學性狀發(fā)生不同程度的改變,，導致其轉(zhuǎn)染特性也發(fā)生變化,。因此，如果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染效率降低,，可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細胞以恢復較佳結(jié)果,。能與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子包裹入內(nèi),。蕪湖北京細胞高效轉(zhuǎn)染試劑

這會導致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細胞行為的變化,。上海細胞高效轉(zhuǎn)染試劑單價

細胞轉(zhuǎn)染實驗簡介：實驗材料與器材：1,、材料293T細胞、MyoD表達質(zhì)粒和EGFP表達質(zhì)粒,、DMEM培養(yǎng)基,、鏈霉素/青霉素(雙抗)、FCS(小牛血清),、PBS(磷酸鹽緩沖溶液),、胰酶/EDTA消化液、轉(zhuǎn)染試劑(TransFast)2,、器材20ul/200ul/1ml微量移液器和Tip頭酒精燈,、廢液缸、血球計數(shù)板,、渦旋振蕩器,、恒溫水浴箱、臺式離心機,、35mm培養(yǎng)皿,、轉(zhuǎn)染管、15ml離心管,、觀察用倒置顯微鏡熒光顯微鏡和CCD,。利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法較重要的就是防止其毒性，因此脂質(zhì)體與質(zhì)粒的比例,，細胞密度以及轉(zhuǎn)染的時間長短和培養(yǎng)基中血清的含量都是影響轉(zhuǎn)染效率的重要問題,，通過實驗摸索的合適轉(zhuǎn)染條件對于效率的提高有巨大的作用。上海細胞高效轉(zhuǎn)染試劑單價